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Asignatura: microbiologia I, Profesor: tomas gonzalez villa, Carrera: Farmacia, Universidad: USC
Tipo: Apuntes
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Proceso de clonación de genes para aumentar la producción y disminuir costes. Comienza en 1978 con la necesidad de producir insulina y hormona del crecimiento. Nació como una necesidad (había poca insulina y era cara).La biotecnología se utiliza para producir fármacos de bajo coste. Las aplicaciones de la biotecnología son numerosas y suelen clasificarse en: Biotecnología verde-relacionada con plantas y actividades agrícolas fundamentalmente ( plantas transgénicas, plaguicidas). Biotecnología roja –la aplicada a procesos médicos (antibióticos, vacunas). Utiliza la tecnología del DNA recombinante para obtener una cepa productora de una línea celular que produzca al fármaco a bajo coste. Todo ello como fruto de la aplicación de las endonucleasas de restricción (Son aquellas que puede reconocer una secuencia característica de nucleótidos dentro de una molécula de ADN y cortar el ADN en ese punto en concreto).
Enzimas de restricción tipo II
El descubrimiento de las endonucleasas de restricción condujo al desarrollo de la tecnología de ADN recombinante. El primer uso práctico fue la manipulación de la bacteria E. coli para producir insulina humana para los diabéticos. La primera en ser descubierta fue la Eco RI-aislada de E. Coli (significado de esta abreviatura: E- genero de la bacteria: Escherichia co-especie bacteria- Coli, R-cepa bacteria, I grupo de incompatibilidad tipo 1). Las endonucleasas de restricción tipo II reconocen la metilación de la guanina y cortan en esta zona que reconocen, las de tipo I no nos sirven ya que cortan mas allá y no son precisas.
Plásmidos
Plásmidos son cadenas circulares de ADN que se encuentran fuera de los cromosomas de un organismo, y poseen mecanismos intrínsecos para su duplicación. Los organismos que los poseen pueden transferirlos de uno a otro, intercambiando así características genéticas determinadas tanto inherentes de ese organismo como adquiridas por manipulación técnica. Dichas características pueden ser benéficas para el organismo portador del plásmido, como resistencia a una sustancia ambiental dañina, como puede ser un antibiótico, o nocivas, como venenos celulares insertados por algunas levaduras en sus competidoras en medios naturales.
Conjugativos – (plásmido F) no son importantes (obtienen 1 o 2 copias no sirven). El primer plásmido diseñado y utilizado lo construyo el doctor Francisco Bolívar, es el pBR
No Conjugativos – Derivan de un plásmido silvestre (Col E 1-plásmido de E. Coli).Son muy activos y en condiciones adecuadas permiten llegar a las 4-5000 copias.
1.-Cultivo de E. Coli para obtener el plásmido. 2.-Aislamiento y purificación del plásmido. 3.-Ahora tratamos el plásmido y el DNA de un organismo que nos interesa (porque tenga un gen de interés por ejemplo uno que codifique un antibiótico) con una enzima, en este caso ECORI que rompe el plásmido y el DNA por el mismo punto. 4.-El plásmido obtenido (se unen por la zona de corte ya que la secuencia de bases es compatible) cambia sus características iniciales (en este caso produce el antibiótico deseado).
Ejemplo en el plásmido PBR
PBR322- Contiene dos genes de resistencia a antibióticos: uno confiere resistencia a ampicilina (Ampr) y el otro a tetraciclina (Tetr) y varios sitios de corte. Dentro de la secuencia de un gen de resistencia a antibiótico hay un sitio de corte (lo abrimos con una enzima de restricción) Si insertamos el DNA foráneo (Previamente cortado usando las mismas enzimas de restricción) en el gen que codifica la resistencia a la tetraciclina, el plásmido ya no conferirá resistencia a este antibiótico mientras que el gen de resistencia a la ampicilina permanece funcional. Por lo tanto, las colonias resultantes serán resistentes a la ampicilina y carecen de resistencia a la tetraciclina.
La destrucción de uno de los genes de resistencia a un antibiótico y el mantenimiento de un segundo gen de resistencia a otro antibiótico permite la detección de colonias bacterianas que tienen DNA foráneo situado entre el vector recombinante de replicación.
El plásmido inventado por el Dr. Bolívar le brinda a la célula portadora del plásmido la capacidad de desarrollarse en un medio de cultivo con un antibiótico. Esta aportación demuestra lo que es la selección negativa, porque con esto se puede buscar que la colonia de bacterias pierda una función específica, en este caso la resistencia a la tetraciclina, mediante la manipulación genética.