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Orientación Universidad
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cocos gran positivos, Tesinas de Química

biologia y estudios osbre las bacterias que tienen forma de cocos

Tipo: Tesinas

2017/2018

Subido el 04/03/2018

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA
PRACTICAS DE LABORATORIO
COCOS GRAM POSITIVOS
Maye Bernal Rivera
Introducción
Los cocos gram positivos excluyendo las enterobacterias, son los microorganismos
más frecuentemente aislados de muestras de pacientes y se han involucrado como
agentes importantes en procesos de enfermedades infecciosas desde el año 1836.
Se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza y forman parte de la flora
microbiana normal de la piel y las mucosas del hombre y de animales. Las
infecciones en el hombre se producen por contacto directo con individuos infectados o
portadores sanos, o por penetración a través de piel y mucosas mediante objetos
corto punzantes por heridas, trauma o procedimientos quirúrgicos o por la acción de
toxinas producidas por cepas de algunas especies.
Staphylococcus
Los estafilococos son células esféricas gram positivas dispuestas en grupos
semejantes a racimos de uvas en medios sólidos o en pares, cadenas o tétradas, en
medios líquidos. Crecen bien en medios simples y de acuerdo a la especie producen
diferentes pigmentos: blanco, amarillo y dorado y algunas de ellas producen beta
hemólisis. Son catalasa positivos, inmóviles, no esporulados, con raras excepciones,
no encapsulados y son aerobios o anaerobios facultativos.
Streptococcus
Los estreptococos son células esféricas u ovaladas gram positivas dispuestas en
pares o cadenas cortas o largas. Son más exigentes que los estafilococos, no crecen
en medios simples, por el contrario requieren de factores de crecimiento como la
sangre y sus derivados. Producen diferentes tipos de hemólisis, característica que
permite clasificarlos en beta hemolíticos, alfa hemolíticos o no hemolíticos. No forman
pigmentos, son catalasa negativos, inmóviles, no esporulados, con formación de
cápsula variable. Son aerobios y anaerobios facultativos.
Enterococcus
Los enterococos clasificados anteriormente como una especie de estreptococos, son
células esféricas gram positivas dispuestas en pares o cadenas cortas. Al igual que
los estreptococos requieren de factores de crecimiento como la sangre y sus
derivados. Son capaces de desarrollarse en medios que contienen altas
concentraciones (6.5%) de NaCl y de bilis (40%). Pueden producir hemólisis de tipo
alfa, beta o ser no hemolíticos. No forman pigmentos, son catalasa negativos,
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¡Descarga cocos gran positivos y más Tesinas en PDF de Química solo en Docsity!

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTAD DE MEDICINA

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA

PRACTICAS DE LABORATORIO

COCOS GRAM POSITIVOS

Maye Bernal Rivera

Introducción

Los cocos gram positivos excluyendo las enterobacterias, son los microorganismos más frecuentemente aislados de muestras de pacientes y se han involucrado como agentes importantes en procesos de enfermedades infecciosas desde el año 1836. Se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza y forman parte de la flora microbiana normal de la piel y las mucosas del hombre y de animales. Las infecciones en el hombre se producen por contacto directo con individuos infectados o portadores sanos, o por penetración a través de piel y mucosas mediante objetos corto punzantes por heridas, trauma o procedimientos quirúrgicos o por la acción de toxinas producidas por cepas de algunas especies.

Staphylococcus

Los estafilococos son células esféricas gram positivas dispuestas en grupos semejantes a racimos de uvas en medios sólidos o en pares, cadenas o tétradas, en medios líquidos. Crecen bien en medios simples y de acuerdo a la especie producen diferentes pigmentos: blanco, amarillo y dorado y algunas de ellas producen beta hemólisis. Son catalasa positivos, inmóviles, no esporulados, con raras excepciones, no encapsulados y son aerobios o anaerobios facultativos.

Streptococcus

Los estreptococos son células esféricas u ovaladas gram positivas dispuestas en pares o cadenas cortas o largas. Son más exigentes que los estafilococos, no crecen en medios simples, por el contrario requieren de factores de crecimiento como la sangre y sus derivados. Producen diferentes tipos de hemólisis, característica que permite clasificarlos en beta hemolíticos, alfa hemolíticos o no hemolíticos. No forman pigmentos, son catalasa negativos, inmóviles, no esporulados, con formación de cápsula variable. Son aerobios y anaerobios facultativos.

