Volem separar una proteïna d'un cultiu cel·lular. Per tal d'aconseguir-ho, el primer que
farem és, a través de la centrifugació diferencial, separar les diferents fraccions:
a) Fracció nuclear
b) Fracció mitocondrial
c) Fracció microsomal
Pregunta 1
Suposem que volem fer una primera centrifugació per separar la fracció nuclear de
cèl·lules d'un fetge de rata. El diàmetre mitja del nucli és 6,4 µm, i la densitat mitjana
és de 1,11 g/cm3. Calcula la massa (en µg) del nucli.
Pregunta 2
Text de la pregunta
Calcula, per a un nucli de diàmetre 5,2 µm i de densitat 1,12 g/cm3, quin serà el pes
aparent (en N) en gravetat g=9.8 m/s2, si es troba en una dissolució de densitat 1.02 g/
cm3
Pregunta 3
Calcula, per a un nucli de diàmetre 5,2 µm i de densitat 1,11 g/cm3, quin serà el pes
aparent (en N) si es troba en una dissolució de densitat 1.02 g/cm3 i la mostra està en
una centrifugadora de 40 cm de radi que gira a una velocitat angular de 450 rpm
Pregunta 4
Si volem que tots els nuclis precipitin en 10 minuts al fons d'un tub d'assaig de mida 5
cm, a quina velocitat mínima (en m/s) haurà de caure un nucli que estava en la part
superior del tub?
Pregunta 5
A la velocitat calculada anteriorment, quina serà la força de fricció (Stokes) que notarà
un nucli de diàmetre 6,5 µm. (Viscositat del medi 10-3 Pas)
OBSERVACIÓ: Compara el resultat d'aquesta pregunta amb els de les qüestions 2 i 3.
Observaràs que la fricció d'un nucli és molt més similar al pes aparent centrifugat que
no pas al pes aparent sense centrifugar, per tant necessitem centrifugar a aquestes
velocitats per tal de superar la fricció que suporta un objecte de la mida del nucli.
Pregunta 6
Determina a quina velocitat (en rpm) hem de fer girar una centrifugadora de radi R=30
cm per tal de fer precipitar al fons d'un tub d'assaig de 5 cm en 10 minuts tots els
nuclis, de radi mitjà 6,8 µm i densitat 1,12, en un medi de densitat 1.02 g/cm3 i
viscositat 10-3 Pa·s.
Llegeix atentament el següent capítol extret del llibre :J. M. Berg, J. L. Timoczko i L.
Stryer, Bioquímica, Ed. Reverté, 6a edició.
Cap 3.1 pag 76: "La ultracentrifugación es valiosa para separar las biomoléculas y
determinar sus masas moleculares"
