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Cocos GRAM positivos
CLASE 11B
Microbiologia – Docente NOMBRES DEL GRUPO DE DESGRABACIÓN, AÑO 2021 Juan Armando S, Marena P, Maryann L, Antonio G, Germán L Vamos a comenzar con las características comunes que poseen todos los cocos gram positivos de importancia medica.
- Son de forma esférica (cocos), son gram positivos lo que quiere que tienen gran cantidad de peptidoglicano en su pared, además no tienen flagelos.
- Estan dispuestos de forma irregular. Se pueden ver en muestras de pacientes tanto en forma aislada, en pares (no diplococos), sobre todo cuando se dividen y vemos la forma característica de racimo de uvas. Los generos de importancia medica son: El Staphylococcus , el genero estreptococcus y el genero Enterococcus (Enterococcus debido al mecanismo por donde entra, via entérica)
Aca tenemos las 3 especies mas importantes de interés clínico del genero Staphylococcus: Staphylococcus aureus , Staphylococcus epidermidis , Staphylococcus saprophyticus
Componentes estructurales: son componentes de la pared celular de dicho microorganismo, como es el caso de el acido lipoteicoico, el acido teicoico , incluso en algunos casos se ha asociado a la cantidad abundante de peptidoglicano Componentes de secreción: tenemos las toxinas, y las enzimas que es capaz de producir esta especie. De aquellos que forman partes de los factores de patogenicidad estructurales tenemos los acidos politeicoicos : que son adhesinas que promueven la colonización del hospedero. Aca vamos a ver como las adhesinas que están en las terminaciones de estas estructuras de este microorganismo, son capaces de colonizar la celula huésped , la celula hospedadora. Tenemos el peptidoglicano , que induce la formación de pirogenos , por eso hay fiebre cuando hay verdaderas infecciones, no la colonización total , sino que cuando hay infecciones que progresan y causan enfermedad. Hay estimuladores de la quimiotaxis como polimorfo nuclares, este peptidoglicano puede servir para estimular la quimiotaxis de las células del sistema inmunológico al sitio donde se encuentra la lesión.
Otros factores de los componentes estructurales tenemos los factores de superficie que pueden inhibir la fagocitosis. Mas adelante cuando hablemos de respuesta inmunológica como la fagocitosis es uno de los mecanismos del sistema inmune para eliminar los microorganismos que son exteriores. Sin embargo estos microorganismos poseen una proteína , llamada Proteina A, que es una de las características principales de esta proteína es bloquear el area donde se una el antígeno con el anticuerpo, conocida como el area FAB o el area del paratope donde se hace efecto de llave o cerradura del antígeno con el anticuerpo. Tenemos también que esta especie es capaz de producir una capsula o glicocalix (no en todas las cepas), que en muchos casos es una capsula grande, en otros casos es mas delgada, el hecho es que algunas sepas son capaces de producirla, no todas. La capsula tiene una propiedad antifagocitica porque forma una barrera que impide que el fagocito pueda llegar al microorganismo per se. Tambien puede evitar que las adhesinas sean capaz de adherirse a la celula que quiere infectar o que quiere ganar entrada para causar daño.