Enterococcus

Los enterococos clasificados anteriormente como una especie de estreptococos, son células esféricas gram positivas dispuestas en pares o cadenas cortas. Al igual que los estreptococos requieren de factores de crecimiento como la sangre y sus derivados. Son capaces de desarrollarse en medios que contienen altas concentraciones (6.5%) de NaCl y de bilis (40%). Pueden producir hemólisis de tipo alfa, beta o ser no hemolíticos. No forman pigmentos, son catalasa negativos,

inmóviles, no esporulados, con formación de cápsula variable. Son aerobios y anaerobios facultativos.

PRACTICA DE LABORATORIO

Objetivo

Proporcionar al estudiante el conocimiento científico y las habilidades prácticas de los métodos y técnicas utilizados en Microbiología Médica para el aislamiento e identificación de las principales especies de cocos gram positivos que afectan al hombre

PARTE I. SIEMBRA

Objetivos específicos

  • Establecer la diferencia entre géneros de cocos gram positivos
  • Conocer las características macroscópicas, microscópicas y cambios producidos en el medio de diferentes especies de cocos gram positivos
  • Realizar algunas de las pruebas bioquímicas de laboratorio utilizadas para la identificación de especies de cocos gram positivos
  • Identificar especies de Staphylococcus, Streptococcus y Enterococcus
  • Aislar e identificar la cepa recibida

Materiales

  • Asa curva
  • Mechero de gas
  • Cepas
  • Caldo BHI
  • Agar Sangre
  • Campana con vela (CO 2 ) e incubadora a 37ºC

Procedimiento

  1. Marcar adecuadamente cada uno de los medios.
  2. Repicar la cepa asignada en caldo BHI y en agar sangre (por agotamiento)
  3. Incubar a 37ºC por 24 horas en aerobiosis con atmósfera de CO 2

Actividad

  1. Investigue 3 características que diferencien las bacterias gram positivas de las gram negativas
  2. Escriba que pruebas se debe realizar para diferenciar Staphylococcus de Streptococcus
  3. Cuáles son las especies de Staphylococcus, Streptococcus y Enterococcus más importantes en patología humana?

La coagulasa es una proteína de composición química desconocida, que tiene actividad similar a la protombina, capaz de convertir el fibrinógeno en fibrina, lo que da como resultado la formación de un coágulo visible en los sistemas apropiados. Se utiliza para identificar Staphylococcus aureus de otras especies. La coagulasa se presenta en dos formas, ligada y libre y para determinarlas se utiliza dos procedimientos: en lámina y en tubo; si la prueba en lámina da positiva, no hay necesidad de hacer la prueba en tubo.

Prueba en lámina ( Coagulasa ligada )

Materiales

  • Cepa en estudio
  • Lámina
  • Plasma de conejo

Procedimiento

  • Colocar 1 gota de plasma sobre la lámina
  • Agregar la colonia en estudio
  • Mezclar

Resultados

  • Positivo: La presencia de aglutinación o formación de grumos
  • Negativo: No se observa aglutinación, permanece emulsionada la colonia

Prueba en tubo ( Coagulasa libre )

Materiales

  • Cepa en estudio
  • Tubo de ensayo con 0.5 ml de plasma de conejo

Procedimiento

  • Agregar la colonia en estudio al tubo de ensayo
  • Incubar a 35ºC por 4 horas; si no se ha formado el coágulo, reincubar por 24 horas a temperatura ambiente

Resultados

  • Positivo: La formación de un coágulo
  • Negativo: No se observa formación de coagulo, permanece líquido el plasma

MANITOL

Principio Al utilizar el microorganismo al manitol como sustrato e incorporarlo al sistema Embden-Meyerhoff-Parnas, que tiene como productos finales ácidos que provocan la disminución del pH en el medio de cultivo, que se detecta mediante el viraje del indicador rojo de fenol a amarillo.

Materiales

  • Cepa en estudio
  • Caldo de Manitol

Procedimiento

  • Sembrar la colonia en el caldo
  • Incubar a 35ºC por 24 horas

Resultados

  • Positivo: cuando el indicador del medio vira a amarillo
  • Negativo: cuando conserva su color rojo

DNAsa

Principio

Se basa en la presencia de la enzima termoestable DNAsa que es capaz de clivar los enlaces fosfodiester internos de la molécula de DNA. Para evidenciar la presencia de la enzima, se inunda el medio con ácido clorhídrico normal, el cual precipita la molécula del ácido pero no sus polímeros.

