ESCUELA DE INGENIERÍA QUÍMICA
CARRERA: TÉCNICO EN LABORATORIO QUÍMICO
MÓDULO DE LABORATORIO
FUNDAMENTOS Y TÉCNICAS DE ANÁLISIS
MICROBIOLÓGICO
Nombre del
estudiante___________________________________________________
SANTA TECLA, FEBRERO 2022
1
Prepara tus exámenes
Prepara tus exámenes y mejora tus resultados gracias a la gran cantidad de recursos disponibles en Docsity
Consigue puntos base para descargar
Gana puntos ayudando a otros estudiantes o consíguelos activando un Plan Premium
Orientación Universidad
Prepara tus exámenes
Prepara tus exámenes y mejora tus resultados gracias a la gran cantidad de recursos disponibles en Docsity
Busca documentos
Prepara tus exámenes con los documentos que comparten otros estudiantes como tú en Docsity
Busca tu universidad
Encuentra los documentos específicos para los exámenes de tu universidad
Video Cursos
Estudia con lecciones y exámenes resueltos basados en los programas académicos de las mejores universidades
Quiz
Responde a preguntas de exámenes reales y pon a prueba tu preparación
Consigue puntos base para descargar
Gana puntos ayudando a otros estudiantes o consíguelos activando un Plan Premium
Comunidad
Pregúntale a la comunidad
Pide ayuda a la comunidad y resuelve tus dudas de estudio
Ebooks gratuitos
¡Nuestros e-books salva-estudiantes!
Descarga nuestras guías gratuitas sobre técnicas de estudio, métodos para controlar la ansiedad y consejos para la tesis preparadas por los tutores de Docsity
Análisis Microbiologico, Guías, Proyectos, Investigaciones de Microbiología
Manual de analisis microbiologico con practicas de laboratorio!
Tipo: Guías, Proyectos, Investigaciones
2018/2019
1 / 35
Esta página no es visible en la vista previa
¡No te pierdas las partes importantes!
Documentos relacionados
Vista previa parcial del texto
¡Descarga Análisis Microbiologico y más Guías, Proyectos, Investigaciones en PDF de Microbiología solo en Docsity!
ESCUELA DE INGENIERÍA QUÍMICA
CARRERA: TÉCNICO EN LABORATORIO QUÍMICO
MÓDULO DE LABORATORIO
FUNDAMENTOS Y TÉCNICAS DE ANÁLISIS
MICROBIOLÓGICO
Nombre del
estudiante ___________________________________________________
SANTA TECLA, FEBRERO 2022
INTRODUCCIÓN El modulo Fundamentos y Técnicas de Análisis Microbiológico se refiere al estudio de los microorganismos, seres vivos pequeños, también conocidos como microbios. Es la rama de la biología dedicada a estudiar los organismos que son sólo visibles a través del microscopio: organismos procariontes y eucariontes simples. Son considerados microbios todos los seres vivos microscópicos, estos pueden estar constituidos por una sola célula (unicelulares), así como pequeños agregados celulares formados por células equivalentes (sin diferenciación celular); estos pueden ser eucariotas (células con núcleo) tales como hongos y protistas, procariotas (células sin núcleo definido) como las bacterias. Sin embargo la microbiología tradicional se ha ocupado especialmente de los microorganismos patógenos entre bacterias, virus y hongos, dejando a otros microorganismos en manos de la parasitología y otras categorías de la biología. Cada práctica de este módulo está estructurada de conformidad a lo desarrollado en la clase expositiva conforme al programa de unidad. Es de fácil comprensión, pero requiere la asistencia del Instructor conocedor de la asignatura para ampliar la explicación del contenido de cada guía del Laboratorio. Los cuestionarios están enfocados a la verificación de la comprensión de la teoría y a la interpretación de las observaciones que surgen de la práctica.
EXPERIMENTO No. MICROSCOPIO I RESULTADOS DE APRENDIZAJE: El alumno al final de la práctica tendrá las siguientes habilidades:
- Identifica las partes de que consta el microscopio.
