Article Histologia Examen, Ejercicios de Histología. Universitat de Barcelona (UB)
gmirandac
gmirandac

Article Histologia Examen, Ejercicios de Histología. Universitat de Barcelona (UB)

7 páginas
8Número de visitas
Descripción
Asignatura: Histologia general, Profesor: Esther Pérez, Carrera: Medicina, Universidad: UB
20 Puntos
Puntos necesarios para descargar
este documento
Descarga el documento
Vista previa3 páginas / 7
Esta solo es una vista previa
3 páginas mostradas de 7 páginas totales
Descarga el documento
Esta solo es una vista previa
3 páginas mostradas de 7 páginas totales
Descarga el documento
Esta solo es una vista previa
3 páginas mostradas de 7 páginas totales
Descarga el documento
Esta solo es una vista previa
3 páginas mostradas de 7 páginas totales
Descarga el documento

Igf1 promou el creixement longitudinal d'os a causa de la insulina

accions augmentant la hipertròfia de condròcits

Jie Wang, Jian Zhou i Carolyn A. Bondy1

Branca de endocrinologia del desenvolupament, NICHD, Instituts nacionals de la salut, Bethesda, Maryland

20892, EUA

RESUM El creixement longitudinal de l'os, i per tant

estatura, són funcions de condrocitat de plaques de creixement

proliferació i hipertròfia. Creixement semblant a la insulina

El factor 1 (Igf1) reputació augmenta longitudinalment

creixement dels ossos estimulant el condròcit de plaques de creixement

proliferació En aquest estudi, però, ho demostrem

que els nombres de condròcits i la proliferació

són normals en ratolins nuls Igf1 malgrat una reducció del 35%

en la taxa de creixement ossi llarg. Igf1 nul hipertròfic

Els condròcits es diferencien normalment en termes de

expressant proteïnes especialitzades com el colágeno X

i la fosfatasa alcalina, però són més petits que el wildtype

a tots els nivells de la zona hipertròfica. El

Els condròcits hipertrófics terminals, que formen el

el bastidor sobre el qual s'estén el llarg creixement dels ossos

reduït en dimensió lineal en un 30% en ratolins null Igf1,

que representen la major part de la seva disminució longitudinal

creixement L'expressió de la glucosa sensible a la insulina

transportador, GLUT4, disminueix significativament

i l'enzim regulat per insulina glucogen sintasa

La quinasa 3b (GSK3) és hipoxrofosforada en Igf1 nul

condròcits Els nivells de glucógeno es van reduir significativament

i es van reduir els nivells d'ARN ribosomal

gairebé el 75% en Igf1 condròcits nuls. Aquestes dades

suggereixen que Igf1 promou el creixement ossi longitudinal

per les accions anabòliques "semblants a la insulina" que augmenten

hipertròfia de condròcits.-Wang, J., Zhou, J.,

Bondy, C. A. Igf1 promou l'os longitudinal

creixement per accions d'insulina augmentant el condròcit

hipertròfia. FASEB J. 13, 1985-1990 (1999)

Paraules clau: transportador de glucosa z IGF acció z insulina z proliferació

z epifisi z talla curta

La taxa de creixement ossi longitudinal s'aproxima

per la taxa de producció de nova placa de creixement

Condròcits vegades la mida mitjana de la terminal

condròcits hipertròfils (1-3). Aquest procés és

exquisidament sensible a la regulació per hormona del creixement

(GH), que pot produir alteracions de severalfold

en estatura per a adults. Factor de creixement similar a l'insulina 1

(Igf1, també coneguda com somatomedina C) és un factor important

mediador dels efectes de GH en el creixement longitudinal,

tot i que el seu mode d'acció continua sent controvertit. In

la "hipòtesi de somatomedina" original, es va proposar

que l'efecte primari de GH era estimular Igf1

producció pel fetge, amb Igf1 llavors responsable

per estimular l'expansió longitudinal del creixement

plaques de forma endocrina (4). Treball més recent

ha suggerit que GH pot actuar directament en el creixement

plat per amplificar la producció de condròcits

des dels precursors de la zona germinal i després induir-los

síntesi local d'Igf1, que es creu que estimula la

expansió clonal de columnes de condròcits en una

manera autocrina / paracrina (5). La noció que

El GH indueix el síndrome d'Igf1 de condròcits

desafiat, però, per la constatació que Igf2, més aviat

que Igf1, és sintetitzada per condròcits de plaques de creixement

in vivo (6, 7).

