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todo el estudio necesario que necesitas para adentrarte a el tema de los virus.
Tipo: Tesis
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1. CARACTERISTICAS DE LOS VIRUS.
Todos los seres vivos del planeta tienen virus que los parasitan, iinfectan cé lulas para reproducirse, así que su principal importancia ecoló gica es el control poblacional; no obstante, los virus tienen la habilidad de introducir material gen é tico en las cé lulas. A lo largo de la historia natural se ha descubierto que los virus han ayudado a configurar los genomas de las especies. En microorganismos, los virus pueden directamente funcionar como una fuente de variació n que implique un proceso evolutivo. Para tener una peque ñ a idea de lo impactante que los virus y bacterias han sido para los seres humanos, de forma natural, basta con decir que dentro del propio ADN humano encontramos un 8% de ADN procedente de virus ancestrales. Estos virus afectaron a nuestros abuelos y ancestros mucho m á s lejanos, pero ahora es parte de lo que nos vuelve humanos. Tienen su papel preponderante como componentes bioló gicos que mantienen el equilibrio de los ecosistemas y el ambiente en general.
El estudio de los virus ha marcado varios hitos en la ciencia. La variolización, el concepto de transmisión y la creación de la vacuna antirrábica, además de abrir las puertas de la virología y la inmunología, han cambiado el concepto de la humanidad sobre los virus y las enfermedades infecciosas. Asi como la importancia que han sido el descubrimiento del virus de la fiebre amarilla, la vacuna contra la poliomielitis, el conocimiento de las secuelas congénitas de la rubéola, el papel del virus del papiloma humano en el cáncer de cuello uterino y la aparición del virus de la inmunodeficiencia humana. Utilizando virus se ha avanzado en la Biologí a Molecular, conocimiento de genes, de mecanismos de replicació n, trascripció n, á c. nucleicos, etc. Se utilizan para la producció n de diversos productos como alimentos envasados, bebidas, energí a, medicamentos, productos de limpieza, entre muchos m á s. En la agricultura ayudan much ísimo como biofertilizantes para fijar nitró geno, incorporar fó sforo, diversos minerales a las plantas, para introducir genes de resistencia a los cultivos o directamente combatir sus pató genos.
Curiosamente los virus no se encuentran dentro del sistema de clasificación biológica de los organismos celulares, como si lo están las plantas y los animales. La clasificación de los virus se basa principalmente en las características de las partículas virales, incluyendo la forma de la cápside, el tipo de ácido nucleico (ADN O ARN), de doble hebra (dh) o una hebra (uh) dentro de la cápside, el proceso de replicación, sus organismos huéspedes o el tipo de enfermedad que provocan.
Se considera que un virus tiene un ciclo replicativo lítico cuando, una vez ha penetrado en la célula, procede inmediatamente a la transcripción de su material genético. La infección de los virus de ciclo lítico es rápida y no permanece latente en el organismo infectado. En resumen, los virus con ciclos líticos atacan directamente a la célula. Los virus con ciclo replicativo lisogénico son capaces de insertarse finalmente en el ADN de la célula hospedadora. Esto los hace más difíciles de detectar y les permite reproducirse durante un tiempo utilizando el propio ciclo vital de la célula infectada. En resumen los virus con ciclos lisogénicos se camuflan en la célula durante un tiempo, aprovechando su maquinaria enzimática antes de atacar. Aunque cada tipo de virus es diferentes tanto en estructura como en composición, los ciclos replicativos de todos ellos coinciden en las siguientes fases:
1.La fase de adsorción. Es el inicio del ciclo replicativo de un virus. En esta fase, el virión entra en contacto con la célula hospedadora para acceder a su interior. Es evidente, por tanto, que la estructura del virión influye bastante en esta fase del ciclo replicativo. Otro punto clave en la fase de adsorción es el reconocimiento de los receptores de membrana de la célula hospedadora. Los viriones disponen de proteínas en su cubierta externa que le permiten reconocer estos receptores en las células hospedadoras para infectarlas. 2.Fase de penetración. Una vez adherido el virión a la membrana celular, puede acceder a la célula mediante diferentes mecanismos, algunos más complejos que otros. Por lo general, distinguimos varios mecanismos de penetracion de los virus, dependiendo de la estructura del virión. En el caso de los virus con membrana lipídica, la entrada se produce por endocitosis mediada por receptor o fusión con la membrana celular. Por otro lado, los virus sin membrana lipídica suelen introducirse en la célula mediante endocitosis o penetración directa.
5 .Fase de encapsulamiento. Tras la fase de multiplicación, en el interior celular podemos encontrar replicado el material genético vírico. De igual modo, el interior celular ya dispone de toda la batería de proteínas necesarias para poder formar nuevos viriones. Justo antes de la liberación de los viriones se produce el ensamblaje de los mismos. Este proceso consiste en la organización de todos los elementos presentes para formar la estructura del virión, que rodea el material genético vírico. 6 .Fase de liberación. Durante esta última fase del ciclo replicativo de un virus, los viriones son expulsados al exterior celular, donde emprenden un azaroso viaje hasta una nueva célula hospedadora. Esta liberación puede realizarse de forma forzosa, rompiendo la membrana celular, en el caso de los virus sin cubierta, o mediante gemación, en el caso de virus con envoltura lipídica. En este último caso, los virus se recubren de parte de la membrana celular de la célula hospedadora.