- Maneja correctamente el microscopio. INTRODUCCIÓN El microscopio es un instrumento que permite observar objetos muy pequeños que no se pueden observar a simple vista, es decir inferiores a 0.1 mm. Los microscopios se clasifican en SIMPLES Y COMPUESTOS. Los Microscopios Simples consisten en una sola lente, tal como la lupa, estos lentes son de bajo aumento o magnificación. Los microscopios compuestos producen imágenes por una serie de 2 o más lentes. Dada la importancia de esta práctica, se ha creído conveniente dedicarle 2 sesiones de laboratorio: Microscopio I, Microscopio II. La primera parte cubre aspectos sencillos del manejo, reconocimiento de las partes del microscopio y de la habilidad al enfocar con los objetivos secos (aquellos que no necesitan de aceite cualquier otra sustancia líquida para su uso). La segunda parte comprende dos aspectos muy importantes del manejo del microscopio, como son: a. El uso del objetivo de inmersión. b. El estimado de magnificación. Además de los Microscopios simples y compuestos normales, se construyen otros para observaciones especiales, uno de ellos es el : MICROSCOPIO ELECTRÓNICO. El microscopio electrónico es el único instrumento que permite conocimiento directo de la ultra estructura biológica debido a que posee un poder de resolución mucho mayor que el microscopio óptico, utiliza la propiedad que tienen los haces de electrones de ser desviados por el campo electrostático o electromagnético, en la misma forma que un rayo de luz es refractado al atravesar una lente. MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES : Su sistema óptico especial se basa en el hecho de que las ondas que pasan a través de los objetos transparentes, como las células, toman una fase diferente que depende de las propiedades de los materiales a los cuales atraviesan, y convierte estas diferencias de fase en una fase de intensidad, permitiendo diferenciar estructuras internas en células vivas, sin que sea necesario someterlas a proceso de tinción.
Usted empleará un microscopio compuesto de campo claro binocular con el que se obtienen imágenes bidimencionales. Para una mejor información de las prácticas sobre el microscopio, se le recomienda estudiar la siguiente información: PODER DE AUMENTO O MAGNIFICACIÓN: Es la capacidad del microscopio de proporcionar imágenes aumentadas de un objeto. La magnificación total de un microscopio se obtiene multiplicando el aumento normal del objetivo por el aumento del ocular. PODER DE RESOLUCION: Es una medida de la capacidad del microscopio para revelar detalles muy finos en el objeto. El poder resolutivo del microscopio depende generalmente de la apertura numérica del objetivo. APERTURA NUMERICA: (A.N.) Es la expresión cuantitativa del poder de resolución y la cantidad de luz que puede captar un objetivo. Cuanta más alta sea la Apertura Numérica, más complejo y costoso es el sistema de lentes. PROFUNDIDAD DE FOCO O PROFUNDIDAD DE CAMPO: Se refiere al poder de penetración del objetivo. Es la distancia a través de la cual los detalles de un objeto se ven enfocados simultáneamente. La profundidad de foco está en relación inversa a la Apertura Numérica. DISTANCIA DE TRABAJO: Es el espacio entre la lente frontal y la cara superior del cubre objeto. La distancia de trabajo en los objetivos de alto poder resolutivo (seco fuerte e inmersión) es muy pequeña. SISTEMA OPTICO DE INMERSION HOMOGENEA: Son aquellos en los cuales se intercala un líquido especial, aceite de cedro o de inmersión, entre la lente frontal del objetivo y la preparación. Este líquido es usado debido a que tiene el mismo índice de refracción que el cubre objeto, porta objeto y la lente frontal del objetivo. La ventaja de los sistemas de inmersión es el incremento del poder resolutivo, gracias al aprovechamiento de haces cónicos de rayos de gran ángulo de abertura. A. CUIDADO DEL MICROSCOPIO.
- Nunca debe tocar los lentes de los objetivos directamente con los dedos, ya que la grasa de la piel producirá una imagen borrosa del objeto.
- Para limpiar el sistema óptico utilizar siempre papel para lentes.
- Cuando se transporte el microscopio, se debe tomar el brazo con una mano y colocar la otra debajo de la base para sostenerlo manteniendo el microscopio en posición vertical.
- Evite golpear el microscopio contra la mesa, no lo someta a movimientos bruscos.
- Si accidentalmente moja el microscopio, debe secarlo de inmediato con papel absorbente.
- Quitar el aceite de inmersión del microscopio con papel para lentes.
SISTEMA ÓPTICO.
