Apuntes sobre la Virología, Apuntes de Microbiología. Centro de Estudios Universitarios Monterrey
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Apuntes sobre la Virología, Apuntes de Microbiología. Centro de Estudios Universitarios Monterrey

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Apuntes de Microbiología sobre la Virología, Características generales de los Virus, Propiedades generales, Tecnicas de ennumeración de virus, Ciclo infectivo de un virus: procesos comunes durante la infeccion.
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VIROLOGÍA - prof Filip Lim

Tema 21: CaracterÃ−sticas generales de los Virus:

Historia:♦

La viruela es el agente virico mas antigüo conocido. Desde el Siglo X hasta 1979, siendo la unica enfermedad humana erradicada.

Vaccina como Vacuna: en 1718 Lady Montagu fue la primera en usar una “vacuna”, usando pus de algunos animales o humanos infectados en sus propios hijos. Fue a finales de ese siglo en el que Jenner lo hizo definitvamente.

En 1892 se distinguen entre enfermedades bacterianas y “otras” por agentes que no quedaban atrapados en el filtro y por tanto eran mas pequeños.

Los postulados de Koch se aplicaron en virologia, pero no se cumplen como en bacterias (ejemplo: papiloma virus y cancer).

El acido nucleico se determina como portador de la información.⋅ Infectan cualquier tipo de celula, eukarya, bacteria o archaea.⋅

⋅ Propiedades generales:♦

Un virus es un biosistema elemental que:⋅ posee genoma (ácido nucleico).• capacidad de adaptación a cambios

medioa mbientales.

no puede capturar y almacenar energÃ−a libre.• no es funcionalmente activo fuera de su célula huésped.•

No son tangibles. Una especie viral y un virus no son lo mismo. Hay una gran variabilidad genetica en los viriones.

Según ICTV (International Committee on Taxonomy of Viruses) NO SON SERES VIVOS, pues toman prestadas caracteristicas funcionales de una

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celula mayor o mas compleja. Las categorias taxonomicas son:⋅

especie• género• familia• orden• no hay mas categorias porque al ser tan simples no se pueden agrupar en grupos mayores en funcion a caracteristicas comunes.

La estructura es, de mayor a menor:⋅ Acido nucleico y enzimas (si las hay)• Capside (capsula proteica)• Tegumento• Envoltura lipidica (sin ella no hay tegumento).•

Hay 3 tipos de estructuras viricas:⋅ Helicoidal (alargada)• Icosaedrica (forma de icosaedro)• Complejas (estilo fago)• Tamaño y forma muy variables.• Hay virus muy pequeños, y los hay de mayor tamaño que algunas bacterias.

⋅ ♦ Genomas viricos

Tamaño del genoma: desde 3,2kb (Parvovirus) hasta 1,2Mb (Mimivirus).⋅ El genoma puede ser RNA o DNA.⋅ Sus genomas pueden ser:⋅

Cadenas simples• Doble circular• Lineal segmentado/multipartido.•

Tecnicas de ennumeración de virus:♦

Crecimiento: dependiendo del tipo de virus, la fuente de crecimiento y purificación puede variar: cultivos celulares (animales, plantas, bacterias), tejidos animales o de plantas, embriones…

Purificación: el vius puede encontrarse mayoritariamente en el interior de una celula o en el exterior.

Cuantificación:⋅ PartÃ−culas fÃ−sicas por microscopÃ−a electrónica, analisis de proteÃ−na, RNA, DNA, prueba de hemaglutinación...

PartÃ−culas infectivas por detección de transferencia génica (inmunocitoquÃ−mica, actividad enzimática).

PartÃ−culas productivas enumeradas en ensayos de•

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placas

de lisis o titulación por el punto final. Términos importantes:⋅

UFP: unidades formadoras de placas (pfu en ingles)• MDI: multiplicidad de infección (moi en ingles)• DL50: dosis letal media para infectar animales (LD50 en ingles)• particula / ufp: medida de la infectividad•

⋅ Ciclo infectivo de un virus: procesos comunes durante la infeccion.♦

Fijación (absorción)⋅ Penetración.⋅ Fase de ECLIPSE / latencia (el virus ha entrado y se ha liberado el material genético. En esta fase el virus no es infectivo para otras celulas)

Replicación del genoma.⋅ Transcripción y Traducción.⋅ Fase de Maduración (Poco a poco van produciéndose y rellenándose las partÃ−culas virales).

