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Laboratorio de bioquímica, ensayos de laboratorio
Tipo: Guías, Proyectos, Investigaciones
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Universidad de Guayaquil Facultad de Ciencias Químicas Carrera: Química y Farmacia Número de la PL 6
Objetivos de la práctica de laboratorio 1- Realizar reacciones colorimétricas cualitativas que sirven para identificar aminoácidos en base a su estructura o grupo funcional 2- Producir la nitración del grupo fenólico de aminoácido triptófano 3- Reconocer los grupos tioles e imidazol de los aminoácidos cisteína e histidina 4- Demostrar la presencia de estos aminoácidos en diversas muestras de proteínas Instrucciones o consideraciones previas Las proteínas son uno de los principales componentes de todas nuestras células. Los aminoácidos son la unidad básica de las proteínas y se agrupan de acuerdo con su comportamiento químico. La unión de dos o más aminoácidos mediante enlaces amida originan los péptidos. En los péptidos y las proteínas estos enlaces reciben el nombre de enlaces peptídicos y son el resultado de la reacción del grupo carboxilo de un aminoácido con el grupo amino de otro. Si el péptido está formado por 15 AA se trata de unoligopéptido. Cuando contiene entre 15 y 50 AA se trata de un polipéptido y si el número es mayor se habla de proteínas. La síntesis de las proteínas ocurre mediante la unión entre sí de las cadenas de aminoácidos. Se conocen 22 L-α aminoácidos que se clasifican por las propiedades químicas de su grupo -R o cadena lateral. Las proteínas deben sus propiedades físicas, químicas, fisicoquímicas y biológicas, al tipo de aminoácidos que las forman. Debido a la presencia de diferentes aminoácidos en las uniones peptídicas las proteínas reaccionan con una variedad de compuestos formando productos coloreados. Existen reacciones de coloración queson específicas para aminoácidos de esas proteínasy son importantes tanto para la detección como parael dopaje de aminoácidos y proteínas. Existen también reacciones generales porque sirven para caracterizar grupos comunes a todas las proteínas como grupos amino o uniones peptídicas como lo son las reacciones de ninhidrina y biuret. El objetivo de esta práctica es identificar a los L-αaminoácidos y las proteínas por métodos colorimétricos para diferenciarlos por sus propiedades del grupo R o cadena lateral. AMINOÁCIDOS ESENCIALES: Isoleucina: Junto con la L-Leucina y la hormona del crecimiento intervienen en la formación y reparación del tejido muscular. Leucina: Junto con la L-Isoleucina y la hormona del crecimiento (HG), interviene con la formación y reparación del tejido muscular. Lisina: Es uno de los más importantes aminoácidos porque, en asociación con varios aminoácidos más, interviene en diversas funciones, incluyendo el crecimiento, reparación de tejidos, anticuerpos del sistema inmunológico y síntesis de hormonas. Metionina: Colabora en la síntesis de proteínas y constituye el principal limitante en las proteínas de la dieta. El aminoácido limitante, determina el porcentaje de alimento que va a utilizarse a nivel celular. Fenilalanina: Interviene en la producción del colágeno, fundamentalmente en la estructura de la piel y el tejido conectivo, y también en la formación de diversas neuro-hormonas. Triptófano: Está implicado en el crecimiento y en la producción hormonal, especialmente en la función de las glándulas de secreción adrenal. También interviene, en la síntesis de la serotonina , neuro-hormona involucrada en la relajación y el sueño. Treonina: Junto con la con la L-Metionina y el ácido Aspártico, ayuda al hígado en sus funciones generales de desintoxicación.
Valina: Estimula el crecimiento y reparación de los tejidos, el mantenimiento de diversos sistemas y balance de nitrógeno. Reactivos de laboratorio 1- Solución de albumina al 1 % 2- Solución de caseína al 1 % 3- Solución de gelatina 1 % 4- Soluciones de aminoácidos al 0.2 % (Triptófano, tirosina, arginina, cisteína, metionina) 5- Reactivo de Millon 6- Hidróxido de sodio 2M (NaOH) 7- Acetato de plomo 2 % Pb(C 2 H3O 2 ) 2 8- Ácido sulfanílico C 6 H 7 NO 3 S 9- Nitrito de sodio NO2Na 10- Nitroprusiato de sodio al 2 % Na 2 Fe (CN) 5 NO 11- Hidróxido de amonio NH 4 OH 12- Ácido nítrico © NO 3 H 13- Hipoclorito de sodio alcalino ClONa 14- Alfa naftol al 0.1 % C 10 H 8 O
La muestra de clara de huevo se precipita al momento de adicionar ácidos. A partir de esto, por el carácter ácido del reactivo se presenta un cambio abrupto en las cargas formales de los grupos esenciales de las proteínas presentes, esto afecta las interacciones de la estructura terciaria, produciendo la desactivación y posterior degradación de las proteínas. Precipitación con metales pesados Estos cationes por efecto de la fuerza iónica destruyen la estructura espacial de la proteína y la precipitan. Precipitado blanco con acetato de plomo. Además, las proteínas solubles pueden precipitarse con una concentración mayor de la misma sal. Efecto de la temperatura Cuando la temperatura es elevada aumenta la energía cinética de las moléculas, lo cual genera una desorganización de la envoltura acuosa de las proteínas, dicha desorganización genera finalmente la desnaturalización de la proteína. Así mismo, un aumento de la temperatura destruye las interacciones débiles y desorganiza la estructura de la proteína, de forma que el interior hidrófobo interacciona con el medio acuoso y se produce la agregación y precipitación de la proteína desnaturalizada. Conclusiones Existen diferentes pruebas para la identificación de proteínas y aminoácidos que permiten establecer un resultado positivo o negativo de acuerdo a las características y composición de cada una de ellas, evidenciado en coloraciones, presencia de anillos, etc. Se establecieron las características de estas pruebas para y se logró la identificación cualitativa de sustancias que pueden contener aminoácidos, proteínas o péptidos Existen diferentes pruebas para la identificación de proteínas y aminoácidos que permiten establecer un resultado positivo o negativo de acuerdo a las características y composición de cada una de ellas, evidenciado en coloraciones, presencia de anillos, etc. Se establecieron las características de estas pruebas para y se logró la identificación cualitativa de sustancias que pueden contener aminoácidos, proteínas o péptidos. La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalización VII. Recomendaciones Seguir las instrucciones del material, ya sea como enfriar o calentar un determinado tiempo para llevar a cabo las reacciones y observarlas adecuadamente. Tener en cuenta la cantidad utilizada de los reactantes para obtener la aparición de los diferentes colores presentados en la práctica. Tener en cuenta las explicaciones de la profesora en las distintas prácticas que se realiza en el laboratorio. Bibliografía.