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INFORME DE PRACTICA N°1: RECOLECCION Y EVALUACION DEL SEMEN
EN EQUINOS
Julián Andrés Encarnación Alonso^1 , Malory Celis Alvarez^1 , Paula Andrea Valderrama Madrigal^1 , Michael Stiven Gironza Acosta 1 , Andres Felipe Fierro Zambrano1,^ Heidy Julieth Ortiz Artunduaga^1 1: Estudiantes del programa de medicina veterinaria y zootecnia de la universidad de la Amazonia. Correspondencia a: [email protected] RESUMEN En equinos, la inseminación artificial es uno de los métodos más utilizados; para llevarlo a cabo, existen dos técnicas, por medio de un maniquí o con la ayuda de una yegua en celo, gracias a esta última se realizó este trabajo, además, se utilizó una vagina artificial Missouri, con el fin de realizar una evaluación espermática de un ejemplar del Criadero los Santos, ubicado en zona rural de Florencia Caquetá, vereda El Mochilero; seguido a la recolección del semen se realizó un espermiograma donde se evaluó el potencial de la muestra de semen, en el cual se valora la cantidad o volumen del eyaculado y del mismo modo la funcionalidad del semental como reproductor, seguidamente se realizó un análisis microscópico del semen, en donde se evaluaron parámetros como motilidad en masa, concentración y morfología espermática, de igual manera es importante recalar que se debe tener una correcta manipulación del semen luego de la recolección debido a que es importante para conseguir una mayor viabilidad espermática y así poder incrementar la fertilidad del semen, aun cuando se trate de individuos subfértiles. Palabras claves: Vagina artificial, Missouri, semen, espermiograma. ABSTRACT In equines, artificial insemination is one of the most used methods; to carry it out, there are two techniques, by means of a mannequin or with the help of a mare in heat, thanks to the latter, this work was carried out, in addition, an artificial Missouri vagina was used, in order to perform a sperm evaluation of a specimen of the Los Santos breeding farm, located in a rural area of Florencia Caquetá, El Mochilero; After the semen collection, a spermiogram was performed to evaluate the potential of the semen sample, in
which the quantity or volume of the ejaculate was evaluated and also the functionality of the stallion as a breeder, followed by a microscopic analysis of the semen, where parameters such as mass motility, concentration and sperm morphology were evaluated, It is also important to emphasize that the semen must be handled correctly after collection because it is important to achieve greater sperm viability and thus increase the fertility of the semen, even in the case of subfertile individuals. Keyswords: artificial vagina, Missouri, semen, spermiogram. INTRODUCCION En la reproducción equina la inseminación artificial (IA) (donde se puede utilizar el semen fresco, refrigerado o crio-preservado) (Boeta et al., 2017) junto con la transferencia de embriones es uno de los métodos más utilizados durante los últimos años debido a las ventajas que aporta en el manejo equino como lo son el incremento en el número de crías de determinados ejemplares o mejorando el desempeño reproductivo de los mismos (Ángel & Bran, 2010). En este método reproductivo se utiliza una vagina artificial para realizar la recolecta de semen, los diferentes modelos son: Missouri, Nishikawa y modelo original del colorado. Teniendo en cuenta que, al momento de implementar estos métodos debe ser lo más aséptico posible para que en la evaluación se obtengan excelentes resultados (Diaz & Hayen, 2017). Finalmente, en este sentido el presente trabajo tiene como objetivo realizar una evaluación espermática de un ejemplar presente en el Criadero los Santos, ubicado en zona rural de Florencia Caquetá, vereda El Mochilero.
Recolección del semen. La recolección de semen equino se puede realizar fácilmente con el uso de una vagina artificial, lo cual es importante conocer el tipo de la VA y las condiciones adecuadas de preferencia para que el padrillo trabaje y se logre realizar la colecta satisfactoriamente, Existen diversos tipos de vagina artificial, sin embargo en los protocolos de reproducción equina el modelo Missouri es uno de los más utilizados, debido al fácil manejo y los buenos resultados que se han obtenido en las diferentes estudios andrológico (Restrepo et al., 2014). Es importante mencionar que, los modelos de vagina artificial permiten obtener una muestra de semen tanto con la fracción espermática como la fracción de plasma seminal, por lo tanto, se obtendrá un eyaculado completado. Para ello, es necesario recolectar los primeros pulsos de eyaculado ya que se obtendrá de un 75-80% de los espermatozoides con un volumen cerca del 50% (Gutierrez, 2014). Evaluación del semen. Una vez que se obtenga la muestra, debe ser transportada a un lugar donde se le garantice la protección de la radiación solar y se encuentre una temperatura ambiente (37°C), con el fin evitar alguna alteración de la muestra o simplemente después de obtener el eyaculado llevarlo inmediatamente a un laboratorio, donde se realiza su respectiva evaluación espermática (Boeta et al., 2017). Uno de los aspectos que se evalúan en el semen es la observación macroscópica del aspecto del eyaculado, el cual se tiene en cuenta el color, la densidad y el volumen de la
muestra, esto permite determinar la presencia de sangre, material purulento o algunos detritos e igualmente calcular el número de espermatozoides del eyaculado (Cíntora, 2005). Posteriormente se determina el numero total de espermatozoides, lo cual es conocido como concentración espermática , este es un parámetro que se tiene en cuenta, para establecer la fertilidad del padrillo, para evaluar la concentración espermática, se realiza en la porción en gel del eyaculado, el cual con ayuda de la cámara de Neubauer se deposita la muestra, esta debe mezclarse con una solución espermicida con el fin de lograr contar fácilmente el numero total de espermatozoides, teniendo en cuenta que en el equino la concentración espermática es de 150.000 -300.000 millones de células espermáticas por ml (Peña, 2019). Para calcular la concentración espermática del eyaculado se debe multiplicar el promedio de las dos cámaras por 10.000 (Restrepo, Usuga, et al., 2013). Conc. esp./mm^3 = X x 10000 Ilustración 1. Técnica de recuento de espermatozoides: las células con la cabeza en negro se cuentan.