OCULAR: Se encuentra en el extremo superior del tubo estativo y está constituido por un complejo de lentes. El ocular lleva un número principal que indica el aumento que proporciona; éste número puede ser 5X, 10X u otro número. El ocular se desprende con gran facilidad; por lo que usted debe tener cuidado al descubrir y manipular el microscopio. OBJETIVOS: Cada uno de ellos está constituido también por un complejo de lentes que va enroscado al revólver. Los objetivos se reconocen principalmente por el aumento que proporcionan así como también por su tamaño. a. OBJETIVO PANORÁMICO: Es el más pequeño, lleva grabado un número 4 que indica su aumento normal. Además lleva el número 0.08 que indica la apertura numérica. b. OBJETIVO SECO DÉBIL: Lleva grabado el número 10 que corresponde a su aumento o magnificación. Su apertura numérica es 0.25. c. OBJETIVO SECO FUERTE: El número 40X que lleva, indica el aumento que proporciona. Su apertura numérica es 0.6. d. OBJETIVO DE INMERSIÓN: Este objetivo proporciona la mayor magnificación o aumento que es 100X; su apertura numérica es de 1.25. Este objetivo se reconoce también por una cinta blanca que lleva grabada.
3. SISTEMA DE ILUMINACIÓN. FUENTE DE ILUMINACIÓN: se trata clásicamente de una lámpara incandescente de tungsteno sobrevoltada; en versiones más modernas con leds. Por delante de ella se sitúa un condensador (una lente convergente) e, idealmente, un diafragma de campo, que permite controlar el diámetro de la parte de la preparación que queda iluminada, para evitar que exceda el campo de observación produciendo luces parásitas. CONDENSADOR: Es un juego de lentes que nos permite concentrar los rayos luminosos que provienen de la fuente, se halla debajo de la platina, puede deslizarse sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo que determina su movimiento ascendente o descendente. DIAFRAGMA: Está anexado al condensador y amplía o disminuye el orificio por donde le llega la luz a la preparación a observar. Esto sirve para controlar la iluminación y el contraste.
Microscopio binocular Microscopio monocular MATERIALY EQUIPO Tijera, preparación fija de ala de mosca, gotero, microscopio, pinza, papel limpia lentes, porta-objeto y cubre-objeto, piceta PROCEDIMIENTO OBSERVACION DE PPREPARACION DE CABELLO ● Agregar una gota de agua destilada en el centro del porta-objeto, obtenga un fragmento de cabello y con la ayuda de una pinza coloque el cabello en el centro de la gota. ● Con mucho cuidado colocar el cubre objeto siguiendo las indicaciones del Instructor, a fin de evitar la formación de burbujas. ● Para enfocar la preparación microscópica se debe bajar la platina completamente y colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo. Es importante comenzar siempre la preparación con el objetivo panorámico ya que permite seleccionar el área más adecuada de la preparación para su posterior observación. ● Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas. ● Para realizar el enfoque acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo micrométrico. Este pasos se debe hacer mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación y romperla o causar daño al objetivo.
● ¿Observa cerdas en la vena del ala? ● ¿Qué forma tienen las cerdas observadas? ● ¿Se encuentran todas las cerdas visibles al mismo tiempo? ● ¿Observa una o varias cerdas en el centro del ala? ● ¿Es completamente visible toda la cerda? ● ¿Existen cerdas en ambas superficies del ala? ● ¿Cuáles cerdas se encuentran en la superficie superior? ● ¿Qué manipulación y que proceso mental deben operar conjuntamente para obtener un concepto tridimensional de un objeto cuando se observa en el microscopio? ESQUEMAS DEL ALA DE MOSCA OBJETIVO PANORAMICO OBJETIVO SECO DEBIL OBJETIVO SECO FUERTE CUESTIONARIO:
- Investigue los siguientes términos: a. Lente convergente: b. Lente divergente: c. Cuerpo traslúcido: d. Refracción:
- Cuál es la diferencia del microscopio simple al microscopio compuesto.
- A que se le llama microscopía de contraste de fases y microscopía de campo oscuro.
EXPERIMENTO No. 2 MICROSCOPIO PARTE (II) RESULTADOS DE APRENDIZAJE: Al finalizar la práctica el estudiante tendrá las siguientes capacidades:
- Utiliza adecuadamente el objetivo de inmersión.
- Aprende a medir el diámetro del campo observado con los diferentes objetivos y de esta manera calcular el tamaño de un objeto microscópico.
- Comprende el significado de los términos: magnificación, inversión.