ésta característica le confiere a la especie la afinidad por material de diversos tipos de materiales, entre ellos aquellos que son plásticos (jelcos, sondas) y metálicos (prótesis, válvulas) por tanto las personas que tienen cuerpos extraños de este tipo por mucho tiempo son muy propensas a contraer infecciones y danos por esta bacteria ya que se acumulan en la puerta de entrada donde están pero en la manipulación del personal de salud para administrar medicamentos se pueden empujar el microorganismo y éste entra al torrente sanguíneo y llegar a causar endocarditis, pericarditis. El Staphylococcus saprophyticus se puede encontrar normalmente en el tracto gastrointestinal por el área del “¿peritoneo?” (Esa palabra NO SE ESCUCHA BIEN) y la cercanía, puede migrar, en relación de higiene personal inadecuado, sobre todo en las damas, puede llegar al área genital femenina y causar infecciones urinarias Etc. Tenemos características generales de la especie, Stahpylococcus saprophyticus:
- No contiene proteína A
- Es coagulasa negativo
- No hemolítico
- No fermenta manitol
- y en este caso es resistente a la novobiocina De los factores de patogenicidad, vemos que tiene receptores oligosacáridos específicos de célula de la uretra, por eso, es que ellos pueden acercarse y llegar allí y poder adherirse. Y por los problemas con el retener mucho tiempo la micción sin ir al baño etc,
puede lograr la entrada a la uretra y por supuesto, causar infecciones urinarias, que es con lo que se asocia. ¿Cómo se hace el diagnóstico? acá debe ser bien rápido porque lo vimos en el tema 11a: Las muestras pueden ser cualquiera de estas:
- Pus: Secreciones purulentas de las cuales ya hablamos, furúnculos,
adenitis, abscesos, etc.
- Heridas postoperatorias o de caídas, heridas o raspones que permitan la
entrada de Staphylococcus aureus a esos sitios. Y otras secreciones
serosas etc.
En el examen directo buscamos coco gram positivos, que luego cultivamos en agar sangre y agar salado manitol. En el agar sangre puede presentar o no colonias hemolíticas, beta hemolisis como dijimos anteriormente, esto después de ser incubado 24 horas a 37 grados. Y en agar salado manitol que es un medio selectivo para gram positivos, que contiene inhibidores de gram negativos. Podemos ver la presencia de colonias que pueden ser amarillas por la producción de pigmentos si la cepa es productora de pigmentos , pueden ser colonias claras, pero en un fondo amarillo que es producto de la fermentación del manitol presente , si estamos en el caso de una de las especies , sería el Staphylococcus aureus. O podemos ver colonias claras en un fondo rojo, que indica que no hubo fermentación del manitol. Siempre se le hace sobre todo cuando se está aprendiendo y sobretodo entrenándose un examen directo a la colonia, entonces acá vamos a ver nuevamente los cocos gram positivos, sobre todo esto se hace cuando venimos de un agar sangre, que estamos dudosos y debemos asegurarnos que tenga colonias que sean cocos gram positivos Y las pruebas la principal seria la COAGULASA , si, la coagulasa en la que se expone parte de la colonia en plasma citratado, el cual vamos a ver un coágulo de fibrina y en el caso negativo no se va a formar ese coagulo, el cual es bastante frágil, tampoco es que lo vamos a mezclar mucho, sino que vamos a hacerlo de manera suave. Entonces, en Coagulasa negativo ya no estamos en presencia de Staphylococcus aureus e iríamos a la siguiente prueba que es la sensibilidad a la novobiocina , si es sensible estamos en presencia de Staphylococcus epidermidis y si es resistente estamos en presencia de Staphylococcus saprophyticus.
