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Documento para papis perrones, Diapositivas de Medicina

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Tipo: Diapositivas

2020/2021

Subido el 17/09/2021

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Biología Celular y Molecular
Semestre: 2020 20
Docente: Dr Frank Denis Torres Huaco
1 | P á g i n a
Actividad N° 03:
BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR NRC: 16738
Estudiante: Anthony Ronald Yacila Huaroc
Actividad 1 En la sesión práctica fue visto un video correspondiente a la técnica
de cromatografía líquida, que permite la separación de proteínas a partir de una
mezcla compleja. A parir de lo expuesto en el video y utilizando el método de
búsqueda de información practicado en la actividad 1, presente la DEFINICIÓN
TÉCNICA de los siguientes términos:
- Buffer de equilibrio: Los amortiguadores (también llamados disoluciones
amortiguadoras, sistemas tampón o buffers) son aquellas disoluciones que ayudan a
estabilizar el pH cuando un elemento ácido o alcalino está presente en las células o en
general, en el cuerpo humano.
http://www.ehu.eus/biomoleculas/buffers/buffer.htm
- Buffer de elución: Procedimiento cromatográfico en el que los componentes de la
mezcla, fijados en una columna que contiene la fase estacionaria, se separan por el
paso de un eluyente.
https://www.sne.es/diccionario-nuclear/cromatografia-por-elucion/
- Punto isoeléctrico: El punto isoeléctrico (pI) es el punto en el cual la carga neta en una
molécula es cero. el pi se examina lo más común posible para las proteínas. Cada uno
de los aminoácidos en una proteína lleva una carga distinta, y la carga total de una
proteína es la adición de las cargas individuales en cada aminoácido.
https://www.news-medical.net/life-sciences/Overview-of-the-Isoelectric-Point-
(Spanish).aspx
- Conductancia: La conductancia a los iones es una propiedad de la membrana del
axón. Comúnmente se la designa por la letra G y representa una medida de la facilidad
con que los iones pasan o atraviesan un segmento de la membrana. Como los iones
tienen carga eléctrica, la conductancia se manifiesta en forma de corrientes eléctricas
que atraviesan a la membrana. La conductancia se mide en unidades llamadas siemens.
http://www7.uc.cl/sw_educ/neurociencias/html/053.html
- Absorbancia de proteínas a 280nm: La mayor parte de las proteínas poseen un pico de
absorción máxima a 280 nm. Los grupos responsables de tal característica son los
aminoácidos aromáticos (Tirosina y Triptófano). Las proteínas poseen coeficientes de
extinción molar (E280nm) que puede variar de acuerdo a su composición aminoacídica
entre 0,4-1,5.
http://www.iib.unsam.edu.ar/archivos/docencia/licenciatura/biotecnologia/2016/Quimica
Biol/1458322132.pdf
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Biología Celular y Molecular

Semestre: 2020 – 20

Docente: Dr Frank Denis Torres Huaco

1 | P á g i n a

Actividad N° 0 3 :

BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR NRC: 16738

Estudiante: Anthony Ronald Yacila Huaroc Actividad 1 – En la sesión práctica fue visto un video correspondiente a la técnica de cromatografía líquida, que permite la separación de proteínas a partir de una mezcla compleja. A parir de lo expuesto en el video y utilizando el método de búsqueda de información practicado en la actividad 1, presente la DEFINICIÓN TÉCNICA de los siguientes términos:

  • Buffer de equilibrio: Los amortiguadores (también llamados disoluciones amortiguadoras, sistemas tampón o buffers) son aquellas disoluciones que ayudan a estabilizar el pH cuando un elemento ácido o alcalino está presente en las células o en general, en el cuerpo humano. http://www.ehu.eus/biomoleculas/buffers/buffer.htm
  • Buffer de elución: Procedimiento cromatográfico en el que los componentes de la mezcla, fijados en una columna que contiene la fase estacionaria, se separan por el paso de un eluyente. https://www.sne.es/diccionario-nuclear/cromatografia-por-elucion/
  • Punto isoeléctrico: El punto isoeléctrico (pI) es el punto en el cual la carga neta en una molécula es cero. el pi se examina lo más común posible para las proteínas. Cada uno de los aminoácidos en una proteína lleva una carga distinta, y la carga total de una proteína es la adición de las cargas individuales en cada aminoácido. https://www.news-medical.net/life-sciences/Overview-of-the-Isoelectric-Point- (Spanish).aspx
  • Conductancia: La conductancia a los iones es una propiedad de la membrana del axón. Comúnmente se la designa por la letra G y representa una medida de la facilidad con que los iones pasan o atraviesan un segmento de la membrana. Como los iones tienen carga eléctrica, la conductancia se manifiesta en forma de corrientes eléctricas que atraviesan a la membrana. La conductancia se mide en unidades llamadas siemens. http://www7.uc.cl/sw_educ/neurociencias/html/053.html
  • Absorbancia de proteínas a 280nm: La mayor parte de las proteínas poseen un pico de absorción máxima a 280 nm. Los grupos responsables de tal característica son los aminoácidos aromáticos (Tirosina y Triptófano). Las proteínas poseen coeficientes de extinción molar (E280nm) que puede variar de acuerdo a su composición aminoacídica entre 0,4-1,5. http://www.iib.unsam.edu.ar/archivos/docencia/licenciatura/biotecnologia/2016/Quimica Biol/1458322132.pdf

Biología Celular y Molecular

Semestre: 2020 – 20

Docente: Dr Frank Denis Torres Huaco

2 | P á g i n a Observación: Junto con la definición técnica debe incluirse la referencia a la fuente bibliográfica de donde se obtuvo la definición (links web; link web de artículo o libro; capítulo de libro) Actividad 2 – Utilizando el simulador de cromatografía indique la respuesta correcta para cada pregunta: Simulador: http://biomodel.uah.es/lab/cromat/columna.htm?en 2.1.- Usando las matrices de gel filtración SuperdexTM^ 200 y Sephacryl 300 indique el orden de elución de las proteínas: aldolase, aprotinin, conalbumin, ferritin, glucosa- 6 - deshidrogenase Orden de elución SuperdexTM 200 Sephacryl 300 Primero Ferritina Ferritina Segundo Aldolasa Aldolasa Tercero Glucosa-6P deshidrogenasa Glucosa-6P deshidrogenasa Cuarto Ovoalbúmina Ovoalbúmina Quinto Aprotinina Aprotinina Según el perfil de elución puede colocarse dos proteínas en una misma posición.

  1. 2 .- Indique cuales son los buffers (y su pH) con el cual la columna de intercambio iónico CM-Sepharose retiene (pico de elución mayor a 20mL) la proteína Conalbumina.
  • Ningún buffer retiene la proteína Conalbúmina. 2.3.- Cuál de las siguientes proteínas es retenida en la columna HiTrap Chelating HP equilibrada con un buffer Tris-HCl pH7,4: Ribonuclease A, Tyroglobulin, His6-Luciferase, Ferritin, Gluthatione reductase?
  • Las proteínas retenidas son His6-Luciferase y Tyroglobulin. 2.4.- Cuál de las proteínas listadas en el simulador (Protein components) son retenidas en la columna 2’5’ADP-sepharose? Realice una búsqueda de la función de las proteínas que son retenidas en la columna.
  • La proteína retenida es el His6-Luciferase.