factores que afecta la actividad enzimática, Apuntes de Bioquímica

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UNIDAD DE CIENCIAS BÁSICAS

ASIGNATURA DE BIOQUÍMICA

GUÍA DE PRÁCTICAS

SEGUNDO AÑO

PRACTICA 2. FACTORES QUE AFECTAN LA

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

SEMANA Nº 2: FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD

ENZIMÁTICA

I FUNDAMENTO

Las reacciones químicas que ocurren en un ser viviente son catalizadas por enzimas, compuestos de naturaleza proteica que tienen la propiedad de incrementar la velocidad de dichas reacciones disminuyendo la energía de activación del sistema. Las reacciones enzimáticas son afectadas por diversos factores como: la concentración de enzima, concentración de sustrato, activadores, inhibidores, temperatura, pH, fuerza iónica, etc.

Efecto de la Concentración de Sustrato sobre la actividad

enzimática.

Las enzimas son proteínas que tienen la propiedad de acelerar las reacciones químicas sin modificar la constante de equilibrio ni el cambio de energía libre de la reacción. La actividad catalítica de las enzimas es afectada por diversos factores como: concentración de sustrato, concentración de enzima, pH, temperatura, constante dieléctrica, inhibidores, etc. La velocidad de una reacción enzimática es afectada por la concentración de sustrato, cuando la concentración de sustrato es relativamente baja con respecto al valor Km, la velocidad de la reacción depende linealmente de la concentración de sustrato (reacción de primer orden), luego a medida que se incrementa éste se pierde la linealidad, hasta que la velocidad de reacción prácticamente ya no se incrementa (reacción de orden cero), es decir, hemos alcanzado la velocidad máxima (Vmax) de la reacción. Por cuyo motivo, al graficar velocidad de la reacción en función de la concentración de sustrato obtendremos una curva hiperbólica. Fundamento de la reacción El p-nitrofenil fosfato (sustrato), en un medio de reacción a pH 5,0 y 37ºC es hidrolizado por la fosfatasa ácida; reacción que se detendrá a los 2 minutos mediante la adición de NaOH, formando como productos fosfato inorgánico y p- nitrofenolato (color amarillo). Esta reacción se puede describir mediante las siguientes ecuaciones: p - NO 2 - fenilfosfato p - NO 2 - fenol + Pi p - NO 2 fenol + NaOH p - NO 2 fenolato + H 2 O

Transcurrido 2 minutos exactamente (controlar con un cronómetro), se detendrá la reacción por adición de 1 mL de NaOH 1N, con un intervalo de 15 segundos, de tal manera que el tiempo de reacción en cada tubo será de 2 minutos. Luego, se adicionará 1 mL de NaOH 1N a cada uno de los tubos blancos: B-1, B-2, B-3, y B-4. Leer en el espectrofotómetro a 405 nm. La concentración de sustrato en cada tubo será: REACTIVOS TUBOS Concentración de sustrato (M)

0,0001M 0,0002M 0,0005M 0,0010M

1/[s].mM-1 1/V( mU-1) 0,0001M 0. 0,0002M 0. 0,0005M 0. 0,0010M 0.