- Calcula el grado de magnificación o aumento de un objetivo INTRODUCCIÓN El objetivo de inmersión en aceite, se designa así porque se coloca una gota de aceite sobre la preparación que lleva la muestra y el objetivo se introduce en el aceite, la muestra se enfoca cuando está en contacto la preparación, el aceite y la lente frontal del objetivo. El aceite permite que entre más luz en el objetivo, como el objetivo de inmersión en aceite proporciona la ampliación más alta, se utiliza generalmente para el examen microscópico de células procarióticas. Hay que tener sumo cuidado al enfocar con un objetivo de inmersión porque la muestra queda enfocada cuando la lente frontal del objetivo está muy cerca de la superficie de la preparación. Se puede estropear la lente del objetivo o se puede romper el cubreobjeto si no se tiene mucho cuidado. El objetivo de inmersión produce la mayor magnificación que puede alcanzar un microscopio. Este objetivo tiene la apertura numérica más alta de todos los objetivos y generalmente tiene una banda de color para su fácil identificación. Este objetivo está diseñado para producir alta magnificación y alta resolución. Generalmente se usa aceite especial en el área de interés, el cual debe tener el mismo índice de refracción, que la lente frontal del objetivo, el porta-objeto y el cubre-objeto. MAGNIFICACIÓN: Es la capacidad que tiene un objetivo de proporcionar imágenes aumentadas. El grado de magnificación o aumento se encuentra de la siguiente manera: Ej: aumento del ocular : 10X Aumento del objetivo : 4X Magnificación : 40X INVERSIÓN: Es una propiedad o característica física de las lentes, este fenómeno lo podemos corregir colocando combinaciones de lentes, de tal manera que se vuelva a invertir la imagen.
B. INVERSIÓN
- Coloque sobre la platina la preparación permanente de la letra “e”, observe con el objetivo panorámico. Realice esquema de lo observado.
- ¿Se observa la letra en la misma posición que cuando se ve a simple vista?.
- ¿A qué se debe lo observado en la pregunta anterior?.
- Enfocarla letra “b” y anotar sus resultados ¿qué letra observa en el campo visual?. ESQUEMAS DE INVERSION DE LA LETRA e y b C. OBJETIVO DE INMERSIÓN Enfoque con el objetivo de inmersión la preparación de ala de mosca siguiendo al pie de la letra los siguientes pasos: Primeramente enfoque la preparación con el objetivo panorámico Seguidamente enfoque con los objetivos seco débil y luego con seco fuerte. Gire un poco el revólver sin llegar hasta el objetivo de inmersión y coloque una gota de aceite de inmersión sobre el área de la preparación a observar. Mirando por un lado del microscopio, lleve el objetivo de inmersión, girando despacio el revólver, hasta que haga contacto con la gota de aceite. Observe la porción de ala de mosca que está en el campo del objetivo de inmersión y responda lo siguiente:¿Cuál es el nombre del objetivo en donde se observan más los detalles de las cerdas?. ¿A qué magnificación están las cerdas que usted observa? Si el ocular tuviera un aumento de 15X, ¿a qué magnificación observarían las cerdas si estuviera trabajando con el objetivo de inmersión? ¿Es la amplitud del campo del objetivo panorámico mayor o menor que la amplitud del objetivo de inmersión? ¿Es el poder de resolución del objetivo panorámico mayor o menor que el objetivo de inmersión?
Para quitar la preparación, baje la platina hasta el tope, gire el revólver hasta el objetivo panorámico; quite la preparación, limpie suavemente el objetivo de inmersión hasta que no quede residuos de aceite y la preparación utilizando papel absorbente el cual se proporcionará en la práctica. Evite el contacto de los objetivos secos con el aceite de inmersión. Objetivo de inmersión
produce cambios de pH, formación de grumos, decoloración de polvo, esto significa que deben ser descartados ya que han sufrido cambios químicos o están contaminados. Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado se puede almacenar a temperatura ambiente por un periodo máximo de dos semanas protegido de la luz, siempre y cuando se cuente con una esterilidad efectiva. Almacenados bajo refrigeración entre 2 y 8oC se prolonga la vida útil de los mismos, no se debe almacenar por debajo de 0^0 C porque se destruye la estructura del gel. MATERIAL Y EQUIPO: caja Petri y tubo de cultivo (esterilizadas anteriormente), erlenmeyer de 125 mL y 50 mL, 2 espátulas, 2 agitador de vidrio, 2 portamuestras pequeños, mechero, hot-plate, piceta, algodón, probeta de 50 mL, autoclave, esponja, balanza granataria, cepillo, gradilla para tubos, refrigeradora, cepas de BacillusSubtillus o StaphyloccocusAureus papel craft o aluminio ( alumno ) REACTIVOS Agar Triptona soya, alcohol isopropilico, caldo nutritivo PROCEDIMIENTO A. PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO SOLIDOS
- Realice el cálculo correspondiente para preparar 40 mL de Agar Triptona Soya, leer cuidadosamente las instrucciones de preparación del medio de cultivo asignado. (Instructor dará las indicaciones).
