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Este tema trata sobre el estudio de la dinámica celular a través de la marcación de moléculas con radioisótopos. Se abordan diferentes niveles de dinámica celular, desde la síntesis y migración de moléculas a través de diferentes órganulos celulares hasta el movimiento de las células en su entorno. Se presentan técnicas autorradiográficas isotópicas y no isotópicas, como la marcación de líneas de células y la citometría de flujo, para estudiar la localización y dinámica de moléculas en células, tejidos y órganos.
Tipo: Apuntes
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Localizar determinadas moléculas en células, tejidos y órganos. Localizar receptores (proteínas) y determinar su afinidad mediante la unión de un ligando radioactivo. Estudiar la dinámica de síntesis de moléculas. Se emplean precursores biosintéticos unidos a un radioisótopo que se incorpora a las células vivas antes del procesamiento histológico. Estudiar la descendencia de una determinada célula, mediante precursores de nucleótidos con isótopos radioactivos (timina tritiada).
Se le incorpora el radioactivo a la célula que queremos marcar. El radioactivo se une con el receptor. Se monta la muestra en el porta objetos.
Se añade la emulsión con sales de plata que forman cristales de plata debido a que los isótopos estimulan y ponen de manifiesto las zonas donde se encuentran. Lo dejamos inocular un mes y lo revelamos y ya podemos ver las zonas oscuras, que son en las que se ha unido el isótopo. Podemos ver donde se encuentra un receptor en cualquier parte de la célula.
Se administra en un momento concreto, un precursor biológico o una molécula marcada radiactivamente (pulso). Detectamos la molécula que ha incorporado el marcaje radiactivo en otro momento y lugar (caza). La caza lo hacemos con varias muestras que han sido pulsadas al mismo tiempo, así podemos ver el recorrido que tiene la molécula marcada. Si marcamos un aminoácido, podemos estudiar el proceso de formación de una proteína.
Experimento para ver la movilidad de las proteínas de la membrana plasmátca de dos tipos celulares. Hacemos fusionar dos células de especies distintas que se encuentran marcadas con anticuerpos asociados a un fluorocromo distinto, al principio veremos que las dos mitades de la célula resultante tienen fluorescencia distinta, pero con el paso del tiempo, observamos que las fluorescencias distintas se encuentran mezcladas.
Los lípidos o las proteínas de membrana se marcan con un compuesto fluorescente. Eliminamos la fluorescencia con un láser en una zona determinada de la membrana (blanqueamiento). La fluidez de la membrana hace que las moléculas difundan, de manera que la zona blanqueada vuelve a tener fluorescencia.