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Preparazione di campioni biologici per la microscopia, Appunti di Citologia

Università degli Studi di Messina (UNIME)Citologia

I passaggi necessari per preparare un campione biologico per l'osservazione al microscopio ottico. Si parte dalla fissazione del campione, che può essere fisica o chimica, per poi procedere con la disidratazione, l'inclusione in paraffina, il taglio delle sezioni e la colorazione. anche informazioni sulle sostanze utilizzate e sulle tecniche di montaggio e di rimozione della paraffina.

Tipologia: Appunti

2022/2023

In vendita dal 24/10/2023

_Gaia_23
_Gaia_23 🇮🇹

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bg1
pag42
ALLESTIMENTO DI PREPARATO XLA MICROSCOPIA
microscopica
①FISSAZIONE →FISICA•congelamento inazoto liquidooa-80
Icongelamento immediato perFar si
che l'acqua non rompa le cellule)
→CHIMICA •haduratada4a24 ore eservonoabloccare l'azione degli ENZIMI ittici
(contenuti neilisosomi),vengonousati deiFissativichimici
(es.paraformalacide,
liquidedi Bonin,
tetra
ossido
di
osmioecc.)
.
→lapermanenza in
Fissativo dipende da grandezza econsistenza
②
3.Disidratazione per eliminare ibatteri si eliminal'acqua e
si
sostituisce con alcol al 35%
↳Effarazione
aumentando ogni ora la percentuale Fino al loc
%faccepuri)
{alcol a70%@soggiorno) per averela
possibilità di
lasciare il composto ×molte ore} (Iona perogni
d-
e)
4.PREPARAZIONE Alla
→campione biologico immerso in
una sostanza che indurisca ilcampione e
inclusione lo preparial
taglio si usa la paraffina(comela cera)si
scioglieesi
inserisce in menoFormello conilcampione biologico.
Tuttavia questo non va d'accordo con l'alcol quindisi
sostituisce
con xilene,attraverso una miscela 1:
1traidue
•prepara all'inclusione perché mi
sciale con laparaffina
•agente diafanizzante (schiarente)assumerà un aspetto traslucido
(puntocruciale perchè disidrata al1009)
se loxilene non haquesto effetto bisognarimurare ancora acqua)
la Formella viene posta poi nella centrale-
d'inclusione che rilascia paraffinaliquida.
viene noceto on 0-ringda inserirenellaFormella
successivamente viene posta in una camera Fredda
"
a4operl'indurimento della paraffina.
-oin paraffine' mantenuta liquida perFar si che
siinserisca all'interno del campione
stufa a230-24°
pf3

Anteprima parziale del testo

Scarica Preparazione di campioni biologici per la microscopia e più Appunti in PDF di Citologia solo su Docsity!

p a g

4 2

A L L E S T I M E N T O

D I

P R E PA R ATO

X

L A

MICROSCOPIA

m i c r o s c o p i c a

FISSAZIONE → FISICA

congelamento i n

a z o t o

liquido

o a

  • 8 0
Icongelamento

immediato

per

F a r

s i

c h e

l'acqua

n o n

rompa

l e

cellule)

→

CHIMICA

h a d u r a t a d a

4 a

2 4 o r e

e s e r vo n o a

bloccare l'azione

degli

E N Z I M I i t t i c i

(contenuti

n e i

lisosomi),

vengono

u s a t i

d e i

Fissativi

chimici

(es.

paraformalacide,

liquide

d i Bonin,

t e t r a

ossidod i

o s m i o ecc.)

.

