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Asignatura: Microbiología, Profesor: Paloma Liras, Carrera: Biotecnología, Universidad: UNILEON
Tipo: Apuntes
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La mayoría de procariotas se dividen por fision binaria. El proceso consiste en que la celula se alarga hasta el doble del tamaño normal y la formación de un tabique para separar la celula en dos, septo, como resultado del crecimiento de la membrana citoplasmática y la pared celular desde direcciones opuestas hacia el interior hasta que dos cel hijas se separan. El reparto de DNA replicado entre las cel hijas depende de la unión del DNA a la membrana durante división. El tiempo de generación es el tiempo que pasa desde la celula única hasta las 2 cel hijas.
Divisoma Conjunto de prots necesarias para q la cel se divida, incluye las Fts: principales implicadas en división cel , se colocan a lo largo del eje de división formando un anillo, septo. Las Fts forman en la cel un aparato de división llamado DIVISOMA. Su formación comienza con la unión de molecs FtsZ formando un anillo alrededor del cilindro celular hacia el centro dde la cel. El divisoma parece dirigir la síntesis de nuevos mat de mb y pc desde las 2 direcciones opuestas hacia el int cel hasta que esta alcanza aprox el doble de su tamaño, a continuación ocurre la separación de las 2 cel hijas. FtsZ tiene act enzimática, hidroliza GTP liberando energía, y es responsable de la polimerización/despolimerización de FtsZ y de la formación/destrucción del anillo. Las Fts están ausentes en animales. Hay una serie de prots auxiliares, las PBPs implicadas en la rotura de peptidoglicano y en la adicion de nuevas subunidades. Los antibióticos implicados en el bloqueo de este proceso son: fosfomicina, ciloserina y penicilina.
Curva de crecimiento Definimos crecimiento como un aumento en el numero de células microbianas de una población por unidad de tiempo.
Azul: turbidez Rojo: recuento de viables
La fase de latencia es el tiempo que tarda el mo en adecuarse a las condiciones del medio de cultivo, en el cual toadvia no se multiplicara. Es una fase energéticamente desfavorable ya que se gasta energía en su crecimiento. En la fase de crecimiento exponencial cada periodo fijo de tiempo se duplica el número de células.
En la fase estacionaria no hay aumento ni descenso neto en el número de células, algunas células mueren y sirven de aporte de nutrientes para que otras crezcan, equilibrio. Lo que normalmente sucede es que un nutriente esencial se convierte en un factor limitante del crecimiento o la acumulación de productos de desecho a niveles inhibitorios.
La fase de muerte también presenta una curva exponencial.
Parámetros de crecimiento El aumento en numero de células en un cultivo bacteriano creciendo exponencialmente es una progresión geométrica en base 2. n = 2n^ (número de generaciones) g = t total / n (tiempo de generación: intervalo para la formación de 2 cels a partir de 1) k = ln2 / g
MEDIDAS DIRECTAS DE CRECIMIENTO MICROBIANO Recuento de células totales
Contar el num de cels con el microscopio en la cámara de PETROFF-HAUSSER, no distingue cels vivas de muertas Recuento de células viables Una celula viable es aquella capaz de dividirse y dar lugar a descendencia, es capaz de formar colonias en el medio adecuado: recuento en placa o recuento de colonias. *método de extensión en placa: cierto volumen de cultivo diluido se extiende por extensión con un asa esteril se incuba, aparecen colonias y se cuentan. *método de vertido en placa: se pipetea un volumen conocido de cultivo, se lleva a una placa de Petri esteril, se añade agar fundido y se mezcla. El recuento de viables se hace mediante unidades formadoras de colonias.
MEDIDAS INDIRECTAS DE CRECIMIENTO MICROBIANO Turbidez No diferencia cels vivas de las muertas. A mayor num de cels presentan mayor será la luz dispersada, mayor turbidez. Peso seco Peso húmedo Nitrógeno total DNA Método de dilución de placas Se filtra un columen grande de agua sobre una mb donde quedan retenidos los mo, se translada a un medio nutritivo y forman colonias.
PRODUCTOS MICROBIANOS Metabolitos primarios: relacionados con la síntesis de cel microbianas, esenciales para el crecimiento del mo. Metabolitos secundarios: se acumulan en periodos de escasez de nutrientes o acumulación de productos de desecho. No tienen relación directa con la síntesis de estructuras esenciales para el desarrollo celular. La mayoría son antibióticos o micotoxinas. Los metab sec aparecen en la idiofase, fase estacionaria, después de la tropofase fase de crecimiento exponencial donde no aparecen.
Temperatura A medida q aumenta la Tº las reacciones qcas y enzimáticas son mas rapidas y el crec se acelera. Por encima de una cierta Tº los daños son irreversibles y las reacc cel caen a 0. Hay una Tº mínima por debajo de la cual no existe crec. Una Tº óptima con el crec mas rápido. Y una Tº máx por encima de la cual no ocurre el crec. En base a las Tº óptimas de crec podemos clasificar los mo en: Psicrófilos: 4ºC zonas polares o altas montañas, algunas algas q cercen bajo el hielo en zonas nevadas o glaciares, presentan una superficie de coloración rojiza o verdosa. Chlamydomonas nivalis da color rojo a la nieve y algunas bact quimiorganotrofas. Hay psicrofilos estrictos q a 20ºC mueren y psicrofilos facultativos como pseudomonas q a bajas Tº crecen de manera lenta pero si aunmenta la Tº aumenta su crec. Mesófilos: 39ºC son casi todos los patógenos humanos. Termófilos: 60ºC en zonas de act volcánica o fumarolas. Hipertermófilos: 88ºC Psicrotolerantes: entre 20 y 40ºC pero crecen a 0ºC
Adaptaciones moleculares a la termofilia Mb ricas en ac grasos saturados, prots en lamina β, alto num de chaperonas, xilonasas, amilasas, proteasas y prot termoresistentes como la Taq polimerasa o la Pfu. Suelen tener inositol fosfato q favorece la termofilia.
pH