Empaquetamiento del genoma (suele ser simultáneo al ensamblaje).⋅ Liberación.⋅

Rendimiento: entre varias y varias miles de partÃ−culas por célula infectada◊ Varias formas de multiplicación viral:◊

Lisis de la celula huesped (en algunos casos, depende de factores del hospedador: hormonas, anticuerpos.)

Persistencia (todas las células producen poco virus ó unas pocas producen mucho y mueren por la infección.)

Latencia (desaparece el virus casi por completo y subsiste en forma silenciosa. Factores externos lo hacen reactivarse.)

Localización del genoma viral:◊ citoplásmica• nuclear - episomal ó integrado (aleatoria ó dirigida)•

Cuando hablamos de infecciones a animales, consideramos: infecciones agudas, crónicas, recurrentes…

APOPTOSIS inducida o inhibida por el virus.◊

Clasificación y Clasificación Molecular Biológica♦

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Al principio, según enfermedades provocadas (tejido, modo de

infecci ón, transmisión)

CaracterÃ−sticas que se consideran para la taxonomÃ−a viral:◊ naturaleza del huésped (animal, planta, bacteria)• tipo de ácido nucleico (DNA o RNA).• número de cadenas.• simetrÃ−a de la cápsida.• presencia o no de envuelta.• diámetro de la nucleocápsida o del virión.• simetrÃ−a.• respuesta inmune que activa.• localización intracelular de la replicación viral.• tipo de enfermedad que causa o modo de transmisión.•

Actualmente (2008), la ICTV divide a los virus en 5 órdenes, 82 familias, más de 307 géneros y de 2083 especies según el sistema de Baltimore u otros criterios. “Una especie de virus es una clase politética que constituye un linaje de replicación y que ocupa un nicho ecológico particular”

Nombres:◊ Orden: acaba en virales (Caudovirales, Herpesvirales, Mononegavirales, Nidovirales, and Picornavirales)

Familia: acaba en viridae⋅ subfamilia: virinae• el género y especie en virus.•

OrtografÃ−a: el nombre aparece en itálica y la primera letra de la primera palabra en Mayúscula, siempre que nos refiramos al virus como taxón y no como partÃ−cula

PartÃ−culas SubvÃ−ricas y Priones♦

VIROIDES - virus de RNA circular pero sin proteÃ−na◊

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SATELITES - un virus satélite utiliza tanto la célula en la que se reproduce como el virus del que depende para su reproducción. El virus satélite del mosaico del tabaco utiliza al virus del mosaico del tabaco y empeora la enfermedad en la planta

Virusoides - RNA circular como los viroides pero dependen de otro virus

Virofagos - Sputnik inhibe la replicación del mamavirus• PRION (Proteinaceous infectious particle). El agente infeccioso es una proteÃ−na de 33-35 kDa. Al parecer actúa produciendo un cambio conformacional de una proteÃ−na precursora celular PrP. Además de la encefalopatÃ−a espongiforme bovina, se encuentra el SCRAPIE en ovejas o el KURU o SÃ−ndrome de CREUTZFELDT-JAKOB en humanos.

TeorÃ−as sobre el origen y evolución de los virus♦

Los virus infectan los 3 dominios de Vida: Archaea, Bacteria y Eucariota, indicando un origen muy temprano en la evolución de vida. Sin embargo, los virus actuales contienen proteÃ−nas, y por lo tanto deberÃ−an haber aparecido después de la ribosoma (después de la aparición de células).Las diferencias existentes entre los diferentes tipos vÃ−ricos indican más de una forma posible en el origen de los virus. Las caracteristicas comunes de muchas de las especies vÃ−ricas actuales pueden provenir de especies comunes anteriores

Evolución por Escape: los virus provienen del material genético celular que, de alguna forma, lograra escapar del control celular para poder perpetuarse de forma independiente. Esta teorÃ−a va apoyada en el hecho de que algunos virus, como retrovirus, tienen secuencias muy similares a genes de organismos superiores

Evolución Retrógrada: algún virus complejo (vaccinia, herpes) pudo ser originariamente una célula o proto-célula de RNA que parasitara otra de mayor complejidad y que, poco a poco, se fuera haciendo más especÃ−fica, perdiendo estructuras para garantizar su efectividad en el crecimiento. Los virus de RNA, al ser parasitos de las células ganadoras de evolución, podrÃ−an ser los unicos restos de células de RNA que se eliminaron en el concurso selectivo. Los mimivirus podrÃ−an ser los restos de células de DNA de un cuarto dominio extinguido.

