Bioquimica-cinética, Apuntes de Bioquímica

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PROBLEMAS SEMINARIO CINÉTICA ENZIMÁTICA

PROBLEMAS SEMINARIO CINÉTICA ENZIMÁTICA PROBLEMA N”* 1 Se desea analizar la cinética de hidrólisis del enlace peptídico de la molécula N-henzoil-arginina-p-nitroanilida (BAPNA) catalizada por la papaína; generando entre otros productos de reacción la p-nitroanilina, lo que permite seguir espectrofotométricamente el progreso de la reacción: NH N-a-benzoylarginine-p-ntroanide úpenitrcanilno: (BAPNA) (velos) a) Determinar Km, y V max [Sustrato] mM Velocidad (mm/s) 0.02 01 02 0.05 03 0.10 04 0.20 0.30 05 052 b) ¿Por qué la velocidad inicial permanece constante a una [S] mayor de 0.20 mM? c) ¿Cuál es la concentración de enzima libre para una [S] de 0.20 mM? d) Calcular la velocidad inicial para [S]-0.13 mM PROBLEMA N” 2 En una preparación enzimática conteniendo 58 ug de enzima/ml, se determinó la actividad enzimática midiendo la variación en la absorbancia del sustrato empleado con el tiempo. La mezcla de reacción contenía 0.1 ml del extracto enzimático al que se añadieron diferentes concentraciones del sustrato disuelto en el mismo tampón, hasta una volumen final de 2 ml. Las reacciones enzimáticas se llevaron a cabo en condiciones óptimas de pH, temperatura y fuerza iónica. Los valores de las velocidades iniciales de la reacción para diferentes concentraciones de sustrato figuran en la siguiente tabla: a) Determinar Ky, y Vaz b) Sabiendo que el peso molecular del enzima es de 125000 Da y que contiene dos subunidades idénticas de 62500 Da, teniendo cada una de ellas un centro catalítico para el sustrato, determinar: la actividad específica, la actividad molecular, la constante catalítica de la reacción y la actividad por centro catalítico. [Sustrato] M Velocidad (M/ min) 1010% 6818:10% 5.010% 25 10% 10107 37.5 10% 2.5107 53.571 10% 50107 52.5 10% 7.5107 65.176 10% 1010% 68,182 10%