- Desinfectar el área de la mesa con alcohol isopropilico, pesar en un porta muestra la masa del medio de cultivo, seguidamente verter en el Erlenmeyer, Disolver la porción pesada en los 40 mL de agua destilada, calentar cerca del punto de ebullición, retirar del hot plate.
- Flamear la boquilla del Erlenmeyer y colocar una torunda de algodón, flamear nuevamente y soplar el algodón, seguidamente colocar en la boquilla un pedazo de papel de aluminio y rotular.
- Esterilizar en el autoclave siguiendo las instrucciones.
- Finalizada la esterilización sacar el medio y distribuirlo de la siguiente manera: aproximadamente verter la mitad del medio dentro de una caja Petri y el sobrante depositarlo sobre un tubo de cultivo y colocarlo en posición inclinada. (recordar que todo este proceso se realiza con el mechero encendido).
- Esperar que solidifique el medio de Cultivo y seguidamente colocarlo en la refrigeradora debidamente identificado PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO LÍQUIDO
- Realice el cálculo respectivo para preparar 20 mL de caldo nutritivo, leer la etiqueta del frasco.
- Esterilizar la mesa de trabajo con alcohol isopropilico y encender el mechero.
- Pesar dentro de un porta muestra la masa del medio de cultivo y luego transferirlo dentro de un Erlenmeyer de 50 mL, disolver por completo en 20 mL de agua destilada.
- Destapar el tubo y flamear la boca de este, adicionar el caldo preparado, flamear nuevamente y taparlo. Rotular y esterilizar en la autoclave siguiendo las instrucciones señaladas, guardar en la refrigeradora para la siguiente sesión.
Siembra en placa (estriado): en este tipo de siembra se toma la muestra con el asa la cual se pasa por la parte superior del medio realizando líneas paralelas entre sí. Girar la placa y sembrar en ángulo perpendicular a las líneas paralelas ya hechas, de modo que el resultado sea una serie de líneas que formen pequeños cuadrados sobre la superficie del medio. Las placas se incuban invertidas, ya que la alta concentración de agua en el medio puede provocar condensación durante la incubación y si cae sobre la superficie del agar, se extiende dando un crecimiento confluente. Siembra en medio liquido: En los cultivos líquidos no tiene lugar la formación de colonias, por lo tanto no sirven como técnica de aislamiento. La utilización de medios de cultivo líquidos permite la obtención de una población microbiana grande con un elevado número de microorganismos para ser utilizados posteriormente. En estos cultivos se examinará la existencia de enturbiamiento más o menos intenso, la formación de una película o velo sobre la superficie, la aparición de sedimento en el fondo del tubo, etc.
Morfología Colonial Los microorganismos que crecen sobre superficie sólida, tienden a formar agrupaciones que se denominan colonias. Las colonias suelen ser de características constantes para el medio de cultivo usado, la temperatura de incubación, y el microorganismo del que se trate, por lo que su estudio es de gran utilidad tanto en la clasificación como en la identificación. Una colonia microbiana está constituida por individuos de la misma especie provenientes de una célula o de un grupo de ellas, llamados UNIDAD FORMADORA DE COLONIAS (UFC). Las características consideradas para la descripción de la morfología colonial de las bacterias son en un medio sólido son las siguientes: a. Forma: Puntiforme, circular o irregular. b. Tamaño: Se da en milímetros, y puede variar desde colonias extremadamente pequeñas que miden apenas unos milímetros de diámetro hasta aquellas que llegan a medir 10 mm ó más. Algunas especies bacterianas pueden extenderse en toda la superficie del agar. c. Color: Las colonias pueden tener variados colores, debido a pigmentos propios o absorción de algunas sustancias del medio. d. Bordes: Pueden ser enteros o mostrar irregularidades como lóbulos, filamentos, proyecciones como dientes de sierra o enrollados. e. Elevación: Las colonias pueden ser planas o elevada, ésta última a su vez puede ser convexa, pulvinada, umbonada, crateriforme o umbilicada. f. Superficie: Puede ser lisa, rugosa, o granulada. g. Aspecto: Puede ser húmedo o seco. h. Luz reflejada: brillante o mate. i. Luz transmitida: transparente, translucida y opaca. j. Consistencia: Suave (butirosa, mucoide, o friable) y dura. Esta característica se determina tocando la colonia con el asa y por lo tanto puede ser la última antes de escribirse. k. Producción de pigmentos: Algunas bacterias producen pigmentos solubles en agua, que puede difundir al medio de cultivo.