TEMA 22: Virus Bacterianos:

Generalidades♦

Fagos: entidades biologicas mas numerosas (hasta 109/ml en algunas zonas marinas, el 70% de las bacterias marinas infectadas).

Los bacteriofagos podrÃ−an mantener el equilibrio de las bacterias en el ecosistema.

Fagoterapia, agua con propiedades curativas⋅

Clasificación♦ ♦

Acidos Nucleicos

Morfologia

Familia

5

DNA lineal doble cadena (ds)

sin envoltura

colas contractiles

Myoviridae

colas no contractiles

Siphoviridae

Podoviridae

icosaedricos sin cola

Tectiviridae

baciliforme

Rudiviridae

con envoltura

baciliforme

Lipothrixviridae

DNA circular doble cadena

sin envoltura

icosaedricos

Corticoviridae

forma de limon

Fuselloviridae

con envoltura

pleomórficos

Plasmaviridae

DNA circular

cadena simple (ss)

sin envoltura

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filamentosos

Inoviridae

icosaedricos

Microviridae

RNA lineal ss

sin envoltura

icosaedricos

Leviviridae

RNA segmentado ds

con envoltura

esfericos

Cystoviridae

♦ ◊ Bacteriófagos con genoma de cadena sencilla

Fagos con RNA• Fagos muy sencillos con 3-4 genes, pueden infectar Enterobacterias.

RNA que actúa como mensajero.♦ Se sintetiza inmediatamente, tras la infección, la RNA replicasa.

Se sintetiza formas intermedias +RNA (FORMA REPLICATIVA):

de la forma -RNA se sintetiza nuevamente miles de copias +RNA.

unas copias +RNA actúan como mensajeros y otras vuelven al inicio del ciclo.

Ejemplo: MS2 (infecta E.coli, primero genoma secuenciado, primero gen secuenciado (CUBIERTA))

Una proteÃ−na (MADURACIÓN) colabora en la adsorción, y otros 3 genes codifican para la RNA replicasa, proteÃ−na de la CUBIERTA y la proteÃ−na de LISIS.

La proteÃ−na LISIS está codificada por un gen que solapa con el de la cubierta y el de la replicasa (frecuente en virus pequeños).

Sólo cuando se ha sintetizado la proteÃ−na de la cubierta, el RNA se “relaja” y se hace accesible el sitio de inicio de la proteÃ−na de lisis (se evita la muerte prematura de la célula).

Fagos con DNA monocatenario♦

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M13 infecta Enterobacterias⋅ SimetrÃ−a helicoidal. Tiene 6 nm de diámetro y 860 de longitud.• Infectan a través de La Pili.• No es lÃ−tico, infección de forma permanente que produce fagos continuamente

Posee DNA circular (+), se forman ciertos bucles por apareamientos de bases complementarias

El ciclo replicativo es complejo: mecanismo de CIRCULO RODANTE.

En algunos casos puede integrarse en el genoma bacteriano.• Solapamiento de genes• FORMAS REPLICATIVAS de dsDNA. El DNA (-) producido puede utilizarse para sintetizar mRNA. Además de virones normales, todas las preparaciones contienen viriones con DNA de: menos de un genoma; varios genomas; genomas defectivos

BIOTECNOLOGÍA: secuenciación de DNA, vector de expresión, “display” de proteinas → “nanowires”

FX174 infecta Enterobacterias⋅ SimetrÃ−a icosaédrica con proyecciones en algunos vértices.• Tiene ssDNA (+).• Primer genoma secuenciado totalmente por FREDERICK SANGER en 1977.

