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Cito- e Histoquímica
Seminarios y Talleres de la asignatura Citología e Histología (curso 2017-2018) Las técnicas cito- e histoquímicas proporcionan sobre la célula o el tejido en estudio información química concreta y localizada. No son coloraciones que utilizan un colorante, sino reacciones químicas cuyo producto final es coloreado: à identificar y localizar una molécula o su actividad en la célula o el tejido. Para interpretar correctamente los resultados hay que llevar controles adecuados a cada estudio (control negativo y/o positivo).
Cito- e Histoquímica
Carcinoma del epitelio de la laringe Reactivo de Schiff
Marcaje selectivo del ADN
Reacción de Feulgen La hidrólisis ácida del ADN produce una despurinación (elimina las purinas) y genera un grupo aldehído en el carbono 1 de la desoxirribosa. Este aldehído reacciona con el Reactivo de Schiff. Eritrocitos de ave (color rojo magenta à ADN del núcleo) Reacción de Feulgen
Células caliciformes (son PAS positivas porque contienen mucopolisacáridos) Vellosidades Intestino Delgado Reacción del periodic acid-Schiff (PAS) Actividad de la enzima fosfatasa ácida Determinación de actividad enzimática
Determinación de actividad enzimática
- La muestra se incuba con el sustrato de la enzima objeto de estudio (en el ejemplo: glicerofosfato)
- La enzima fosfatasa ácida presente en los lisosomas actúa sobre el sustrato y lo hidroliza liberando glicerol y fosfato. Estos productos quedan localizados en los lisosomas donde se combinan con iones de plomo o calcio para formar un producto insoluble (fosfato de plomo o de calcio)
- El fosfato de plomo es incoloro, pero por microscopía electrónica se puede visualizar porque es una sal densa para los electrones. Con sulfito de amoniaco se convierte en sulfuro de plomo que se puede ver mediante microscopía óptica de campo claro por su color pardo.
