12/09 BIOLOGIA- TECNICHE PER STUDIARE IL
DNA:
-Elettroforesi
-PCR (reazione polimeratica a catena)
Elettroforesi: sul gel si formano delle tacche/bande (hanno la forma del pozzetto), la
corrente trascina con se i campioni di DNA, le cariche sono in grado di muoversi in quanto
campo elettrico. Il DNA per ogni nucleotide ha una carica negativa. Queste cariche
negative si muovano verso il polo opposto, questo deve essere messo lontano dai pozzetti
altrimenti i campioni escono dalla parte sbagliata. Per creare il campo elettrico il gel posso
farlo con l’acqua ma non posso metterlo a bagno nell’acqua, devo metterlo in una
soluzione tampone (PH stabile). Serve che la soluzione contenga degli elettroliti (molecole
che si dividono facilmente in parti).
Elettroforesi:
-Si basa sul fatto che il DNA che è carico negativamente, messo all’interno di un campo
elettrico, migra verso il polo positivo (elettrodo positivo).
Il DNA viene inserito all’interno di un gel di solito fatto con agarosio (non è l’unico tipo di
Gel), l’agarosio è un polisaccaride.
I frammenti di DNA più grandi restano più intralciati dalle maglie del gel e restano più
vicini ai pozzetti durante la corsa.
I frammenti più piccoli rimangono meno intralciati dalle meno del gel e quindi si allontano
di più dai pozzetti. Alla fine i frammenti rimangono ordinati sul gel in base al loro peso
molecolare. I gel più utilizzati per lo studio del DNA, hanno una quantità di agarosio che
varia dallo 0,8% al 2%.
PCR: tecnica che viene utilizzata per amplificare il DNA (crearne tante copie tutte uguali),
non richiede l’uso di microrganismi, ha portato il premio NOBEL.
Creare tante copie per poterlo studiare meglio o anche per poterlo vedere ad occhio nudo.
La PCR è una duplicazione fatta in laboratorio all’interno di una provetta, il principio è
quello della duplicazione del DNA. Servono diversi enzimi, uno in particolare è quello che
crea il filamento nuovo, DNA polimerasi. In questo caso svolgere il dna e sperare le catene
sono funzioni che vengono svolte non da enzimi ma da cambi di temperatura. Ad ogni ciclo
il numero di molecole di DNA raddoppia.
DNA polimerasi ha bisogno del primer (doppio filamento).
Nella PCR vengono utilizzati da primer di DNA, La DNA polimerasi continua ad attaccarsi al
primer di DNA.
Differenza: solo un enzima (DNA polimerasi, i primer sono piccoli frammenti di DNA).