Los métodos directos son aquellos que detectan:
3.Inmunofluorescencia directa (ID). Es una de las técnicas más antiguas y de uso más difundido en el laboratorio clínico. El principio básico de la inmunofluorescencia directa se ilustra en la figura 1. Muestras clínicas apropiadas son recolectadas y colocadas sobre portaobjetos donde se dejan secar y fijar. Luego se agregan anticuerpos especificos marcados con isotiocianato de fluoresceína que difunden a través de la membrana celular y se combinan con los antígenos víricos en el interior de las células. La reacción antígeno anticuerpo se visualiza con el microscopio de fluorescencia, por la aparición de fluorescencia de color verde manzana. Esta técnica se puede utilizar para una identificación rápida del virus directamente sobre la muestra (por ejemplo: células eluidas de un lavado nasal, o de un hisopado nasofaríngeo), o se la puede emplear para la confirmación del efecto citopático observado en cultivos celulares 4.Test de aglutinacion. El test de aglutinación es un método simple, de un solo paso, que a veces se usa para la detección de antígenos virales en muestras clínicas. Los ensayos de aglutinación, dependen de la fijación inicial de anticuerpos antivirales específicos sobre eritrocitos o partículas de látex. Luego este reactivo se incuba con la muestra clínica en la cual se investiga el antígeno y las partículas se aglutinan si el antígeno adecuado se encuentra presente. Estas pruebas en general se complementan o se confirman por medio de otros ensayos debido al elevado porcentaje de reacciones inespecíficas. El test de aglutinación ha sido usado para detectar antígeno de Rotavirus en heces (el más importante) mostrando una buena sensibilidad cuando se lo compara con el EIA para Rotavirus. Además, es una técnica rápida y barata. También se la ha usado para detectar antígenos de Adenovirus.
5.Sondas de acidos nucleicos. Actualmente es posible extraer secuencias específicas de un fragmento de ADN por medio de las endonucleasas de restricción. Luego estas secuencias extraídas, se pueden desnaturalizar y marcar ya sea con una enzima o con un isótopo radioactivo. A estas cadenas marcadas y que tienen una secuencia conocida se llaman sondas de ácidos nucleicos. Hoy en día se están produciendo sondas de ácidos nucleicos sintéticas, con lo que se obtiene sondas de oligonucleótidos de muy alta especificidad que están disponibles comercialmente y son las más usadas en los laboratorios. 6.Enzimoinmunoanalisis (EIA). Los EIA para la detección de antígeno se basan habitualmente en la captura del antígeno por anticuerpos específicos unidos a una fase sólida, en general el pocillo de una microplaca o una pequeña esfera de plástico. El antígeno viral presente en la muestra clínica se combina con el anticuerpo fijado a la fase sólida y el antígeno viral se detecta mediante la adición de otro anticuerpo específico conjugado a una enzima. La enzima conjugada suele ser peroxidasa o fosfatasa alcalina. El substrato para esas enzimas varía. En la reacción con la peroxidasa el substrato es un peróxido capaz de oxidar un compuesto químico incoloro que en su forma oxidada tiene un color característico. En el caso de la fosfatasa la desfosforilización es la responsable directa de la aparición del color. Por esta técnica se puede procesar gran número de muestras en forma rápida y automatizada, no requiriendo de un observador experimentado para leer los resultados, ya que estos se leen por medio de espectrofotómetros especialmente diseñados, siendo entonces una técnica más objetiva
Los métodos indirectos son aquellos que reconocen la respuesta inmune (humoral o celular) por parte del huésped:
3.Western blot (WB) Las técnicas inmunológicas de Inmunoblot están encontrando amplias aplicaciones en el diagnóstico virológico. Son particularmente útiles para el diagnóstico del HIV. La técnica de WB se basa en la separación electroforética de proteínas virales que son posteriormente inmovilizadas en papel de nitrocelulosa con el objeto de determinar la presencia de anticuerpos específicos contra cada una de esas proteínas. Esta técnica se realiza esquemáticamente en 3 pasos: o Se produce en cultivos celulares grandes cantidades de virus que luego son tratados químicamente para su disgregación e inactivación. Los antígenos resultantes del lisado viral se separan por electroforesis en gel de Poliacrilamida. o Se realiza una transferencia (blotting o electrotransferencia) de los Ag separados a membranas de nitrocelulosa. o Se coloca el suero del paciente sobre la membrana de nitrocelulosa. Posteriormente se añaden anticuerpos anti-inmunoglobulina humana unida a una enzima (peroxidasa o fosfatasa alcalina) y, por último, se agrega el substrato enzimático para la visualización de las bandas reactivas con un producto final coloreado.
