Baixe Dosagem de Proteínas Pelo Método do Biureto e outras Notas de estudo em PDF para Química, somente na Docsity! UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO CEDERJ – Polo São Gonçalo QUÍMICA VI Dosagem de Proteínas Pelo Método do Biureto 31/08/2013 WALACE DE SOUZA CARVALHO Mat: 102.140.700-12 CURSO: LICENCIATURA EM QUÍMICA TUTOR: LUCIANA FACCHINETTI DE CASTRO I) INTRODUÇÃO: Proteínas são compostos poliméricos complexos com alto peso molecular(PM). Podem ser formadas apenas por cadeias de aminoácidos ou constituídas por aminoácidos (parte proteica) conjugados com outras classes de compostos como lipídios, ácidos nucleicos, carboidratos, grupo inorgânico, entre outros (SANTANA, 2012). Por serem formadas por aminoácidos e considerando-se que os aminoácidos aromáticos absorvem luz na região ultravioleta, as proteínas, em geral, podem ser detectadas através da absorção de luz a 270 nm. No entanto, a detecção de proteínas em materiais biológicos envolve reações específicas com determinados reativos, os quais originam substâncias coloridas que absorvem luz na região visível, permitindo a sua quantificação. Dentre os métodos utilizados, situa-se o método do biureto, que é baseado na reação do sulfato de cobre em meio alcalino (reativo do biureto) com proteínas e peptídeos (no mínimo tripeptídeos) (IB/UFF, 2013). As ligações peptídicas das proteínas (-CONH-) reagem com os íons cúpricos, em meio alcalino, formando um complexo de coloração violeta que é proporcional ao teor das Proteínas no meio (BIOCLIN, 2013). O nome do método provém do fato de que a uréia aquecida a 180°C dará reação positiva com desprendimento de amônia (SOUSA, et al 2013): O método de biureto tem sido aplicado para determinar a concentração de proteínas totais em diversos meios, sendo eles: soro ou plasma sanguíneo, líquido cérebro-espinhal, urina, alimentos, saliva, fibrinogênio e tecido animal. O método de biureto tem sido, também, utilizado em análise por injeção em fluxo, assim como em alguns métodos cinéticos. Apesar de ser rápido, utilizar reagentes de baixo custo e não apresentar grande variação da absortividade específica para diferentes proteínas, este método não é muito sensível, como foi destacado por diversos autores, colocando-o em grande desvantagem, em relação a outras metodologias, e por isto tem sido, ao longo dos anos, substituído por métodos mais sensíveis. Mesmo assim, o método de biureto continua sendo recomendado para a determinação da concentração de proteínas totais em plasma sanguíneo pela Associação Americana de Análises Clínicas e por diversos autores, bem como para a determinação de proteínas totais em saliva e leite, quando comparado com outros métodos II ) RESULTADOS E DISCUSSÃO A pra�ca de fundamenta no fato de que a reação do biureto pode ser u�lizada para demonstrar a presença de proteínas em materiais biológicos, como também para quan�ficá-las, uma vez que o complexo Cu-proteínas apresenta um absorção máxima a 550nm, a intensidade da cor depende exclusivamente da concentração de proteína, já que as ligações pep�dicas aparecem com frequência por grama do material analisado. Apesar de não ser um teste muito sensível (1 a 10mg de proteína), a reação do Biureto é largamente u�lizada em dosagens ro�neiras, pois está menos sujeita a interferência de contaminantes normalmente presentes nas amostras biológicas. E a cada uma das diluições acima, foi adicionada 4mL de biureto e este tubo foi posto para reagir no escuro por 30 minutos, e passado esse período, foram medidas as absorbâncias dos mesmos, resultando na tabela abaixo: Protocolo de dosagem da solução problema diluída. TUBO Solução de Caseína (mL) H2O (mL) Reagente do Biureto (mL) Abs (550nm) [Concentração] (mg/mL) Fator de Diluição Branco 0 1,0 4,0 0 0 0 1 1,0 2,0 4,0 0,530 5,0 1:2 2 1,0 5,0 4,0 0,244 1,66 1:6 3 1,0 9,0 4,0 0,125 1,0 1:10 Calculo da concentração da solução problema O calcula para concentração da solução problema, se faz através da curva padrão ( y = 0,038x + 0,0006) obtida anteriormente, substituindo os valores de absorbância pelos medidos na tabela acima, sendo assim: Concentração no tubo 01 No tubo 01 a absorbância possui um valou de 0,530nm, esse valor se encontra acima do limite de sensibilidade do método utilizado (0,152 a 0,374), a concentração nesse caso não é confiável pois está fora da escala de reprodutibilidade da curva padrão. Concentração no tubo 02 y = 0,038x + 0,0006 0,244=0,038x + 0,0006 X ~ 6,40 mg/mL Como esta solução se encontra diluída em 6x, sua real concentração é 6,40 x 6 = 38,4 mg/mL Concentração no tubo 03 y = 0,038x + 0,0006 0,125 = 0,038x + 0,0006 X ~ 3,27 mg/mL Como esta solução se encontra diluída em 10x, sua real concentração é 3,27 x 10 = 32,7 mg/mL III ) CONCLUSÃO A análise dos dados mostra que o método do Biureto é muito eficaz para de determinar a presença de aminoácidos nos alimentos e consequentemente proteínas, este método também possui a vantagem de ser rápido e se utilizar de reagentes de baixo custo, além do fato de não apresentar grande variação de absortividade especifica para diferentes proteínas, sendo sua grande desvantagem para com os outros métodos de análise, estar no fato de ele não ser muito sensível, mesmo assim, o método do biureto é muito indicado para determinação de proteínas em meios biológicos. IV )REFERÊNCIAS: • LEHNINGHER, Arthur. et al. Princípios de Bioquímica. 2 ed. São Paulo: Sarvier Editora, 1995. • http://www.scielo.br/pdf/qn/v21n6/2914.pdf - Determinação De Proteínas Totais Via Espectrometria: Vantagens E Desvantagens Dos Métodos Existentes. Acessado dia 05/09/2013