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instrumentales de
análisis en
Bioquímica:
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DIAPOSITIVAS DE ELISA DIAPOSITIVAS DE ELISA DIAPOSITIVAS DE ELISA
Tipo: Diapositivas
2020/2021
1 / 12
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¡Descarga ELISA - DIAPOSITIVAS y más Diapositivas en PDF de Bioquímica solo en Docsity!
Técnicas
instrumentales de
análisis en
Bioquímica:
E.L.I.S.A
DEFINICIÓN
Técnica de laboratorio que se
usa para detectar un
anticuerpo o antígeno en la
sangre.
IMPORTANCIA
Se utiliza para la industrias
alimentarias y diferentes estudios,
así como el control del medio
ambiente.
ANTICUERPO (Ac): Proteína producida
como respuesta a una sustancia
“extraña” y que tiene la capacidad de
combinarse con él.
Elementos del E.L.I.S.A ANTÍGENO (Ag): Molécula exógena, que se encuentra en la superficie de un agente patógeno, y que al entrar en contacto con el organismo, induce la producción de una respuesta del Sistema Inmune específica.
FASE SÓLIDA
2. Las que permiten la fijación covalente de
esos reactivos: acrilamida, celulosa y isoticianato. PUEDEN UTILIZAR DOS TIPOS DE SUSTANCIAS
- Las que favorecen la adsorción física (por fuerzas electroestáticas) de las moléculas de Ags o Acs: poliestireno, cloruro de polivinilo, polipropileno, nylon y silicona. Los mejores resultados se obtienen con el poliestireno y el polvinilo, por su rigidez, transparencia y propiedades adsortivas.
ENZIMA ORIGEN
Peroxidasa Rábano picante Fosfata alcalina Escherichia coli β-galactosidasa Escherichia coli Glucosa Oxidasa Aspergillus niger Lisozimas Clara de huevo Malato deshidrogenasa Corazón de cerdo
SUSTRA TO ENZIMA SUSTRATO Peroxidasa OPD(amarillo-naranja 492nm) TMB(amarillo 450nm) Fosfata alcalina PNP(Amarillo) β-galactosidasa ONPG(Amarillo 420)
La elección del sustrato va de
acuerdo con el tipo de enzima
presente en el conjugado siendo
las enzimas capaces de modificar
al sustrato en presencia de un
cromógeno produciendo un
producto coloreado que es
detectado visualmente o por un
espectrofotómetro.
Factores en cuenta:
- (^) Sensibilidad
- (^) Especificidad
- (^) Facilidad de lectura
- (^) Estabilidad después de la
reacción
Tipos de E.L.I.S.A
Consiste en detectar la muestra
con el antígeno o anticuerpo
que está en la fase sólida.
Dentro de los no competitivos
tenemos:
- Los directos que detectan
antígenos
- Los indirectos que detectan
anticuerpos.
ELISA NO
COMPETITIVO:
Tipos de E.L.I.S.A
ELISA DIRECTO:
El ELISA directo es el ensayo ELISA más simple y rápido de todos. El procedimiento simplificado sería el siguiente:
- (^) 1º El antígeno se inmoviliza sobre una placa
- (^) 2º Se añade un anticuerpo primario marcado con una enzima que se unirá al antígeno de interés
- (^) 3º Se añade el sustrato que al reaccionar con la enzima proporcionará una señal visible que permitirá la detección y/o cuantificación del antígeno de interés.