También tiene genes solapantes.• La replicación se realiza también mediante CIRCULO RODANTE.

En el proceso de replicación del cÃ−rculo rodante, la proteÃ−na A produce un nick en el extremo 3' de la cadena (+), convirtiéndose en cebador (primer) para iniciar la sÃ−ntesis de nuevas cadenas lineales de ssDNA, mediante rotación de la estructura.

Al completar una vuelta, la proteÃ−na A vuelve a cortar y ligar los extremos.

Fagos con DNA de cadena doble♦

Muchos son del orden Caudovirales:⋅ Virión sin envoltura⋅ Cápsida icosaédrica (CABEZA) proteica que contiene una molécula de dsDNA.

Un tubo helicoidal para la adsorción e inyección del DNA dentro de la célula huesped (COLA).

Un CONECTOR que une ambos elementos.⋅ LAMBDA (l)⋅

Genoma DNA lineal bicatenario, con extremos cohesivos (COS): en posición

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5' de cada extremo tiene unos 12 nucleótidos sin aparear Adsorbción mediante receptores codificados por el gen lamB de E. coli. Sirven normalmente para la entrada de maltosa y se expresan sólamente en presencia de maltosa en el medio.

Interacción de lambda con los receptores se mejora con iones de magnesio Mg++

Al•

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infectarse una bacteria, el DNA del fago se circulariza y empieza la expresión del genoma. Replicación lÃ−tica primero en forma q (o Cairns), y luego cÃ−rculo rodante

LISOGENIA♦ Fago ATEMPERADO, puede entrar en ciclo LISOGÉNICO, el DNA viral esta integrado en el genoma celular y se replica con el celular. En este estado el virus se denomina como PROFAGO. La célula se hace INMUNE contra otra infección por el mismo tipo de fago.

La integración del fago (sitio att) ocurre en un sitio único del cromosoma bacteriano (distinto a los extremos COS).

mientras dura la lisogenia, procedimientos que dañen el DNA, como la luz UV, pueden inactivar el profago y la célula será CURADA completamente.

En el genoma viral, el producto de cI (REPRESOR LAMBDA) inhibe la transcripción del gen cro, (y del resto de las proteÃ−nas virales).

En el genoma viral, hay 3 sitios (OR1, OR2, OR3) donde el Represor puede unirse: primero se une al sitio 1, esto favorece la unión al segundo Represor al sitio 2 (porque el Represor puede formar dimeros) y, finalmente, al sitio 3 cuando hay altas concentraciones de Represor. El sitio 3

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bloquea la transcripción del Represor (gen cI) y asi autorregula el nivel de Represor. De forma completamente inversa se une la proteina Cro a esos sitios. La preferencia de la proteina Cro para unirse al sitio 3 bloquea la transcripción del Represor (gen cI) y elimina la posibilidad de lisogenia. La inducción del ciclo lÃ−tico se realiza mediante agentes que dañen el DNA bacteriano, como la luz UV. Se activa el mecanismo de reparación de la bacteria denominado SOS. Una de las proteÃ−nas implicadas, la RecA actúa como proteasa degradando a la proteina Represor, permitiendo la expresión de Cro y los otros genes del ciclo lÃ−tico.

(2) ENTEROBACTERIOFAGO T4:◊ ◊ La serie T: se enfocaron los estudios en 7

fagos lÃ−ticos (T1 - T7) para poder comparar resultados:

Autónomamente virulentos ( T-pares y T5) - provocan cese del metabolismo bacteriano durante la infección

Virulento dependientes (T1, T3 y T7) - dependen de la continuación del metabolismo bacteriano durante el ciclo lÃ−tico

Fagos T-pares: el genoma no contiene citosina sino 5'- hidroximetilcitosina, que evita la degradación por nucleasas bacterianas

(2) T4:• Las moléculas replicadas se aparean en los extremos y formando una molécula de DNA más larga denominada concatámero.

Concatémeros de T4 se cortan por una enzima que no corta sitios especÃ−ficos, sino que lo hace cuando la cabeza del virión está llena. (en cambio la enzima del T7 reconoce sitios especÃ−ficos sobre el DNA)

Los genomas lineales de T4 existen en permutaciones circulares

(3) T7:•

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Replicación y regulación similar a T4, pero bastante más pequeño y simple.

