aplicaciones de la microscopía, Apuntes de Biología

¡Descarga aplicaciones de la microscopía y más Apuntes en PDF de Biología solo en Docsity!

Métodos

en

Biología,

Seminarios

Curso

Aplicaciones

generales

y

Observación

y

Examen

y

Descripción

y

Comparación

y

Representación

y

Gráfica

y

Fotográfica/Vídeo

y

3 ‐ D

Rango de resolución de los microscopios Lupa estereoscópica Microscopio óptico Microscopioelectrónico

Usos

de

la

lupa

estereoscópica

y

Observación

macroscópica

y

Reconocimiento

taxonómico

y

Disecciones

y

Ventajas:

y

Preparación sencilla

y

Trabaja a bajo aumento

y

Con amplitud de campo

y

Crea imágenes tridimensionales

Usos de diversos microscopios ópticos Microscopía de campo claro Microscopía de contraste de fases Microscopía de interferencia diferencial Microscopía de campo oscuro

Preparación de muestras permanentes y

Fijación:

y El fijador inmoviliza, mata y preserva las células, las hace más permeables a los colorantes y establece puentes cruzados entre sus moléculas, de manera que quedan estabilizadas y bloqueadas en su posición original. y Fijadores: alcohol, aldehídos activos (formaldehído, glutaraldehído). y

Inclusión

y Se incluyen en un medio que ofrezca consistencia (ceras, resinas). y

Sección

y Los tejidos suelen ser cortados en finas rebanadas (secciones). Por ejemplo, con un microtomo

‐^5

‐^6 m). y Se suelen extender en un portaobjetos. y (Sección por congelación: utiliza un criostato

microtomo en cámara fría. Evita los pasos anteriores). y

Extensión

y Sobre un portaobjetos. y El uso de cubreobjetos evita la desecación, el abarquillamiento de la muestra y que la superficie líquida actúe como lente.

Microscopio

de

campo

claro

Conductos colectores de la orina, riñón (hematoxilina y eosina) Sección de raíz (safranina y verde rápido) y Tinción y Colorantes orgánicos (verde malaquita, negro Sudán, azul de Coomassie). Algunos tienen una afinidad específica por ciertos componentes celulares (p.e. hematoxilina con moléculas con carga negativa). y Colorantes cada vez más específicos, según se ha ido conociendo la química celular. y Colorantes cualitativos, fluorescencia. Por ejemplo, fluoresceína, rodamina.

Microscopio

de

campo

oscuro

Amoeba proteus (Pallas,

Larva nauplius de crustáceo Foraminíferos Células sanguíneas humanas Fundamento: observación de luz dispersada por la muestra Uso: muestras transparentes y/o vivas. Hay que iluminar mucho la muestra. Útil para análisis cuantitativos

Microscopio de contraste de fases Célula epitelial Alga diatomea Amoeba proteus (Pallas,

Fundamento: basado en los cambios del índice de refracción de la luz al atravesar una muestra. Convierte diferencias de fase de las ondas lumínicas en diferencias de intensidad (de amplitud) Uso: muestras transparentes y/o vivas. Observación de ciclos celulares y orgánulos (mitocondrias, lisosomas, cromosomas, nucléolos, etc.). M.O. campo claro M.O. contraste de fases

Microscopio de interferencia diferencial Miocito de corazón de ratón adulto (contraste de fase e interferencia diferencial) Amoeba proteus (Pallas,

M.O. campo claro M.O. interferencia diferencial Rotífero Fundamento: basado en la interferometría. Ofrece una imagen en relieve, de acuerdo a los cambios de absorbancia de la muestra Uso: como anterior, pero se intensifica el contraste, al evitarse el halo que rodea la muestra.

Microscopio de fluorescencia Tinciones fluorescentes Proteínas celulares fluorescentes Célula en mitosis Se han observado tres elementos fluorescentes: microtúbulos en verde, centrómeros en rojo, ADN en azul Fundamento: basado en la absorción de luz por un fluoróforo (o fluorocromo) y su emisión en otra longitud de onda Uso: detección de cantidades mínimas de algún material (anticuerpos, histonas, actina, miosina); visualización de componentes de difícil observación y determinación de su orientación (ácidosnucleicos); detección de anomalías (bandas cromosómicas)

Microscopio de fluorescencia Nanopartículas fluorescentes o puntos cuánticos (cristal) Tinciones fluorescentes y nanopartículas Proteína nuclear en verde (Alexa

y microtúbulos en rojo (nanopartículas con estreptavidina)

Microscopio de fluorescencia Célula cancerígena humana en división ADN en azul, proteína del centrómero en verde, microtúbulos en rojo Célula endotelial de arteria pulmonar de vaca Núcleo en azul (DAPI), microtúbulos en verde (anticuerpo unido a FITC), filamentos de actina en rojo (faloidina unida a TRITC )

Microscopio electrónico de transmisión Microscopio de fluorescencia (Antitubulina fluorescente) Microscopio de fluorescencia