Tot i la incertesa sobre el seu mode d'acció,

Igf1 té clarament un paper important en longitudinal

creixement dels ossos, ja que es produeix l'eliminació del gen Igf1

nanisme en ratolins (8, 9) i estatura curta en extrem

humans (10). Per dilucidar el paper d'Igf1 en longitudinal

Creixement ossi, aquest estudi ha comparat el creixement tibial

i va analitzar les característiques de la placa de creixement tibial a

Igf1 ratolins de tipus silvestre i de llet salvatge.

MATERIALS I MÈTODES

Ratolins

Es va generar la línia de ratolí de supressió Igf1 utilitzada en aquest estudi

per Lynn Powell-Braxton a Genentech, Inc., San Francisco

(9), criat durant sis generacions en la soca CD1 obtinguda

Taconic Farms (Germantown, N.Y.), i mantingut al nostre

facilitat. Els ratolins es van utilitzar en un protocol aprovat pel

NICHD Comitè d'ús i cura dels animals i van ser assassinats per

Inhalació de CO2 entre les 1:00 i les 2:00 pm, 1 h després de l'intraperitoneal

3

La injecció de H-timidina (2 mCi / g) o BRDU (10 ml / g,

Calbiochem HCS24). Es van disseccionar els tibias, es van fixar en formalina,

descalcificat en EDTA, incrustat en parafina, i tallat longitudinalment

en seccions de 5 m que es van muntar sobre poli-Llysine-revestit

diapositives.

Morfometria

Les dimensions longitudinals de la tíbia i de la proximal

La placa de creixement tibial es va mesurar en fotomicrografies de

1 Correspondència: Branca d'endocrinologia del desenvolupament,

NICHD, NIH, Bldg. 10, Rm. 10N262, 10 Center Dr 1862,

Bethesda, MD 20892, EUA. Correu electrònic: bondyc @ exchange.

nih.gov

0892-6638 / 99 / 0013-1985 / 02.25 USD © FASEB 1985

anatòmicament empatat, seccions mitjanes preses als 5 i

2003. Per a les dimensions de la placa de creixement, tres diferents

es van prendre mesures, agrupades sobre la línia mitjana

cadascuna de les dues seccions per a cada animal; es deia la informació

per cada animal, després agrupat i significat per a cada grup.

Es va mesurar el diàmetre longitudinal del condròcit terminal

utilitzant micrografies preses al 4003. Es van realitzar mesures

només en cèl·lules amb transverses superiors i inferiors intactes

septa. Les fotografies eren coded i emmascarats abans de l'anàlisi, de manera que l'observador no sabia a quines formes de grup pertanyien.Histocèmia La immunohistoquímica va ser realitzada per l'avidin- biotinimmunoperoxidasemethod tal com s'ha descrit prèviament (11). Les seccions de teixit es van deparaffinizar, rehidratar i digerir 0.5% Trypsin (Sigma, St. Louis, Mo.) a 37 ° C durant 30 min més a la

