¡Descarga Efecto hook o gancho 2 y más Diapositivas en PDF de Endocrinología solo en Docsity! LIMITACION DEL INMUNOANALISIS Los fabricantes de inmunoensayos pasan un tiempo importante determinando qué técnica de inmunoensayo es la más apropiada para un analito específico con el fin de asegurar resultados de calidad superior. En muchas instancias, se modifica una técnica particular, quizás con el agregado de un componente especial del reactivo, para combatir algunos obstáculos comunes y así obtener resultados óptimos. A veces estos desafíos se deben a sustancias que interfieren, presentes en la sangre, problemas inherentes a la tecnología de medición y/o a técnicas de laboratorio LIMITACION DEL INMUNOANALISIS EFECTO MATRIZ Se define como el conjunto de alteraciones ocasionadas por los diversos componentes de la muestra, a excepción del analito a determinar. Cabe destacar los siguientes : Factor reumatoide: Interfieren de forma aún no conocida con las determinaciones de hormonas tiroideas, entre otras. Complemento: Complejo grupo de proteínas que se elevan en procesos inflamatorios y que pueden bloquear el sitio de unión a anticuerpos. Lisozima: Responsable de la formación de puentes entre el anticuerpo unido a fase sólida y el anticuerpo marcado, induciendo resultados falsamente elevados. Proteínas de unión endógenas: La albúmina, prealbúmina, globulina fijadora de hormonas sexuales, globulina fijadora de tiroxina y globulina fijadora de Cortisol entre otras, pueden ocasionar alteraciones en las medidas hormonales. Así por ejemplo las variaciones extremas de la albúmina pueden alterar la medida de las concentraciones de hormonas tiroideas libres. AUTOANTICUERPOS: Anticuerpos contra la hormona que se van a cuantificar, que pueden interferir en la reacción antígenoanticuerpo y dar lugar a resultados falsamente aumentados o disminuidos, dependiendo del diseño del inmunoanálisis y de si presentan mayor o menor afinidad por la hormona que el anticuerpo del reactivo. Se han descrito autoanticuerpos frente a hormonas tiroideas, antitiroglobulina, antiinsulina, antiTSH, antiparathormona, etc., en pacientes que han recibido la hormona con fines terapéuticos o con enfermedades autoinmunes. Es muy frecuente la formación de la denominada macroprolactina, complejos formados por prolactina e inmunoglobulina, responsables de la sobreestimación de esta hormona en un gran número de ocasiones. ANTICUERPOS HUMANOS ANTIRATÓN (HAMA) (Anticuerpos Heterófilos) Estos anticuerpos pueden estar presentes en la sangre humana como consecuencia de la respuesta inmunológica del cuerpo al estar expuesto a antígenos de ratón. Existen varias razones para que un sistema inmunológico humano produzca anticuerpos para “combatir” antígenos invasores que derivan de la exposición a ratones. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales del ratón se usan en algunos tratamientos para el cáncer. Un sistema inmunológico humano también puede producir una respuesta a los ratones si el paciente está en contacto con ellos. También es común la exposición ambiental a los ratones. A. Sin interferencia B. Falsamente elevado C. Falsamente baje
Ac de detección Ac de detección Ac de detección
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—= Ac heterófilo
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EFECTO HOOK O GANCHO Se produce de forma ocasional cuando la concentración del antígeno a determinar es inusualmente elevada y uno o ambos anticuerpos quedan saturados antes de que se forme el sándwich, induciendo resultados falsamente disminuidos.
Concentración Ag-Ac*
Señal aparente infravalorada
El exceso de Ag satura los anticuerpos, evitando la formación del
sandwich. La señal obtenida se halla infravalorada.
15 º º º º º º º FASE ESTACIONARIA FASE MÓVIL 1 2 TIPOS DE CROMATOGRAFÍA C. solido – liquido: la fase estacionaria es un solido y la móvil un liquido. C. liquido – liquido: la fase estacionaria es un liquido anclado a un soporte solido. C. liquido – gas: la fase estacionaria es un liquido no volátil impregnado en un solido y al fase móvil es un gas. C. solido – gas: la fase estacionaria es un solido y la móvil un gas. CROMATOGRAFÍA LIQUIDA DE ALTA PRESIÓN (HPLC) En el laboratorio de hormonas es frecuente el uso de la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) en el que la fase móvil empleada es un líquido que pasa a través de una columna mediante la aplicación de presión por parte de una bomba.
Columna de HFLE
cromatograma
Estación de Data
computarizados
solvente
(fase móvil)
reservorio