Codifica sus propias DNA y RNA polimerasas (usos en biotecnologÃ−a)

Solapamientos genéticos♦ Mediante repeticiones terminales se forman concatémeros similares a los deT4, pero el corte posterior de los concatémeros es especÃ−fico.

(4) FAGO P1:◊ Como T4, tiene permutaciónes circulares.⋅ Como lambda, puede entrar en lisogenia tras circularizarse, pero NO SE INTEGRA en el genoma bacteriano (infecta E.coli)

Debido al origin de replicación viral, en el estado lisogénico, la forma circular del genoma (codifica para un represor) se replica junto a la bacteria

Está implicado en transducción: Puede encapsidar hasta un 2-2,5% del genoma de la bacteria. El origin de replicación de P1 se ha empleado para clonar y fragmentos grandes de DNA (hasta 300 Kb), en vectores llamados PACs (P1 artificial chromosomes) en la secuenciación del genoma humano.

(5) ENTEROBACTERIOFAGO: Mu:◊ El nombre de Mu se debe a que es un fago MUTADOR

Tras la infección el DNA circulariza y se puede producir ciclo lÃ−tico ó lisogénico (ambos requieren integración del genoma).

Para la integración se corta de forma “cohesiva” el DNA celular, con 5 bases desplazadas, que, al integrarse el fago, se rellenarán, duplicándose en 5 bases el DNA celular.

Actúa como un elemento TRANSPOSÓNICO.

El DNA viral integrado se corta llevando DNA celular para llenar la cápsida

⋅ TEMA 23: Virus Animales I.

♦ Generalidades Multiplicación: adsorción, penetración, descapsidación, replicación, transcripción, traducción, ensamblaje de las cápsidas y

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liberación de virus. Liberación por lisis (influenza) o gemación (HIV)◊ Latencia (HSV)◊ Interacción con el sistema inmune◊ Algunos virus están estrechamente relacionados con procesos oncogénicos

La mayorÃ−a de los virus estudiados pueden modificar la muerte celular programada (apoptosis)

Detección:♦ Metodos Directos:⋅

Inmunodeteccion:• Directa o indirecta (con antibodies marcados. La segunda usa anticuerpos secundarios (ventaja exclusivamente economica)).

ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay): consiste en usar una placa de plastico con pozillos en los que hay un sustrato con anticuerpos afines al virus)

Otros: PCR, MicroscopÃ−a electronica…

Serologicos: No detecta al virus, sino los anticuerpos que reaccionan con sus antigenos:

Estado de la infección con virus que no pueden ser cultivados (ej: HCV)

Estado del sistema inmune frente a la infección.

Crecimiento y Purificación:♦ ♦ Principalmente 3 métodos para crecer y purificar virus:

◊ Cultivos celulares (el más común): en lÃ−neas celulares transformadas. Para detección existen celulas reporteras(Ej: gen de la Luciferasa. Al insertarse en el DNA celular el promotor virico actua como promotor de otros genes celulares (en este caso, Luciferasa) y se empieza a sintetizar esos genes a tutiplen por la propia accion del virus, lo que siempre es un buen indicador).

Inoculación en animales (muy costoso y como último recurso)

Cultivos sobre embriones (normalmente en huevos,

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como con el virus de la gripe). Clasificación de Baltimore:

Ciclo Replicativo

♦ Adsorción• Muchos virus tienen especificidad por un (o pocos) tipo concreto de células (rhinovirus, poliovirus…)

Los receptores celulares para virus suelen agruparse en tipos de moléculas concretos, siendo la SUPERFAMILIA DE LAS INMUNOGLOBULINAS, la más numerosa: CD4 para HIV; ICAM para rhinovirus; HveB para HSV…

En muchos casos, bloqueando esta interacción (mediante anticuerpos o fármacos), se inhibe la infección.

Otros virus tienen adsorción menos especÃ−fica y modos de entrar mas generales….

Penetración y descapsidación• Algunos virus - se elimina la cápsida y se libera el ácido nucleico.

