LEZIONE 9 PLASMIDI e TRASPOSONI
Il genoma batterico è suddiviso in 2 componenti fondamentali:
1)CROMOSOMA(contiene geni essenziali che codificano funzioni essenziali per il
funzionamento della cellula), generalmente abbiamo un singolo cromosoma circolare
(può essere anche lineare) essendo organismi aploidi, proporzionale alle interazioni
del microrganismo con l’ambiente (un genoma più grande svolge più funzioni rispetto a
un genoma ridotto), è superavvolto all’interno della cellula, replicazione bidirezionale
(ovvero presenza di 2 forcelle che separano il cromosoma a partire da una reazione di
origine che prende il nome di Ori C)
2)ELEMENTI EXTRACROMOSOMICI MOBILI (contengono geni accessori non
essenziali per la cellula, che possono trarre un vantaggio alla cellula), ovvero i
PLASMIDI, ELEMENTI TRASPONIBILI, PROFAGI…
PANGENOMA (pan=insieme): racchiude l’insieme dei geni in una determinata specie
(genoma “core” + genoma “accessorio”), il genoma core (centrale) è uguale all’interno
di tutta la specie (presente in tutti i ceppi della stessa specie), ciò che differenzia un
individuo da un altro è il genoma accessorio (presente in uno o più ceppi ma non in
tutti di una determinata specie)
PLASMIDI, nel corso della storia la parola plasmide acquisì nuove definizioni, in
origine il termine plasmide fu coniato per primo da Joshua Lederberg, per indicare
qualsiasi elemento genico extracromosomico stabilmente mantenuto, non vi era una
distinzione netta quindi tra elementi di origine procariotica o eucariotica (mitocondri,
cloroplasti, particelle fagiche ecc…), ma con l’introduzione delle tecniche di
clonaggio, la definizione di plasmide venne corretta con “piccoli elementi di dna
circolare”, anche se quest’ultima ancora risulta limitante in quanto le dimensioni dei
plasmidi variano, esistono alcune categorie che prendono il nome di mega plasmidi,
si cercò quindi una definizione funzionale quindi i plasmidi codificano funzioni
accessorie per la vita della cellula
METODO DI ESTRAZIONE DEI PLASMIDI (metodo classico, ormai obsoleto
grazie ai kit già pronti)
In gradiente di cloruro di cesio in presenza di bromuro di etidio, si possono
separare i plasmidi, come molecole di DNA covalente chiuso (lisi osmotica)
REPLICAZIONE PLASMIDICA (i plasmidi sono repliconi autonomi in quanto
anche loro hanno un'origine di replicazione Ori V “vector”), da questa origine di apre la
doppia elica in maniera o unidirezionale o bidirezionale (presenza di 2 forcelle
replicative che partono da entrambe le estremità) prende il nome di REPLICAZIONE
THETA (θ) perchè durante la replicazione ricorda la lettera greca, presentano anche
un’altra origine che prende il nome di Ori T “transfert”, questo tipo di replicazione è
detto a “circolo rotante”, quando una cellula si duplica il plasmide si replica per
trasferire alla cellula “ricevente” il plasmide della cellula “donatrice”