immunoreactiva. Una reacció d'anticòs policlonal a l'únic domini de carboxil terminal del col · lagen Xwas un regal del Dr. Haronen (12). Els anticossos policlonals utilitzats per detectar BRDU, GLUT 4 i la forma fosina de serina de GSK-3b (9) es van obtenir de Chemicon (Temecula, Califòrnia). Els anticossos monoclonals que detecten formes botàctivas i inactives de GSK-3b es van obtenir de Laboratoris de transducció (Lexington, Ky.). Tots els anticossos primaris es van utilitzar a una dilució de 1: 200. Les seccions es van sincronitzar amb un anticòs secundari conjugat peroxidasa (1: 200) durant 30 minuts a temperatura ambient. El senyal es va detectar i amplificar utilitzant el mètode ABC peroxidase (Vector, Burlingame, Calif.) I es va visualitzar amb 3,39-diaminobenzidina. Les seccions es van comptar amb metil verd. Es van utilitzar incubacions paral·leles que omiten l'anticòs principal per establir el nivell de tinció de fons inespecífica. Les seccions deparaffinizadas es van submergir en la nuclear emulsió de Kodak NTB2 i es van exposar a 4 ° C durant 3 cm, desenvolupades, fixes i lleugerament contrarrestades amb hematoxilina per a la detecció de la incorporació de 3H-timidina nuclear. Les cèl·lules positives tenien 5 grans o més. Les diapositives es van emmascarar i es van codificar a les denominacions de grup de concreció abans de l'anàlisi. La tinció histològica del glucogen es va realitzar mitjançant la reacció àcid periódico-Schiff (PAS). Les seccions es van deparafinir en primer lloc en xileno, es van rehidratar i es van oxidar en un període de 0,1% per 5 minuts. Després de rentar-se a l'aigua, es van tacar les diapositives en un 5,5% de la solució de Schiff (Sigma) durant 15 min i es va comptar amb hematoxilina. Per al control negatiu, les seccions paral·leles es van obtenir amb 0,5% a-amilasa (Sigma) a 37 ° C durant 90 min, abans de la tinció d'PAS. La positivitat del PAS va ser determinada per la presència de tinció de color fúcsia. La hibridació local es va realitzar com es va descriure anteriorment (7) utilitzant sondes ARN antisentido marcades amb 35S sintetitzades a partir de fragments de ADN corresponents als nucleòtids 4400-4515 del 28S- i als nucleòtids 715-794 de Els RNAgenes ribosomals 18S (Ambion, Austin, Tex.). Després de l'exposició a la emulsió Kodak NTB2 durant 3 dies, es van desenvolupar tobogues hibridades, fixes i contrarrestades amb hematoxilina i eosina. L'ARN es va caracteritzar mitjançant el recompte de grans de plata amb oli a 6303. L'anàlisi de dades per a cada grup (n54-8) s'expressa com a mitjà amb errors estàndard. Les diferències entre grups van ser analitzades mitjançant anàlisi de variància utilitzant Stat View 4.1 (Abacus Systems), seguit de les proves de diferència menys significatives de Fisher. Valor AP, 0.05 va ser considerat com a significatiu.RESULTS Morfometria de la placa de creixement i la proliferació de condrocis Per determinar la causa de la disminució del creixement del llac en el ratolí null Igf1, vam comparar la proliferació de condrocyte i la hipertròfia en plaques de creixement tibial a partir del dia 20 postnatal de ratolins nuls (WT) i Igf1 null. P20, figura 1, taula 1). P20 es va utilitzar perquè és el moment en què s'inicia el generador de creixement depenent de GH / IGF1. A més, la placa epiphysialcrowth és més activa en termes de proliferació aquesta vegada (13). Les cèl·lules de la placa de creixement epifisal demostren canvis centrals i morfològics sincronitzats, que es manifesten en zones característi- ques horitzontals. La zona germinal (GZ) Figura 1. Seccions representatives proximaltibia dels ratolins NX (C, D) P20 WT (A, B) i Igf1. Els teixits van ser tacats amb la tècnica de Massontrichrome en què el núcleari negre, el col · lagen és blau, i la matriu calcificada és vermella. Les característiques grossanatòmiques de l'os són molt nombroses, però les àrees funcionals de la placa de creixement són significativament diferents en ratolins WT i nuls (B, D). La zona germinal (GZ) s'amplia, ja que la zona hipertròfica (HZ) s'atenua a la placa de nul·la Igf1 en comparació amb WT (vegeu Taula 1). Bar 5 200 m per (A, B) i 50 m per (C, D). 1986 Vol. 13 de novembre de 1999 El diari FASEB WANG ET AL.consistents d'una prima capa de cèl·lules petites i indiferenciades, immediatament adjacents a l'os epifísic donant condecitos proliferatius riseto. Aquesta zona augmenta significativament en l'amplada i el número de cel·la a la placa de creixement Igf1null (Fig. 1, Taula 1). Aquesta expansió de la GZ es deu probablement a una activitat GH millorada en el ratolí null de l'Igf1, ja que l'Igf1 circulant normalment inhibeix la secreció de l'EC en un bucle de realimentació negativa. La zona proliferativa (PZ) està formada per columnes de condròcits que comparteixen ràpidament semblants a les piles de coins. La longitud de la PZ i el nombre de condròcits per columna són iguals als ratolins WT i Igf1null (Fig. 1 i Taula 1). El proliferació, valorat per l'índex d'etiquetatge de l'ADN (Taula 1), també és igual. Els condròcits de plaques de creixement es sotmeten a terminaldiferenciació com a condròcits hipertrófics, en última instància, augmenten d'alçada en la direcció del creixement de quatre a cinc (2, 3) abans que s'incorporin en bonane al final metafísic de la placa de creixement. La durada de la hipertrofia ziga Igf1 (HZ) es redueix en un 35%, encara que el nombre de cèl·lules hipertròfiques per columna és igual a WT (figura 1, taula 1). Els condròcits nuls d'Igf1 són obviamente més petits en tots els nivells de la HZ, amb un diàmetre longitudinal d'aquests hipertrofèxtils reduïts per un 30% (quadre 1). Aquest grau de deteriorament en la hipertròfia del condròcit es correlaciona amb la disminució de la taxa de desglossament longitudinal observada en ratolins null Igf1. El creixement de creixement dependent de la GH es produeix entre P20-40. Durant aquest període, la tíbia WT creix a una velocitat de 290 m / dia (de