Materiales

  • Cepa en estudio
  • Agar DNA
  • Acido clorhídrico 1 Normal

Procedimiento

  • Sembrar por estría gruesa la colonia en estudio, en el agar DNA
  • Incubar a 35ºC por 24 horas
  • A las 24 horas: Inundar la superficie del medio con HCL 1N, esperar 2 minutos

Resultados

  • Positivo: La formación de un halo transparente alrededor de la siembra indica presencia de DNAsa.
  • Negativo: La formación de un precipitado alrededor de la siembra indica ausencia de la enzima

NOVOBIOCINA

Principio

Los estafilococos coagulasa negativos pueden dividirse en especies sensibles y resistentes a la novobiocina. Staphylococcus saprophyticus es de las especies resistentes, la más frecuente en humanos, causante de infecciones de el tracto urinario. Por lo tanto esta prueba proporciona una identificación presuntiva confiable de esta especie.

Materiales

  • Cepa en estudio
  • Disco de novobiocina de 5ug
  • Sembrar la colonia masivamente en cuadrícula sobre una placa de agar sangre
  • Colocar un disco de Bacitracina y presionar suavemente
  • Incubar a 35ºC por 24 horas

Resultados

  • Sensible: La aparición de cualquier halo de inhibición alrededor del disco
  • Resistente: Crecimiento alrededor del disco

CAMP

Principio

Se basa en que Streptococcus agalactiae produce un factor llamado CAMP (factor de monofosfato de adenina cíclica) que aumenta la zona de hemólisis producida por algunas cepas de Staphylococcus aureus productoras de ß lisina.

Materiales

  • Cepa en estudio
  • Agar sangre
  • Cepa de Staphylococcus aureus ß lisina positivo

Procedimiento :

  • Sembrar sobre la palca de agar una estría de estafilococo ß lisina positivo
  • Perpendicular al estafilococo, hacer una estría con la colonia en estudio
  • Incubar a 35ºC por 24 horas

Resultados

  • Positivo: Presencia de una zona de hemólisis en forma de flecha
  • Negativo: Ausencia de la hemólisis en flecha

OPTOQUINA

Principio El clorhidrato de etildihidrocupreína (optoquina) a muy bajas concentraciones, inhibe en forma selectiva el crecimiento de Streptococcus pneumoniae. La optoquina puede inhibir a otros estreptococos del grupo viridans, pero solo a concentraciones más altas.

Materiales

  • Cepa en estudio
  • Agar sangre
  • Discos de Optoquina 5 ug.

Procedimiento :

  • Sembrar la colonia masivamente en cuadrícula sobre una placa de agar sangre
  • Colocar un disco de Optoquina y presionar suavemente
  • Incubar a 35ºC por 24 horas

Resultados

  • Sensible: La aparición de un halo de inhibición mayor a 16 mm de diámetro
  • Resistente: Crecimiento alrededor del disco o halos menores a 16 mm

KF

Principio

Determinar la capacidad de un microorganismo de crecer en un medio inhibidor y fermentar un carbohidrato produciendo un cambio de color.

Materiales

  • Cepa en estudio
  • Agar KF

Procedimiento :

  • Sembrar por doble picadura y estría en la superficie
  • Incubar a 35ºC por 24 horas

Resultados

  • Positivo: El medio vira a amarillo
  • Negativo: el medio permanece del color original

PRACTICA DE LABORATORIO

PARTE II. LECTURA E INTERPRETACION DE LOS CULTIVOS

Objetivos específicos

  • Estudiar las características macroscópicas de las colonias de cocos gram positivos
  • Diferenciar los tipos de hemólisis
  • Observar las características microscópicas de los diferentes géneros
  • Conocer diferentes pruebas bioquímicas utilizadas para la identificación de cocos gram positivos

Materiales

  • Cultivos bacterianos
  • Láminas, asas, mecheros, marcador de vidrio, papel absorbente
  • Colorantes para Gram
  • Microscopio y aceite de inmersión
  • Reactivos y medios para las diferentes pruebas bioquímicas

Procedimiento

  1. Describir las características macroscópicas de la colonia
  2. Clasificar el tipo de hemólisis
  3. Observar las características microscópicas mediante la coloración de Gram