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Lez 1_ struttura e funzionamento microscopio - Estratto del documento

Slide, Microscopia

Invia: 1 settembre 2010
Estratto
TECNICHE DI MICROSCOPIA TECNICHE E COLTURE CELLULARI COLTURE
a.a. 2007/2008 Docente: Fabio Maria Guarino Fabio.guarino@unina.it

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Tecniche di Microscopia e Colture Cellulari - FM GUARINO - 2007/08

Modalità di svolgimento
•Lezioni teoriche •Esercitazioni di laboratorio •Esame con test multirisposta

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Suggerimenti bibliografici sulla microscopia
• Scala C., Pasquinelli G., Cenacchi G (1995). Microscopie in biologia e in medicina. CLUEB, Bologna • Bonucci E. (1990). Manuale di istochimica. Edi Lombardo, Roma • Appunti presi a lezione • Per approfondimenti: Le tecniche microscopiche nello studio delle caratteristiche strutturali e funzionali delle cellule in coltura (2000). A cura di A. Molinari, G. Arancia. Roma, Centro stampa De Vittoria (pubblicazione dell’Istituto Superiore della Sanità) • Siti web, ad esempio:
• http:///micro/home.nsf/ • http://micro.magnet.fsu.edu/primer/anatomy/introduction.htlm • http://o.it/italiano/lma/teoria.htm
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Principali tappe nell’evoluzione della microscopia
Inizio 1600 Primi microscopi ottici (forse da parte dei fratelli Janssen) • 1665 Hooke descrive le cellule (pori) nel sughero con un microscopio ottico composto • 1674-1683 Leeuwenhoek osserva protozoi, sangue, batteri, etc. con un microscopio semplice • 1839. Schwann osserva cellule cartilaginee nelle larve di anfibio e getta le basi della teoria cellulare (la cellula è l’unità base della struttura di tutti gli organismi) • 1858. Prime osservazioni sulla divisione cellulare. Virchow completa la teoria cellulare affermando: “omnis cellula e cellula” • 1870 Dopo aver introdotto negli anni precedenti l’uso del condensatore, Abbe derivò la
formula del potere di risoluzione del micr. ottico • 1886 primo microtomo rotativo • 1892 Zeiss realizza il primo stereomicroscopio • 1905 Kohler realizza il primo microscopio a UV • 1911 Reichert presenta il primo microscopio a fluorescenza • 1932 Zernicke pone le basi per la costruzione del m. a contrasto di fase • 1935 Knoll et al. gettano le basi teoriche per la costruzione del m. elettronico a trasmissione • 1938 Vengono prodotti i primi modelli commerciali di microscopi elettronici a trasmissione (Siemens) e criostati (Morgensen) • 1952 Nomarski propone l’uso del contrasto interferenziale nella m.ottica • 1953 Zernicke ottiene il Nobel per la Fisica • 1965 Primo esemplare commerciale di m. elettronico a scansione • post 1970: avvento della microscopio confocale e dei sistemi di analisi di immagine (videomicroscopia digitale) • 1986 Knoll e Ruska vincono il premio Nobel per il contributo dato per la micr. elettronica
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Il microscopio ottico: struttura e principi di funzionamento

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A cosa serve il microscopio ?

A guardare degli oggetti piccoli, ma soprattutto guardare ad aumentare il potere di risoluzione dei nostri occhi ad

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Risoluzione e ingrandimento
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0,2 mm
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Occhio umano

Potere di risoluzione
la distanza minima entra la quale due oggetti risultano separati 0,2 µm Microscopio ottico 0,2 nm Microscopio elettronico
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Il microscopio ottico composto

oculari

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obiettivi Tavolino portaoggetto Condensatore con diaframma

Sorgente luminosa (con diaframma di campo)

Manopole macro- (int) e micrometrica (est)

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I Tubi

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Tubo Monoculare Tubo Tubo Binoculare Tubo Tubo Foto Binoculare Tubo Tubo Ergonomico Tubo Tubi speciali Tubi
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Gli Oculari
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L’oculare è un semplice oculare un ingrandisce l’immagine ingrandisce dall’obiettivo. Sull’oculare dall obiettivo

sistema di lenti che “vede” ed ed del campione già ingrandita ingrandita ci sono varie sigle

Ingrandimento (8x, 10x, 12,5x) Ingrandimento Indice di campo (18, 20, 22, 25mm) Indice Per l’osservazione con o senza Per osservazione occhiali occhiali Regolabili Regolabili

L Plan 10x/20

L Plan 10x/25
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I due oculari devono essere posizionati in base alla propria distanza interpupillare, in modo da avere un unico campo visivo e non due separati (come nella foto)

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A cosa serve l’indice di campo?
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… per calcolare il diametro del campo oggetto osservabile, che è uguale a indice di campo ingrandimento dell’obiettivo e si esprime in mm.

Esempio: un obiettivo 10x combinato con un oculare 20x permette di osservare un campo oggetto del diametro di 2 mm

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Obiettivi
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Sopra ogni obiettivo sono riportate diverse sigle e numeri, la cui disposizione dipende dalla casa costruttrice. In figura è mostrato un esempio del significato della simbologia
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