El procedimiento final puede variar con el tipo viral (algunas

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veces depende de pH.) Con virus desnudos se puede producir un cambio conformacional durante la adsorción.

En virus con envuelta - fusión con la membrana celular.

En algunos casos, se produce una inclusión del virión en la cascada endosomal - escape posterior necesario.

Estrategias Replicativas

Virus de DNA

Muchos virus inhiben

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la sÃ−ntesis de macromoléculas celular para quedarse con toda la maquinaria de transcripción y traducción para su ciclo viral. El proceso de inhibición de la sÃ−ntesis de proteÃ−nas celular por el virus se denomina SHUT-OFF. Sin embargo, algunos virus pueden, incluso, estimular la sÃ−ntesis de DNA celular, llegando, incluso, a favorecer la

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transformación celular… Replicación no siempre en el núcleo celular - los poxvirus (vaccinia, viruela, genomas de 190 kb)

Virus de RNA

Estos virus tienen estrategias replicativas más variadas que los virus DNA, según si hablamos de virus de ssRNA (+), (-), ó dsRNA.

Retrovirus - TRANSCRIPTASA INVERSA (RT, reverse transcrpitase)

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que pasa RNA (+) a DNA Replicación de RNA normalmente en citoplasma por una REPLICASA viral

Influenza - nucleocápsida va al nucleo donde se replica el RNA

RNA polimerasas (transcriptasa) que transcriben un RNA (-) a (+) para que éste pueda ejercer de mRNA.

Algunos virus traducen un polipéptido que luego corta

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con enzimas especÃ−ficas. Traducción y ensamblaje de las cápsidas virales

Virus simples, una fase sÃ−ntesis de proteÃ−nas

Virus complejos - distintas fases de sÃ−ntesis de proteinas

IE (Inmediatamente

te

mprana)

E (Temprana)…………………… proteinas procedentes de genes IE, E

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están implicadas en la replicación viral y su regulación L (TardÃ−a)………………………… componentes estructurales del virus

Normalmente, el ensamblaje se produce de manera espontánea al sintetizarse las proteÃ−nas estructurales.

Tras sintetizarse la PROCÔPSIDA (cápsida vacÃ−a), lo siguiente que suele ocurrir es que ésta se llena con el genoma viral.

LA MORFOGÉNESIS (formación de

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nuevas partÃ−culas virales) varÃ−a: muchos virus RNA en citoplasma, en factorÃ−as especÃ−ficas, muchas veces asociadas a membranas (ej: poliovirus); virus DNA -HSV en el núcleo, poxvirus en el citoplasma. Liberación de los viriones

Por término general, los virus desnudos suelen lisar la célula al producir la progenie, mientras que los virus con

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envuelta pueden liberarse durante cierto tiempo manteniendo a la célula viable. En algunos casos donde el virus con envuelta posee glicoproteÃ−nas virales, éstas se pueden unir a membranas celulares y cuando el virus “roba” esta membrana, se lleva en ella dichas proteÃ−nas. Estas membranas celulares NO tienen por qué ser la citoplasmática

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(por ejemplo reticulo endoplasmático).

• TEMA 24: Virus Animales II:

Virus con DNA y envoltura membranosa

Poxvirus (ej: viruela)

Viruela es un miembro de la familia Poxviridae

Vaccinia es otro miembro, se usó como vacuna de viruela: virus ATENUADO (esto es, virus al que se la inhabilita la capacidad de virulencia.

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Se usa Vaccinia porque poose antigenos, pero no capacidad de enfermar al huesped) dsDNA lineal con envuelta (grupo I)

Viriones muy grandes - 300 nm, forma de ladrillo, virus animales mas grandes.

Replicación en citoplasma - rápida (12 horas).

Movilidad dentro la célula utilizando “cohetes de actina”.

• Herpesvirus◊ 8 miembros de la

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familia de Herpesviridae conocidos en humano:

HSV-1, HSV-2, Herpes simplex virus tipo 1 (labial) y tipo 2 (genital), tal vez > 70% personas tienen HSV-1

VZV Varicella Zoster: primera infección “varicela” (normalmente infancia), reactivación “herpes zoster”

EBV Epstein Barr Virus: virus del beso, está en casi todas las personas sin causar ninguna

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