→ l a

permanenza

i n

Fissativo dipende

d a grandezza e consistenza

②

  1. D i s i d r a t a z i o n e p e r

eliminare

i b a t t e r i

s i elimina

l'acqua e

s i

s o s t i t u i s c e

c o n

a l c o l

a l

3 5 %

Effarazione

aumentando

ogni

o r a

l a

percentuale

F i n o a l

l o c

% facce

puri)

{alcol

a

7 0 % @soggiorno)

per

a v e r e l a

possibilità

d i

lasciare i l

composto

× m o l t e

ore}

(Iona

p e r

ogni

d -

e)

PREPARAZIONE

A l l a →

campione

biologico

i m m e r s o

i n

u n a

s o s t a n z a c h e indurisca

i l

campione

e

i n c l u s i o n e

l o

prepari

a l

t a g l i o

s i u s a

l a

paraffina

(comel a

cera)s i

scioglie

e

s i

inserisce i n

m e n o Formello c o n

i l

campione
biologico.

T u t t a v i a

questo

n o n v a

d ' a c c o r d o

c o n

l'alcol

quindi

s i sostituisce

c o n

xilene,

attraverso

u n a miscela

1 :

t r a

i

d u e

prepara

all'inclusione
perché

m i s c i a l e

c o n l a

paraffina

agente

diafanizzante

(schiarente)

a s s u m e r à u n

aspetto

traslucido

(punto

cruciale

perchè

d i s i d r a t a

a l

s e l o x i l e n e

n o n

h a

questo

effetto

bisogna
rimurare a n c o r a acqua)
l a
F o r m e l l a

v i e n e

p o s t a

p o i

n e l l a

centrale-

d'inclusione

c h e

rilascia

paraffina

liquida.

v i e n e noceto o n

0-ring

d a inserire

n e l l a Formella

successivamente

v i e n e

posta

i n

u n a

c a m e r a

Fredda

"

a

4

o

per
l'indurimento

della

paraffina.

o

i n

paraffine'

m a n t e n u t a

liquida

per

F a r s i c h e

s i

i n s e r i s c a a l l ' i n t e r n o

d e l

campione

s t u f a a 2 3 0 - 24

°

T A G L I O →

a l

MICROTOMO dotato d i

u n a l a m a

e d u n braccio

a

c u i viene Fissato

i l blocco

d i

paraffina

e permette

d i ottenere sezioni

2 - 4

μ m.

Esistono 2

Tipi:

[ A

SLITTA GLI ato

→

s i

inserisce

i l n ° d i

u n c l i c k a 5 μ m F a

capire

quando
tagliare

ftp.eaai.fi?iII?I.iiIa.IIi,"""

MONTAGGIO →

r a c c o l t a

delle sezioni i n

vetrini portaoggetti

SPARAFFINATURA

bisognar i m u o v e r e

l a

paraffina,

sciogliendola

c o n

l o x i l e n e

spara#natura)

e

IDRATAZIONE i n

2

passaggi

d a

5

m i n. ciascuno

per

coloranti

a b a s e

a c q u o s a

o

a l c o l i c a s i i d r a t a

nuovamente l a

s e z i o n e

Facendo

i l

processo:

A l c o l

1 0 0% →

ACQUA DISTILLATA

COLORAZIONE

→

s i c o l o r a

p e r

a f f i n i t à : c o l o r a n t e

P E R a c i d i e COLORANTE

P E R CITOPLASMA

{blu)

e

matassina)

a c i d o

% cosina

c o l o r a z i o n e

e m a n a r n e acido →

a f f i n e a

basico

d ' C R O N I C A

→

basico

→

a f f i n e a d

a

seguire
s i deve

disidratare

h a
bisogno

d i

acqua

d i

nuovamente(con

a l c o l d a 9 0

a

Fonte perche'd i v e n t i

b l u

1 0 0 e

p o i

i n xilene)

MONTAGGIO-7 c o n

u n

v e t r i n o

c o p r i

oggetto

incollato c o n

d e i

"balsami"

n a t u r a l i

o

s i n t e t i c i

s e n e

preleva

u n a

goccia

c o n u n a

bacchettina

d i v e t r o

e s i F a c o l a r e

s u l

copriassetto,

u n a

v o l t a

poggiato

s u l vetrino l o

xilene f a r a ' espandere

l a

nuova" senza

danneggiare

i l

campione