Tema 11: Espectrometria de masses
Separació i determinació de la massa/càrrega d’ions gassos i determina la seva massa.
La base d’aquesta tècnica es volatilitzar els compostos per analitzar-los en forma de gas, i és aplicable a
macromolècules tals com les proteïnes.
Molècules determinables
• Pèptids, proteïnes: dona molta precisió, fins i tot per veure diferències de 80 daltons o menys.
• Plegament
• Nivells d’expressió/modificació postraduccional
• Fragments d’acids nucleics
Tècnica
• Volatilitzar el compost
• Ionització externa: cal ionitzar-les per permetre accelerar les molècules
• Separació dels ions segons massa/càrrega)
• Detecció dels ions
Es pot acoblar diferents tècniques al posterior anàlisi en l’espectometre.
Tot el sistema ha d’estar sota un buit important.
MALDI
Sistema de laser que incideix a sobre d’una matriu on es troba la teva mostra, evitant que el laser tenqui la proteïna,
per exemple. La matriu transfereix l’energia del làser a les proteïnes.
Aquesta ionització, els agregats de molècules es desprenen de la placa metàl·lica inicial, i queden volatilitzades.
En el moment d’ionitzar-les, les mostres entren a un camp elèctric en el qual aquestes partícules acceleren.
Les dades que es mesuren (trucu) és el temps que tarda cada ió al detector.
Hi ha un moment de retard, com el de l’electroforesi, per poder obligar-les a sortir de la primera càmera a la vegada.
Acoblament
HPLC- cromatografia
Es basa en la introducció de la mostra amb un electroesprai. Aquest electroesprai forma aerosol que contingui al seu
interior un unic tipus de molècula.
