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CONTROL DE MICROORGANISMO Y PRUEBAS DE LABORATORIO
Tipo: Monografías, Ensayos
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Alexander Fleming, describe en 1928 con otros investigadores la presencia de un hongo, moho hialino Penicillium mutatum, a partir del cual se observaba que alrededor de su crecimiento inhibía a las colonias bacterianas en estos medios de cultivo. A partir de ese hongo se sintetizó el antibiótico conocido como PENICILINA, y gracias a la producción en masa de ella, recibieron el premio nobel en el año 1945. Sin embargo, cientos y miles de años atrás, los antiguos chinos usaban el moho que se generaba en la soya para aplicarlo en forúnculos y obtener desinflamación y desinfección. Los griegos aplicaban la mirra, el vino y algunas sales minerales para que actuaran sobre las heridas de guerra. LINEA DE TIEMPO Comienza en 1929 y evoluciona a lo largo de las décadas, en cada una de las cuales se establece una descripción y forma de aplicación del antibiótico en cuestión, entre ellas, las penicilinas, la estreptomicina, las primeras cefalosporinas o de primera generación (nombre actual), el grupo de tetraciclinas, gentamicinas, nuevos aminoglucósidos y en los noventas se desarrolla un grupo de carbapénemicos que se consideran antibióticos de amplio espectro. No obstante, teniendo en cuenta esta línea de tiempo es importante introducir y reconocer desde ya que las bacterias han tenido y desarrollado mecanismos de resistencia en cortos periodos de tiempo. Por ejemplo, en 1941 se empezaron a hacer las primeras aplicaciones de penicilina, pero en 1943, cuando ya se había hecho aplicación en masa del medicamento, ya se reportan las primeras cepas de estafilococos resistentes a penicilina, y por ende comienzan a desarrollarse mayor cantidad de antibióticos que pueden ir dirigidos contra esas bacterias que han generado resistencia. CLASIFICACIÓN INICIAL DE ANTIBIÓTICOS: Debemos entonces ubicarnos en la clasificación inicial de antibióticos, hay diferentes formas de clasificar los antibióticos, puede ser por composición química, de acuerdo a la afinidad (hidrofílicos-hidrofóbicos/ lipofílicos- lipofóbicos), y por su efecto total (bactericidas o bacteriostáticos). DE ACUERDO A SU COMPOSICIÓN: 2 grandes grupos: betalactámicos y no betalactámicos.
abuso de estos fármacos y que gracias a ello, se seleccionan cepas de bacterias que van a ser resistentes a ciertos antimicrobianos. En el esquema de la izquierda, se puede encontrar que lo que la población de bacterias resistentes inicialmente era muy baja. Pero a medida que estas bacterias se exponen frecuentemente y a dosis muy inadecuadas o mal formuladas a estos antibióticos, la población de estas cepas bacterianas va a predominar de manera resistente. Como se puede ver, las cepas o las bacterias que se marcan como con compromiso de resistencia, tienen un esquema de recombinaciones a nivel de material genético. El círculo verde representa aquellas estructuras plasmidícas que son importantes dentro de los factores de resistencia y adquisición de estos mecanismos. En este punto entonces tenemos que tener en cuenta lo siguiente: la resistencia bacteriana a estos antibióticos precisamente se debe dividir en dos elementos importantes:
alterar el sitio de unión para el cual esta diseñado el antibiótico que sea su blanco farmacologíco o puede producir enximas que pieden hidrolizar o destruor eñ antibiotico una vez que ingrese. Toods esteos mecanosmos van a estar mediados ya sea desde el cromosoma bacteriano o ya sea por la presencia de plásmidos de resistencia. Teniendo en cuenta esto entonces, observemos la gráfica: un ejemplo de una bacteria gram negativa sensible, en el esquema se observa como bamos a tener las proteínas de unión a la penicilina (figura de la izquierda). Se aplica un betalactámico que ingresa por una porina y va a tener la capacidad de unirse a su blanco farmacologico que son las PBP. Cuando el antibiótico entra en terminos de sensibilidad de la bacteria, entonces la bacteria sensible va a dañar la sintesis de la pared celular, lisándose y muriendo. En el caso de las bacreiras resistentes (derecha), la cual altera la permibilidad de membrana, que puede hacerse de dos maneras:
