ELECTROFORESIS:
La mayoría de las biomoléculas poseen una carga eléctrica, cuya magnitud depende del pH del
medio en el que se encuentran. Como consecuencia, se desplazan cuando se ven sometidas a un
campo eléctrico.
Se denomina electroforesis a la técnica por la cual se separan biomoléculas en disolución al ser
sometidas a un campo eléctrico.
Es un tratamiento teórico similar al de la centrifugación, con la diferencia de que solo se
desplazarán por la acción del campo las moléculas con carga eléctrica, mientras que en la
centrifugación todas las moléculas tienen masa y responden a un campo centrífugo.
No es posible hacer un tratamiento teórico exacto del transporte en campos eléctricos porque la
atmosfera iónica introduce complicaciones sin solución matemática.
Las biomoléculas tienen en su gran mayoría una carga eléctrica. En presencia de un campo eléctrico
se desplazarán, con mayor o menor velocidad y por tanto con mayor o menor actividad
electroforética (velocidad por unidad de campo), en función de su carga neta, su tamaño y su forma,
lo que permitirá separarlas unas de otras.
La separación se realiza en modalidad zonal : la muestra se aplica como una mancha o banda y sus
componentes migran a través de un disolvente, utilizando además un medio soporte de éste. El
único objetivo es separar los componentes de la muestra.
No se suele llevar a cabo en medios fluídos, sino en medios semisólidos, llamados GELES, los
cuales actúan como estabilizadores de las zonas o bandas. El factor forma y tamaño adquiere una
alta relevancia en la separación.
Geles de electroforesis: estado semisólido en el que la fase dispersante está formada por polímeros
fibrilares (acrilamida y agarosa), entre cuyas fibras entrelazadas queda retenida, por capilaridad e
hidratación, la fase dispersa de naturaleza acuosa.
Se usan principalmente dos:
- Poliacrilamida: Su porosidad es menor que la de la agarosa. Se utiliza para la electroforesis de
proteínas. La gelificación se consigue mediante una reacción de polimerización.
- Agarosa: Polisacárido, producto purificado de algas (composición similar al agar-agar). Se
disuelve en caliente (50-60ºC) (sol) y al enfriar solidifica un gel de alta porosidad.
Porosidad del gel: cuanto mayor sea la concentración de fibras y su grado de entrecruzamiento,
menor será la porosidad (mayor el reticulado) del gel.
El porcentaje de acrilamida determina el reticulado del gel resultante. El agente de
entrecruzamiento, bis-acrilamida, se emplea en pequeñas proporciones, para asegurar la dureza y
consistencia del gel final. Terminada la polimerización se puede desmoldar.
La agarosa se disuelve en caliente en disolventes acuosos, alcanzando un estadocoloidal de sol. Al
enfriarse pasa al estado de gel. Encontces se puede desmoldar. La concentración de agarosa en la
disolución inicial determina el reticulado final del gel.
