¡Descarga Efectos de pH y temperatura en la fosfatasa alcalina: estudio experimental y más Ejercicios en PDF de Biología Celular solo en Docsity!
UNIVERSIDAD DEL MAGDALENA
FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS
PROGRAMA DE BIOLOGIA
ASIGNATURA DE BIOLOGÍA CELULAR, PRÁCTICAS DE LABORATORIO
ACTIVIDA ENZIMATICA
Ana Milena Lagos Tobías Presentado por: Almanza Jaramillo, Greicy(1); Pilonieta Pérez, Héctor(2); Rodríguez Reyes, Melissa(3). RESUMEN: Se determinó experimentalmente los efectos que tienen sobre la actividad enzimática, la temperatura y el pH, analizando su actividad mediante la absorbancia medida con espectrofotómetro al colocarle un sustrato y realizar cambios en dichas variables utilizando la enzima fosfatasa alcalina, se observó un notable cambio en la actividad enzimática al cambio de temperatura y pH y se determinó así mismo los valores óptimos de estas dos condiciones para dicha enzima. Palabras clave: Absorbancia, enzima, pH, temperatura. ABSTRACT: The effects they have on the enzymatic activity, the temperature and the pH were experimentally determined, analyzing their activity by means of the absorbance measured with a spectrophotometer of a substrate and making changes in these variables using the enzyme alkaline phosphatase, it is considered a notable change in the activity enzymatic to the change of temperature and pH and the optimal values of these two conditions for said enzyme were also determined. Keywords: Absorbance, enzyme, pH, temperature.
INTRODUCCIÓN
Las reacciones químicas que se proporcionan en los organismos vivos no podrían tener sitio sin la existencia de los enzimas. Estas macromoléculas, que principalmente son proteínas, catalizan las actitudes bioquímicas, permitiendo que los sustratos se conviertan en los productos que requiere la célula. Como todo catalizador, los enzimas no se consumen en las actitudes que catalizan, sin embargo a diferencia de otros catalizadores de naturaleza inorgánica, las actitudes que catalizan resultan muy concretas: solamente interaccionan con determinados sustratos, y únicamente facilitan el curso de determinadas actitudes. Un enzima que tenemos la posibilidad de hallar en todos los organismos vivos es la catalasa, primordial para descomponer el peróxido de hidrógeno, un compuesto tóxico, que se genera a lo largo de el metabolismo celular. La actividad de una enzima se evalúa en funcionalidad de la rapidez de la actitud. La cinética enzimática estudia la rapidez de la actitud, los componentes que la modifican y el mecanismo de la misma. Los componentes fisicoquímicos que modifican la actividad de la enzima son: concentración del sustrato, concentración de la enzima, pH, temperatura, fuerza iónica, inhibidores. Leonor Michaelis y Maud Menten en 1913, propusieron un modelo tradicional para el análisis de la cinética enzimática. Este modelo se basa en graficar la rapidez de la actividad enzimática y la concentración del sustrato. Esta representación gráfica posibilita establecer la constante de Michaelis-Menten (KM) al interpolar la mitad de la rapidez máxima (Vmáx). En esta práctica se empleará la enzima catalasa para examinar ciertos puntos de la cinética enzimática. La catalasa usa una molécula de peróxido de hidrógeno (H2O2) como sustrato donador de electrones y otra molécula de H2O2 como oxidante o aceptor de electrones. ESTRUCTURA DE LA MITOCONDRIA Las enzimas son el conjunto más variado y especializado de las proteínas, su funcionalidad es actuar como catalizadores, permitiendo que las actitudes que transcurren en los organismos vivos logren realizarse a un ritmo correcto. Un catalizador, por definición, es un compuesto que con su sola presencia se incrementa la rapidez de la actitud sin experimentar ni una modificación. Las enzimas son capaces de apurar actitudes químicas concretas en un medio acuoso, y en condiciones en las que los catalizadores no biológicos, podrían ser incapaces de hacer equivalentes funcionalidades. Su capacidad catalizadora es dependiente de su conformación, la eliminación de alguno de sus niveles de estructuración, causa la pérdida de manejo. Parte importante de sus características catalíticas radica en el elevado nivel de especialización que muestran en relación a las sustancias reaccionantes o sustratos. Además las enzimas son monumentales proteínas que aceleran las actitudes químicas. En su composición globular, se entrelazan y se pliegan por medio de una o más cadenas polipeptídicas, que de esta forma aportan un diminuto conjunto de aminoácidos para conformar el lugar activo, o sitio donde se reconoce el sustrato, y donde se hace la actitud. Las enzimas son fundamentales para todos los procesos biológicos debido a que son las causantes de las actitudes que mantienen la vida. Cualquier mutación o disfunción en un gen responsable de la codificación de una enzima puede provocar un patología severa y hasta el deceso. CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS En los principios del análisis de las enzimas se usaron nombres referentes al órgano o tejido dónde se descubrieron (así la pepsina, de péptico o relativo a la digestión), o bien al sustrato o a la actividad hecha por la enzima, añadiéndole el sufijo -asa para darle un nombre (el caso de
Enzima Bacteria del grupo Actinoplanes missouriensis Tejidos y soluciones. Cultivo de levadura. Tejido animal PROCEDIMIENTO
- Abra el simulador http://biomodel.uah.es/lab/abs/AE/inicio.htm#
- Siga las instrucciones del simulador
- El primer ensayo usted deberá modificar la variable de Ph: 3, 5,7, 9,11 con una temperatura de 30 ºC. Anote cada valor de absorbancia en el cuadro que presenta el simulador. Adicionalmente debe pasar esos datos a una hoja en Excel grafique e intérprete.