13.360.5 a 19.160.8 mm), mentre que l'índex Igf1 no creix, 185 m / dia (de 10.560,6 a 14.260,4 mm). Això representa una reducció del 35% en la taxa de creixement longitudinal del ratolí null de l'Ígf1. Aquestes dades suggereixen que la hipertròfia hipertròcita afectada és la principal causa de la pèrdua de temps en la deficiència d'Igf1. Hipertròfia hipodròcita La diferenciació de proliferativa en hipertròfics es caracteritza per l'aparició de l'expressió de col·lagen X (14, 15). El col.lagen X immunoreactivity és qualitativament normal, encara que una mica menys abundant en la placa de creixement nul d'Igf1 (figura 2). Es va trobar un patró similar per a l'expressió de la fosfatasa de l'alcalina i la sialoproteïna òssia, altres marcadors de la diferenciació hipertròfica (dades no presentades). Per tant, sembla que aquestes cèl·lules diferencien de manera normal, però no aconsegueixen un creixement somàtic complet. Davant la marcada homologia entre la insulina i l'Igf1 i entre els seus receptors cognats (16), es va plantejar la hipòtesi que Igf1 pot actuar en forma d'anabolitzador d'insulina per promoure hipertròfia de condròcits. Així, hem examinat l'expressió d'objectius ben establerts de les accions anabòliques de la insulina. Entre els transportadors faciliveglucosa, l'expressió de GLUT4 és molt dependent de la insulina (17). La immunoreactivitat de GLUT4 es va reduir significativament en Igf1 nullFigure 2. Collagen X immobilitzat en els condròcits hipertròfags de WT (A) i Igf1 null (B). La immunoreactivitat de colàgeno X es va detectar per primera vegada en el citoplasma i la membrana plasmàtica de les cèl · lules a la zona hipertròfica inicial i es torna més abundant a mesura que avança la hipertròfia. En els hipertroficells més grans, la immunoreactivitat de colàgen X és extracel·lular, concentrada en l'espai entre la membrana plasmàtica i la matriu pericel·lular (PC). Aquestes cèl·lules grans són particularment susceptibles a la fixació de retracció i plasmalemal. La ruptura de les cèl·lules i la pèrdua de protooglicans extracel·lulars durant el processament convencional del teixit mostren llacunes clarament delimitades, que expliquen els espais ocupats per condròcits hipertrófics sans in vivo. La immobilització de Somecollagen X es troba en el seient longitudinal de la matriu extracel·lular (mx). Bar 5 25 m.TABLE 1. Paràmetres de longitud i placa de creixement en WT iIgf1 null MiceaWT Igf12 / 2 PTibia (mm) 13.3 6 0.6 10.5 6 0.2 0.0001GP (mm) 366.9 6 4.3 318.9 6 8.1 0.002GZ (mm) 29.9 6 2.8 44.8 6 2.8 0.01GZ número de cel·la 2.06 6 0.1 2.9 6 0.2 0.04PZ (mm) 118.4 6 5.8 131.0 6 10.3 nsPZ cel·les / 50 m 8.8 6 0.3 8.2 6 0.7 nsPZ LI (%) 17.2 6 0.9 16.4 6 1.3 nsHZ (mm ) 221.0 6 10.1 143.2 6 4.3 Número de cel·la 0.0004HZ 13.0 6 0.5 12.6 6 0.5 nsHZ cel·lular (mm) 32.5 6 1.2 23.0 6 2.4 0.003a Totes les dades són de ratolins P20. Les mesures donades en mm o mmrepresenten la dimensió longitudinal de l'estructura paral·lela a l'eix longitudinal de