En cuanto al patrón de hemolisis, esto ya lo vimos, la hemolisis total, la hemolisis parcial o alfa y la gamma hemolisis o no hemolítico yo les comentaba que en el caso de Streptococcus agalactiae , es una especie capaz de producir beta hemolisis que se encuentra habitualmente en el área genital, específicamente femenina, y el Streptococcus pyogenes también es beta hemolítico pero su área es nasofaringe y oro faringe. El Streptococcus pneumoniae y Streptococcus viridans son del grupo de los alfa hemolíticos o con hemolisis parcial Y el grupo de no Enterococcus porque en el pasado los Enterococcus los clasificaron con los Streptococcus, fue más adelante por estas pruebas serológicas y gracias a nuevas evidencias por la tecnología se dieron cuenta que ese Enterococcus no era el mismo tipo de cocos pertenecientes al género Streptococcus, por lo tanto se conoce como Streptococcus del grupo D no Enterococcus , que era donde estaban clasificados los Enterococcus anteriormente. Por ejemplo en Streptococcus bovis es una especie perteneciente el grupo que no es Enterococcus. Entonces esa clasificación de Lancefield me da esta oportunidad y no la voy a volver a explicar. De ese extracto soluble de la pared celular por acción enzimática, se pone en contacto con las partículas de látex cubiertas con anticuerpos específicos en este caso los del grupo B y en este caso para el grupo A y si hay una interacción antígeno anticuerpo se va a evidenciar con los grumos o acúmulos, entonces acá tenemos del grupo A es Streptococcus pyogenes y del grupo B Streptococcus agalactiae y los no hemolíticos que son pertenecientes al grupo G
Acá tenemos entonces los patrones de hemolisis, la clasificación serológica y la especifica por pruebas bioquímicas específicas, entonces tenemos:
- Streptococcus pyogenes es el mismo del grupo A de lancefield y es el
mismo beta hemolítico
- Streptococcus agalactiae es Grupo B de lancefield y betahemolitico
- Streptococcus anginosus o Streptococcus equisimilis van a ser del grupo
C , son beta hemolíticos y algunos no hemolíticos
- Streptococcus bovis es del grupo D no enterococcus y puede presentar alfa
, beta y o gamma hemolisis
- Streptococcus anginosus además ha sido clasificado como F,G, pero esto
es mucho más nuevo
- Streptococcus pneumoniae, las características de la pared celular son
especificas del genero Streptococcus pero tiene la particularidad de
presentarse como un diplococo con forma lanceolada con la parte interna
plana y los extremos husados ,es decir con forma de llama de lanza y ellos
son alfa hemolíticos
Esta especie es muy exigente en cuanto a requerimientos nutritivos. Cuando es In Vitro requiere de una placa de agar sangre debido a que necesita todos los elementos de los glóbulos rojos para sobrevivir. (Menciona que… de hecho los Streptococcus que tomamos para la practica 1 de exudado faríngeo murieron rápidamente por no colocarlas en el medio) Tienen factores de patogenicidad, algunos son estructurales y otros secretados: Estructurales:
- La capsula
- La membrana celular (necesita proteger el contenido del citoplasma)
- Péptidoglicanos en la pared celular, teniendo en esta pared la Sustancia C
- Ácido Lipoteicoico
- Fimbrias con la Proteína M (Esta proteína es el principal factor patogenicidad). Estas fimbrias otorgan adhesión a la célula que afecta Secretados:
- Sustancias extracelulares, donde este microorganismo puede liberar siguiendo con su estructura intacta
- Hemolisinas, Toxina Eritrogenica y la Estreptoquinasa, son las principales enzimas con la que cuenta este agente para hacer daño y para su supervivencia.
El Streptococcus pneumoniae tiene una morfología particular que ya la vimos en práctica, diplococos un poco alargados que se ven como si fuesen un antifaz y un halo claro que se ve alrededor es la capsula, donde la coloración de Gram y la Safranina no llegan a colorearla y queda ese halo claro. Diplococos Gram Positivos Capsula de polisacáridos que permite tipificarlos Hay una prueba específica para su identificación, la cual consiste en usar sales biliares en laboratorio, porque estas son capaces de lisar a estos agentes Son parte del microbioma normal de las vías respiratorias superiores Su capsula es el principal factor de patogenicidad y le confiere una cualidad anti fagocítica, más, sin embargo, aunque hace difícil el proceso de fagocitosis por parte de los macrófagos, hay momentos donde por ejemplo cuando llega al ápice del pulmón, donde no hay mas espacio para desplazarse queda “arrinconada” y se hace más fácil ser fagocitada. Menciona que este agente no es móvil, pero por las características de su capsula, cada vez que un macrófago intenta fagocitarlo, este “resbala” y por eso se desplaza.