Finalmente, el número total de espermatozoides morfológicamente normales en un eyaculado puede proporcionar más información y correlación respecto de la fertilidad de un padrillo que el porcentaje o el número absoluto de espermatozoides morfológicamente anormales (Ramirez, 2006). MATERIALES Y METODOS RECOLECCIÓN ESPERMATICA Imagen 2, Agua, Calentador de agua eléctrico, termometro y jarra. Imagen 1, vagina artificial Missouri. Imagen 3, Bomba de aire. Imagen 4, Gel Lubricante Imagen 5, bolsa para la recolección del semen
En primer lugar, se llevó a cabo la preparación de la vagina artificial, se procedió a calentar agua a 55°C (esta temperatura es relativa dependiendo de la preferencia de cada garañón) con el calentador eléctrico midiendo su temperatura con el termómetro, posterior a esto, se introdujo la bolsa dentro de la vagina, se rellenó con agua caliente y con aire a través de la bomba, posterior a ello, se aplicó gel lubricante. De lo anterior, se prosiguió con el lavado del pene del garañón con agua y jabón neutro, esto se realiza con el fin de disminuir bacterias y desechos que contaminen la muestra del semen. Seguidamente se procedió con la presentación de la hembra al semental y se llevó a cabo el cortejo entre ambos (Figura 1), por último, el ejemplar realizo la monta, en donde el médico veterinario desvió el pene del caballo para introducirlo en la vagina artificial y de esta manera concluir con la recolección del semen (Figura 2). EVALUACIÓN DEL SEMEN El espermiograma es el conjunto de pruebas de laboratorios que tiene como objetivo evaluar el potencial de una muestra de semen, en el cual se valora la cantidad o volumen del eyaculado y del mismo modo la funcionalidad del semental como reproductor. El volumen se determinó por medio de dos tubos de centrifuga, encontrándose un volumen total de 75 cc de semen. Imagen 6: cortejo Imagen 7: Recolección del semen
CÁLCULOS PARA LA EVALUACIÓN
190000 millones de células espermáticas por ml. 75 ml de volumen. 800 millones en concentración esperada. Factor de dilución: 190000 millones / ml 50000 millones / ml
= 3,8 ≈^ 4 = 1-
Número total de espermatozoides = 190000 millones/ml x 75 ml = 14250 millones de espermatozoides. Número total de espermatozoides con motilidad progresiva = 14250 millones x 80% = 11400 millones de espermatozoides. Cantidad de dosis eyaculado = 11400 millones 800 milones = 14,2 dosis ≈^ 14 dosis Volumen de la dosis = 75 ml 14,2 dosis = 5 ml Dilución = 3 x 5 = 15 ml de diluyente 5 ml de semen CONCLUSIONES La capacidad del personal encargado del manejo del padrillo es importante para conseguir una buena respuesta sexual en el momento del servicio. Si a esto le sumamos un apropiado método para la recolección de semen, las probabilidades de obtener muestras de alta calidad son altas. La correcta manipulación del semen luego de la recolección es importante para conseguir una mayor viabilidad espermática y así poder incrementar la fertilidad del semen, aun cuando se trate de individuos subfértiles. 20 ml = dosis inseminante
La evaluación espermática en padrillos es de gran importancia puesto que si se realiza de manera correcta se logra obtener un aumento de los porcentajes de preñez y mejora la eficiencia reproductiva del criadero o pesebrera. Boeta, M., Díaz, M., & Hayen, S. (2017). MANUAL DE LA PRÁCTICA DE PROFUNDIZACIÓN EN REPRODUCCIÓN EQUINA. Cíntora, I. (2005). REPRODUCCIÓN EQUINA. Cortés, Z., Aréchiga, C., Rincón, M., Rochín, F., Lopez, M., & Flores, G. (2018). Revisión: El Ciclo Reproductivo de la Yegua. Abanico Veterinario , 8 (3), 14–41. https://doi.org/10.21929/abavet2018.83. Gutierrez, L. (2014). Optimización de las técnicas de acondicionamiento del semen equino para los procesos de conservación seminal. UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID. Peña, M. (2019). FACTORES REPRODUCTIVOS Y METABÓLICOS QUE INTERVIENEN EN EL PROCESO DE LA OVULACIÓN DE LA YEGUA. Ramirez, J. (2006). DETERMINACIÓN DEL FOTOPERÍODO SOBRE LA ACTIVIDAD OVÁRICA EN YEGUAS DURANTE EL AÑO, EN DIFERENTES HARAS, EN LOS DEPARTAMENTOS DE GUATEMALA, SACATEPEQUEZ Y ESCUINTLA. UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA. Restrepo, G., Ocampo, D., & Velásquez, A. (2013). EVALUACIÓN DE LA MOVILIDAD DEL SEMEN CRIOPRESERVADO DE CABALLOS CRIOLLO COLOMBIANO POR UN SISTEMA ANALIZADOR DE CLASE. V. U.D.CA Act. & Div. Cientv. U.D.CA Act. & Div. Cient. Restrepo, G., Usuga, A., Montoya, J., Celis, A., & Henao, A. (2014). Evaluación de dos diluyentes para la criopreservación de semen de caballos de la raza criollo colombiano. Revista Lasallista de Investigacion. Restrepo, G., Usuga, A., & Rojano, B. (2013). Técnicas para el análisis de la fertilidad potencial del semen equino. ResearshGate.