l'os. Les dades del número de cèl·lules de les zones germinals (GZ) i hipertròfiques (HZ) representen el nombre mitjà de cèl·lules que insereixen columnes que abasten el diàmetre longitudinal total de la zona; les dades de la zona proliferativa representen un nombre de cel·les de 50 m en una columna molt empaquetada. L'índex d'etiquetatge de l'ADN (LI) es va determinar anotant la quantitat de nuclis BRDU positius per total de nuclis en PZ. Es van obtenir resultats similars en experiments amb incorporació de 3H-timidina. Totes les dades són mitjans 6 sem per les drettibies de 4 ratolins / grup. Es van obtenir dades similars a partir de l'anàlisi de les tibias esquerres. El valor d'AP, 0.05 va ser considerat com significatiu.IGF1 I CREIXEMENT DE LLUITES LARES Els condròcits hipertróficos de 1987, tant pel que fa al nombre de cèl·lules positivament tacades com pel grau d'intensitat demostrat per cèl·lules positives (Fig. 3A, B, Taula 2). Un altre conegut L'objectiu de l'acció de la insulina és la glicocènica sintasa quinasa 3b (GSK3b) de l'isenzima. L'activació d'una cascada de senyalització a través de PI3K i la proteïna quinasa B / Akt dóna lloc a la serinefosforilació i inhibició de l'activitat de GSK3b (revisada a la referència 18). Això, al seu torn, alleuja la inhibició de GSK3bin de glucogen sintetasa, per la qual cosa fomenta la síntesi de glucogen. El glucogen normalment s'acumulen mitjançant hipertròfits i hipertròfits proliferatius i esgotats durant les etapes finals de la hipertròfia del còdic (19). La immunoreactivitat de GSK3b va ser abundant en els proliferatius i hipertròfits, tant en les plaques de creixement nul i WT (Taula 2). Un anticòs específic de la serina fosforilada GSK3b (9), no obstant això, va demostrar una inmunosostención molt reduïda per a la forma inactiva de l'enzim en Igf1 ncondròcits d'ull (figura 3C, D, taula2). Tal com es va predir a partir del reduït nivell de serinefosforilado de la GSK3b, el tractament histoquímic de PAS va reduir significativament les reserves de glucògens a la placa de creixement nul·la (Fig. 3E, F, Taula 2). El transport de glucosa i glucògens intracel·lulars reduïts poden provocar una disminució de l'oferta intracel·lular d'ADN i substrats per a la síntesi de proteïnes. , particularment en cèl·lules que depenen de la glucòlisi per a la producció d'energia, com també els condròcits hipertròfils (20). Atès que l'energia i / o el dèficit de substrat poden conduir a la regulació a la baixa de la síntesi d'ARN ribosomal (ARR) (21), es van comparar els nivells cel·lulars de placas de creixement nRRNA inWT i Igf1 utilitzant hibridació in situ. Aquesta anàlisi mostrava una dràstica reducció del 70% contingut d'ARN en Igf1, hipertrofiacondrocitos nuls i una disminució menor en els condròcits proliferatius (Fig. 4 i Taula 3). Es pot destacar que l'ARRNA és més abundant en els condròcits hipertrófics que els proliferatius, d'acord amb l'observació que la mitocòndria, Golgi i endoplasmicreticulum són més

