Espectroscopia de Emissão por Fluorescência Molecular, Trabalhos de Bioquímica e Instrumentação

Baixe Espectroscopia de Emissão por Fluorescência Molecular e outras Trabalhos em PDF para Bioquímica e Instrumentação, somente na Docsity! ESPETROSCOPIA DE EMISSÃO POR FLUORESCÊNCIA MOLECULAR Ciências Biomédicas Laboratoriais 2020/2021 Cristiane Matacano, Eunice Castelo, Leonor Morcela, Mafalda Rodrigues MÉTODOS E INSTRUMENTOS DE ANÁLISE EM CIÊNCIAS BIOMÉDICAS Introdução Propaga-se a diferentes comprimentos de onda e frequências o que leva a agrupá-las em diferentes tipos de radiação Radiações Ionizantes • Infravermelhos • Luz visível • UV • Raios gama Radiações não ionizantes • Ondas rádio A radiação consiste na propagação de energia no espaço, e como está associada a fenómenos elétricos e magnéticos, designa-se por radiação eletromagnética. É detetada por “pacotes” de energia designados por fotões Spin eletrónico A nuvem eletrónica é uma zona exterior ao núcleo associada a uma probabilidade elevada de encontrar um eletrão. Esta divide-se em várias orbitais com características específicas e podem ser: Com base no princípio de exclusão de Pauli, a propriedade spin consiste nessa probabilidade de localizar o estado quântico de um eletrão. Este estabelece que na mesma orbital não podem coexistir dois eletrões no mesmo estado quântico e que estes devem estar em sentidos opostos Spin eletrónico Principal diferença entre a fluorescência e fosforescência Consiste na excitação do estado fundamental singlete de um eletrão para um nível superior de energia. Na fluorescência No estado excitado singlete, o spin do eletrão na orbital excitada mantém a sua orientação o que torna o processo de retorno do eletrão para o estado fundamental mais rápido. Na fosforescência Por ocorrer inversão do sentido da rotação do spin, o processo é mais lento. A EMISSÃO DE ENERGIA ELETROMAGNÉTICA POR FLUORESCÊNCIA MOLECULAR A fluorescência molecular é o fenômeno pelo qual uma substância absorve luz quando exposta a radiações intensas do tipo UV, raios X, e emiti-as em forma de luz visível, ou seja, com um comprimento de onda maior que o da radiação incidente. Rendimento quântico O rendimento quântico consiste na razão dos fotões emitidos sobre os fotões absorvidos pelas estruturas moleculares. Φ = 𝑓𝑜𝑡õ𝑒𝑠 𝑒𝑚𝑖𝑡𝑖𝑑𝑜𝑠 𝑓𝑜𝑡õ𝑒𝑠 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑣𝑖𝑑𝑜𝑠 Fatores que afetam o rendimento quântico • Radiação UV-VIS • Espectro de absorção da espécie observadora • pH • Temperatura • Solvente • Concentração da espécie observadora • Concentração de O2 dissolvido Materiais usados Espectrofotômetro de fluorescência Cary Eclipse Este aparelho pode medir fluorescência, fosforescência, quimiluminescência e bioluminescência. É ideal para medições fluorescentes em ciências biológicas, biotecnologia e oferece espectroscopia de fluorescência adequada para amostras fotossensíveis. A recolha de dados rápida permite medições cinéticas em 80 pontos de dados por segundo, enquanto que a fibra ótica permite medições de amostras remotas. Materiais usados BioSpectrometer O BioSpectrometer de fluorescência oferece as funções de um espectrofotômetro UV / Vis, além da opção de determinar concentrações muito baixas de biomoléculas usando corantes fluorescentes.