Estas pruebas son importantes para diagnosticar enfermedades infecciosas. Se comienza cin la evaluacipon de las caracteristicas clinicas y epidemiologicas del paciente, despues se formula una hipótesis diagnóstica (impresión diagnóstica) y con el conocimiento médico adquirido se henerará unos posinles ageners etiológicos o una gama de posibilidades. Tras ello se establece la causa específica mediante la aplicación de las pruebas diagnóstocas o metodos doagnosticos. El diagnóstico de las enfermedades infecciosas es una combinación de arte y ciencia entre o tanto del médico clínico como el microbiologo clínico. Para los diagnósticos entonces habrá que tener en cuenta distintos enfoques para el diagnóstico a partir del tipo de microorganismo, conocer el microorganismo, sus caracteristicas y el tipo de enfermedad manifestada. Por lo tanto los métodos más utilizados se resumen en 4 grupos:
**- Examen directo microscópico:
conteiene medios s+olidos y que se utilizan para evidenciar la fermentación de la utilización de ciertos sustratos y existen algunos micrométodos también que se utilizan a partir de cada uno de los resultados y la utilización de estos sustratos depende de si los resultados son positivos o negativos, se genera un código numérico que representará un género y especie puntualmente de la bacteria. Existen también desarrollados métodos automatizados que se basan en los macro y micrompetodos convencionales que permiten en corto tiempo (18- 24 horas) obtener la identificación y tanto género como especie de la bacteria e incluso adelantar algunas de las pruebas de sensibilidad. METODOS DE PROTEOMICA- ESPECTROMETRÍA DE MASAS Se utilizan otros métodos de proteómica como la espectrometría de masas que consiste en que a través del analizador en un pozo o en una microplaca se van a ubicar las colonias bacterianas que van a ser identificadas. Internamente en el equipo se dispara un rayo láser que pulveriza este contenido de colonia y empieza a tomarse el tiempo de vuelo en cuanto a las proteínas que se van ionizando. El analizador, en la parte superior cuenta con un detector de iones, que en la medida que va llegando una proteína con cierta velocidad, el detector lo censa y establece un picograma que corresponde al código numérico en las pruebas colorimétricas o como la “huella digital” de la bacteria. En una base de datos se determina el género y la especie de la bacteria. Esta metodología tarda aproximadamente 2 horas. DETERMINACIÓN IN VITRO DE LA RESPUESTA ANTIMICROBIANA: Una vez se ha identificado el género y la especie de la bacteria que se esta evaluando en la muestra clinica, se hará la determinació de la respuesta antimicrobiana o prueba de sensibilidad o suceptibilidad, que se conoce comunmente como antibiograma. El antibiograma se puede hacer por tres métodos:
De ahí que en esso resultados de interpretación, básicamente están basasdos y se obtienen de acuerdo al laboratorio o al instituto de laboratorio clínico que nos facotece o mps presneta ciertos estándares. Como las guías CLSI, que son unas guías norteamericanas de una institución que se encarga de regular estos examenes a nivel in vitro, a partir del establecimiento de unos puntos de corte para determinar por cualquiera de las tres metodologías aplicadas en ls pruebs de sensibilidad como está esa bacteria. En la fotografía izquierda inferior, se observa un antibiograma por método de disco difusión, lo que se observa en el centro son discos que contienen un antibiótico a una concentarción exacta. Lo que se observa en color amarillo, es la masa de la bacteria que ha sido sembrada en ese agar, en este caso, hay un halo claro que nos permite identificar un “halo de inhibición” que ha generado ese disco o ese antibiótico que se ha difundido. Entonces ese halo nos da un diametro en mm que se comparan para establecer la categoría de si la bacteria fue sensible o no. Por otra parte, la fotografia de la parte superior derecha, se evidencia unas tiras, cada una contiene unos gradientes de concentración, esta va a formar una elipse. Donde corta el extremo inferior de la elipse vamos a determinar una concentarción inhibitoria mínima de ese antibiótico ante esa bacteria. En la fotografía del extremo inferior derecho, se encuentra pozos con diferentes concentraciones del antibiótico que nos va a permitir calcular la concentarción inhibitoria mínima y la categorie e interpretación. INMUNODIAGNÓSTICO Básicamente se hace una detección de antigeno anticuerpo, por alguna de las metodologías en el cuadro; la clasificación serológica que ante todo se usa para estudio epidemiológico (clasificación serológica capsular de una bacteria para implementación en vacunas); detección de anticuerpos específicos contra ciertos microorganismos y deteccón de antigenos específicos de algún microorganismo. Es importante reconocer que en el inmunodiagnóstico se encontrará pruebas directas de inmunoabsorbancia (lado A) como pruebas indirectas de inmunoabsorbancia. Es importante tener en cuenta que en A, el anticuerpo se va a absorber a nivel del pozo y va a sensibilizar la placa (están preparados