abundants en hipertrofictans en els condròcits proliferatius (22). Aquest estudi del creixement ossi longitudinal en el ratolí Igf1null ha demostrat que la proliferació de condrocyte de plaques de creixement i els nombres de les cel·les es conserven malgrat tot; la reducció del 35% en la velocitat del creixement ossi llarg. El defecte del creixement a causa de l'eliminació d'Igf1 es fa en una atenuació de la hipertròfia de condròcits, que està associada amb una expressió reduïda de transportadors de glucosa i síntesi de glucogen i amb nivells reduïts de ARN ribosomal. Aquests resultats suggereixen que el mecanisme d'acció d'Igf1 en la promoció del creixement estatural. Figura 3. Reducció de la funció metabòlica en els condròcits nuls d'Igf1. Les seccions representatives de tipus salvatge es mostren a la dreta (A, C, E) i Igf1 nul a la dreta (B, D , F). A, B) Immunososteniment del GLUT4 regulat per insulina. LittleGLUT4 es detecta en Igf1 condròcits nuls, encara que és massa abundant en algunes cèl·lules de medul·la òssia en aquests ratolins (B). C, D) Inmunodetecció del ser9-fosfoform de GSK3b; E, F) Depòsit de PAS de dipòsits de glucogen.TABLE 2. Marcadors d'utilització de glucosa en Igf1 Hipertrofia lúdica Condrocicloa Nul% Intensitat positiva% Intensitat positivaGLUT4 89 6 2.1 1.9 6 0.01 53 6 5.4 * 0.82 6 0.06 # GSK3btotal75 6 14 1.7 6 0.04 72 6 20 1.3 6 0.04GSK3bser9-P 95 6 1.7 2.2 6 0.06 53 6 4.3 # 0.93 6 0.08 * Glicógeno 86 6 4.5 1.8 6 0.06 51 6 2.7 * 0.97 6 0.08 # a Tots els condròcits a la zona hipertròfica inicial es van anotar ja sigui positives o negatives per a la immunosistència o la reactivitat del PAS; Els resultats s'expressen com a percentatge mitjà de cèl·lules positives (6sem). Es van puntuar els valors positius per intensitat del senyal de color en una escala d'1 a 3, amb 1equaliment del senyal menys detectable i 3 la major intensitat; els valors eren significatius per a cada animal i, a continuació, els mitjans de grup obtinguts. Pvalues per Igf1 nul·les en comparació amb WT: *, 0.004; #, 0.0008.1988 Vol. 13 de novembre de 1999 El FASEB Journal WANG ET AL.involuciona els efectes anabòlics de "insulina", que donen suport a l'activitat biosíntica extraordinària, el creixement somàtic i la producció de matrius que caracteritzen els hipertròfics. L'estudi actual dóna suport a la visió que el col·lecte de progènits condròtics genera efectes directes sobre la placa de creixement germinalzone (23, 24), ja que l'augment de la cel·lularitat de la zona germinal nul·la d'IgG1 pot atribuir-se a una major secreció de l'EC en absència de rebuig negatiu d'Igf1. El paper de Igf1 en el creixement llarg dels ossos, però, rebuig la visió predominant que aquest pèptid és responsable d'estimular la proliferació clonal de condròcits de plaques de creixement (revisada en ref 5). Anteriorment, hem qüestionat aquesta hipòtesi, basada en la constatació que Igf2, en lloc d'Igf1, s'expressa mitjançant proliferació de condròcits (6, 7). Les dades actuals demostren que l'efecte més gran d'Igf1 sobre la placa de creixement és l'amplificació de la mida del còdrom, no la proliferació. Això no vol dir que Igf1 normalment no té cap funció en la proliferació de condròcits, ja que l'acció GH millorada en la placa de nul·lació Igf1 pot compensar una pèrdua d'Igf1 en la proliferació de condròcits. A més, les dades actuals no discuteixen el fet que l'exogeniIgf1 subministrat in vivo o que s'afegeix als cultius d'ortocròcits de la placa de creixement in vitro pot augmentar la proliferació, ja que el receptor Igf1 s'expressa amb tots els tipus de condròcits (7). Podríem argumentar, però, que la proliferació de condrocytes in vivo és estimulada principalment per Igf2 d'una manera autocrina / paracrina, explicant per què no es veu un dèficit important amb Igf1deletion. En canvi, la reducció del 30% en la proliferació de condròcits hipertròfics i la corresponent reducció en el creixement longitudinal dels ossos en ratolins nuls d'Igf1 demostren que l'augment del creixement somàtic de condròcits és el paper únic i essencial d'Igf1 a l'hora d'augmentar el creixement estatural. Els condròcits hipertrófics finals són les unitats cantals per a la transformació del cartílago intobona . Si el nombre de condròcits que arriben al sistema per dia és igual, llavors la mida de les unitats terminals determina la longitudinal btaxa de creixement (2, 3, 22, 25). L'observació actual que el nombre de cèl·lules en les columnes de condròcits i els indicis d'etiquetatge de l'ADN de condròcits són iguals en els dos grups suggereixen que el proliferació de condròcits és igual en ratolins Igf1 null i WT. La diferenciació de proliferativa en els hipertròfits també sembla que es produeix normalment, segons el típic colágeno X, l'expressió de sialoproteïna òssia i fosfatasa alcalina a la placa de nul·la Igf1. A més, el fet que la proporció de cèl·lules en zones proliferatives i hipertróficas sigui igual en ambdós grups argumenta que la progressió de la indiferenciació d'una etapa a una altra es produeix de manera general en les plaques de creixement nuls d'Igf1. Per tant, l'única variable de l'expansió de la placa de creixement és clarament Figura 4. ARN ribosomal a les plaques de creixement N (A, B) i Igf1 nul·les (C, D), tal com es mostra a les fosforomicrògrafs de camp fosca i brillant. La hibridació in situ utilitzant una sonda ARN marcada amb 35S, complementària a l'ARN ribosomal 28S, demostra que els nivells d'ARN en estat estacionari es desenvolupen en compostos hipertròfics comparats amb prolròfits proliferatius i marcadament major en WT que Igf1 amb condròcits nuls en ambdues zones (vegeu la taula 3). Bar 5 200 m.TABLE 3. Concentració de RNA ribosomal en el creixement plachondrocitosaWT Igf12 / 2 PProliferativa 12.3 6 1.0 7.5 6 0.8 0.054 Hipertrófica 67.9 6 1.0 19.0 6 2.8, 0.0001a Seccions de les tíbies proximals de WT i Igf1, les rates nuls es van hibridar a una etiqueta radioelèctrica RNA sonda complementària a l'ARNs