Menciona que existen muchas otras y comienza a hablar que… por ejemplo en pacientes con infección por Staphylococcus epidermidis puede causar lesiones purulentas y demás como con los agentes que se acumulan en materiales de plástico o metal en pacientes con válvulas, dializados, sondas, entre otras. Para el diagnóstico del género Streptococcus se puede tomar una muestra como en las anteriores como Pus, Sangre, Líquido Cefalorraquídeo, Exudados de las secreciones. En el examen directo se podrá observar una cadena de cocos gram positivos. Se cultiva en Agar sangre a 37 °C por 24 horas en una jarra caramelera (Ambiente de microaerofilia) que asegura entre 5% a 10% de CO 2.
Ese es el ambiente en el cual se desarrolla el microorganismo del género streptococcus. De las pruebas que nos clasifica el género podemos hacer la Catalasa para ver si segrega o no la enzima catalasa la produce o el nitrato reductasa y vamos a ver que ambas son negativas y que diferencian los cocos gran + del género Staphylococcus de Streptococcus. Se puede observar el tipo de hemólisis, si es: Alfa. Beta. Gamma. Si hay beta hemolisis que sería el primero, podríamos estar en presencia de: Streptococcus pyogenes que es del gurpo A. Streptococcus agalactiae que es del grupo B. para el cual se tendrían que hacer algunas pruebas, par de pruebas para diferenciarlos. Además uno se orienta por el área anatómica de donde vienen, pero como en este momento hay tantas prácticas sexuales variadas, entonces también el microorganismo que normalmente habitaba en un sitio puede llegar a otros.
Prueba de sensibilida a la Optoquina que ya se las explique antes, va a diferenciar el Streptococcus pneumoniae que es alfa hemolíticos, del Streptococcus también alfa hemolítico, Streptococcus mitis. Entonces optoquina negativo, optoquina positivo.
Otro coco Gram positivo, se llama Genero Enterococcus. Como les dije antes se pensaba que era de los mismos, del mismo género pero más adelante se clasifico como un nuevo género. Características del Enterococcus: Cocos Gram Positivos. Catalasa: Negativos. Reducción de Nitratos a Nitritos: Negativo. Anaerobios facultativos. Crecen en altas concentraciones de NaCl (6.5%) y sales biliares. Ellos son un poquitos más agrandados y alargadito el coco del enterococcus. Hay dos especies de importancia médica: Enterococcus faecalis: corresponde entre el 80 a 90% de aislamientos. Es el más común, mas frencuente de los aislados del genero Enterococcus. Se comportan como bacterias oportunistas porque como les dije formaban parte del tracto gastrointestinal como flora microbiana normal o como parte del microbioma. Enterococcus faecium: es muy poco frecuente, pero es de mayor incidencia como agente nosocomial y ojala ustedes sepan que es nosocomial, también conocido como agentes intrahospitalarios, enfermedades intrahospitalarias. Porque al hospital se le llamaba nosocomio y manicomio a los hospitales pediátricos. Estas 2 especies son importantes, la más frecuente es la feacalis sobre todo oportunista y faecium en el caso de infecciones intrahospitalarias de pacientes que están hospitalizados por largos periodos de tiempo, etc. E infecta heridas post operatorias, porque como es común tener plásmidos de resistencia a muchos antibióticos por eso es que permanece en el área hospitalaria. No son tan exigentes para su crecimiento y nutrición como lo es el Streptococcus como tal. Eso fue uno de los indicios que les dieron para hacer la investigación que no se trataba del mismo agente. Manifestaciones clínicas asociadas: Causa más común de infección nosocomial. Transmisión de un paciente a otro a través de la manos (la fuente de infección va a ser las manos contaminadas con materia fecal y entonces se llevan a los sitios donde pueda estar una puerta abierta, una brecha para las heridas, etc). O de un cuidador de paciente a otro ajeno. Transmisión a través de dispositivos médicos. Mal manipulado, mal esterelizados Pueden causar: Endocarditis. Infección de tracto urinario. Por la cercanía al peritoneo, falta de higiene, hábitos de higiene, usos de hilos dentales, pantalones muy apretados, etc, aseo inadecuado hacia adelante. Todas esas pueden ser oportunidades de oportunismo para los agentes y obviamente al