- el segundo ensayo usted deberá modificar la temperatura T: 20,35, 40, 45, 50, 60 con un Ph 3. note cada valor de absorbancia en el cuadro que presenta el simulador. Adicionalmente debe pasar esos datos a una hoja en Excel grafique e interprete.
- Repita el procedimiento modificar la variable de Ph: 3, 5,7, 9,11 con una temperatura de 40 ºC.
- Repita el procedimiento modificar la variable T: 20,35, 40, 45, 50, 60 con un Ph 7.
- grafique e intérprete. PREGUNTAS DE INVESTIGACIÓN 1. ¿Como afecta la concentración del sustrato y el PH a la velocidad de una reacción controlada por enzimas? En cualquier actitud catalizada, el sustrato debería unirse primero con la enzima para conformar el complejo enzima-sustrato. Para una concentración de sustrato especial, un crecimiento en la concentración enzimática se incrementa la rapidez de la actitud catalizada. A concentraciones enzimáticas más altas, más moléculas permanecen accesibles para unirse al sustrato y catalizar la actitud. A medida que la concentración de sustrato sea más grande que la concentración de la enzima, existe una interacción directa entre la concentración de la enzima y la actividad enzimática.
- Según los resultados obtenido con el gráfico. ¿Qué nos dice la relación entre la concentración del sustrato y la velocidad inicial de reacción catalizada enzimáticamente? A esto se le llama, la cinética enzimática y se mide el impacto de la concentración inicial de sustrato sobre la rapidez inicial de la actitud, manteniendo la proporción de enzima constante. Si representamos v0 ante [S]0. Una vez que [S]0 es pequeña, la rapidez inicial es de manera directa proporcional a la concentración de sustrato, y por
consiguiente, la actitud es de primer orden. A altas [S]0, el enzima está saturada por el sustrato, y la rapidez por el momento no es dependiente de [S]0. En este punto, la actitud es de orden cero y la rapidez es máxima (Vmax).
- ¿Cuál es el valor máximo para esta enzima en un PH 7? 20 30 40 50 60 70 80 90 0
Absorbancia - Temperatura
A 540
4. ¿Si este experimento se sometiera a varios tipos de temperatura que pasaría?
Muestra pH T (°C) A 540 1 7 30 0. 2 7 35 0. 3 7 40 0. 4 7 45 0. 5 7 50 0. 6 7 60 0. 7 7 70 0. 8 7 75 0. 9 7 80 0.
energía de las moléculas reactantes. A esta temperatura se destaca la desnaturalización con pérdida precipitada de la actividad catalítica. Por consiguiente las enzimas presentan una temperatura óptima de acción. Así como además se necesita conocer el ph debido a que es la magnitud máxima de la actividad de la enzima, pasa en el pH óptimo, con instantánea disminución de la actividad a cada lado de este costo de pH. La actividad óptima principalmente se observa entre los valores de 5 y 9. El pH óptimo de una enzima puede guardar interacción con cierta carga eléctrica de el área, o con condiciones optimas para la fijación de la enzima a su sustrato. REFERENCIAS: Gonzalez Mañas, J. M. (s. f.). Enzimas. Aspectos generales. Enzimas. Aspectos generales. Recuperado 17 de agosto de 2021, de http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz1.htm E. Coto, C. (s. f.). Curso de IntroducciÃ3n al Conocim. Curso de introducción al conocimiento. Recuperado 17 de agosto de 2021, de http://www.quimicaviva.qb.fcen.uba.ar/contratapa/aprendiendo/capitulo18.htm Merino Pérez, J. M. P., & Noriega Borge, M. J. (s. f.). Enzimas. Enzimas. Recuperado 16 de agosto de 2021, de https://ocw.unican.es/pluginfile.php/879/course/section/967/Tema %25202B-Bloque%2520I-Enzimas.pdf