28Sribosomal i exposada a emulsió nuclear durant tres dies (figura 4). Els grans d'argent exposats es van explicar sobre cèl·lules individuals a les zones proliferatives i hipertróficas i les dades s'expressen com a meangraïnes per cel·la (6sem) .IGF1 I CREIXEMENT AIGUA LLAR 1989Disturbat en Igf1 els ratolins nuls és l'extensió de la hipertròfia condrocitòria i el grau d'atenuació d'aquest procés correspon el grau de reducció en creixement longitudinal. L'expansió ràpida de la condrocitosis hipertrófica és extraordinària, però els factors que regulen aquest procés dramàtic s'han desconegut. La presentdata suggereix que Igf1 millora l'hipertròfia de condròcits mitjançant accions similars a l'insulina, com augmentar l'absorció i l'ús de glucosa i aminoàcids. Donant suport a aquesta visió, el receptor Igf1, que és estructural i funcionalment homòleg al receptor d'insulina, se sap que intervenen en efectes anabolitzants (16), inclosa la regulació de GLUT4 (26). Hem demostrat que l'expressió GLUT4 i la fosforilació de serina GSK3b han disminuït significativament en Igf1 els hipertrofiacondròcits nuls, de manera que es redueixen la glucogenina a aquestes cèl·lules. Les botigues de glucògens solen estar acumulades per hipertròfics i hipertròcits primerencs proliferatius i esgotats durant la maduració dels condròcits hipertrófics (19, 27). Els glòbuls hipertròfics són altament actius metabòlicament i tenen cura de la glicòlisi per alimentar la seva expansiva biosintetica (20). La disminució de l'ARNr en els condròcits hipertrófics Igf1null pot reflectir la "vigilància cel·lular" per al combustible i els blocs de construcció per a la proteínsíntesi (21). Les dades actuals suggereixen que Igf1 actua d'una manera veritablement insulínica per millorar l'absorció de condrocicloquidosa i la síntesi de glucogen i proteïnes, promovent així un creixement somàtic màxim i una producció de matrius i augmentant la velocitat del creixement de la línia lineal en un 30%. Estem agraïts a Lynn Powell-Braxton i Genentech formant la línia d'eliminació Igf1 disponible per a Rita Haronenand Bjorn Olsen per proporcionar l'anticòs del colágeno X, i per a Ricardo Dreyfuss per una fotomicrografia experta.

No hay comentarios
Esta solo es una vista previa
3 páginas mostradas de 7 páginas totales
Descarga el documento