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informacion que trata sobre informe de analiis termico hecho en laboratorio
Tipo: Apuntes
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Muchos analitos tienen la capacidad de absorber radiación del espectro UV o Visible sin ser sustancias pigmentadas: capsaicina, acrilamida, lovastatina, etc. Los equipos de cuantificación HPLC se basan en la separación de analitos dentro de una columna y la posterior cuantificación por absorción de radiación al momento que el analito sale de la columna. Existen diferentes detectores para medir la señal generada por la presencia de un analito en fase móvil: absorbancia, fluorescencia, índice de refracción. La señal medida debe tener relación directa con la concentración del analito en la fase móvil. Los equipos UPLC son una variante mejorada del HPLC, aunque guardan la misma estructura del equipo. En la presente practica se presenta como objetivo la Aplicación del UPLC en la determinación de Monacolina K en extractos de quinua fermentada. II. REVISIÓN DE LITERATURA La cromatografía UPLC (Ultra Performance Liquid Chromatography) ha sido uno de los avances más significativos en la ciencia de las separaciones en la última década. La UPLC es una tecnología de partícula para cromatografía líquida, con un nuevo diseño de columna, inyectores, bombas y detectores. La resolución y la sensibilidad de la UPLC permiten identificar trazas de contaminantes en aguas, pescado, cereales, carne y leche (en ambos extremos de la cadena alimentaria). Es una nueva categoría de ciencia de separación que aprovecha principios bien establecidos de cromatografía líquida usando partículas porosas de tamaño inferior a los 2 μm. Estas partículas funcionan a velocidades lineales elevadas de fase móvil para producir separaciones rápidas con sensibilidad y resolución mayores. Debido a esto la UPLC permite reducir notablemente los tiempos de análisis, a la par que satisface los criterios de aceptación del ensayo basándose en el número de platos, la resolución y la retención del analito. La cromatografía líquida de alta velocidad opera a una presión que llega hasta las 15,000 libras por pulgada cuadradas. Es un equipo con alta sensibilidad,
II.3.1 Fotodiodo Array (PDA) Ofrece detección óptica avanzada simultánea en el rango de 190 a 800 nm. Proporciona una detección y cuantificación de impurezas de traza sin precedentes con capacidades de análisis espectral. Identificación definitiva de compuestos y detección de coelución con operación simultánea en 2D y 3D. Este detector encuentra una aplicación importante en el descubrimiento de fármacos y el desarrollo farmacéutico. II.3.2 Detector de fluorescencia (FLR) Para la sensibilidad y selectividad a las aplicaciones basadas en fluorescencia, este detector se utiliza. Extiende los beneficios de la tecnología UPLC para el análisis de hidrocarburos aromáticos polinucleares (HAP), drogas de abuso y
vitaminas, cualquier componente con propiedades quimioluminiscentes, como la fluorescencia o la fosforescencia. II.3.3 El detector de índice de refracción (IR) IR es un detector universal que se utiliza cuando el producto químico no tiene absorbancia UV o está limitada. Estos incluyen alcoholes, azúcares, ácidos grasos, excipientes, materia prima y productos farmacéuticos farmacéuticos. Además de esta caracterización de polímeros de bajo peso molecular, también se encuentra aplicación en la UPLC. La principal desventaja de este detector es que carece de sensibilidad. II.3.4 El detector de masas (MS) UPLC se puede acoplar con un espectrómetro de masas (MS) y un detector de espectros de masas en tándem (MS-MS) que se aplican en varios campos y se utilizan para la identificación, cuantificación y análisis de masas de materiales. Además, la elucidación estructural de una molécula desconocida se puede encontrar por fragmentación. Este detector tiene varios analizadores de masa, dependiendo de su aplicación, algunos de ellos son cuadrupolo simple, cuadrupolo triple (tándem), trampa de iones y tiempo de vuelo (TOF). Proporcionan una sensibilidad, selectividad y resolución de tiempo muy altas. Junto a estos detectores, muchos otros detectores se pueden separar con un guión para UPLC, como infrarrojo (IR), espectrometría de masas de plasma acoplado inductivo (ICP-MS), resonancia magnética nuclear (RMN) y detector de dispersión de luz evaporativa (ELSD), detector electroquímico (EC). II.4 MONACOLINA K La monacolina K es un compuesto activo presente de manera natural en la levadura roja de arroz y químicamente idéntico a algunos medicamentos indicados para el colesterol; por ello, en determinadas circunstancias, se la considera una alternativa alimenticia a
3.1. Materiales Micropipeta Ependorf, 1000 μL L Matraz Erlenmeyer 500 ml Filtros de jeringa 0,45 μL L (Milipore) Filtro de placa 0,45 μL L (Milipore) Jeringa plástica de 5 ml Fiola ámbar de 10 ml Matraz Kitasato 500 ml Tubo falcon (plástico) 15 ml 3.2. Reactivos Solución ácido fórmico 0,1% en agua Solución ácido fórmico 0,1% en acetonitrilo Metanol absoluto grado HPLC 3.3. Equipos UPLC modelo LaChrom (Hitachi High-Technologies Corporation, Japón)
3.4. Procedimiento
Registro Continuo del Cromatograma en Tiempo Real. Cromatograma obtenido en la práctica. Se determina la concentración según el artículo utilizado como referencia para este trabajo de investigación.
a) 0.5 g fueron extraídos en 10 ml de metanol (f.d = 20) b) C = 2.19 mg/g entre 20 = 0.1095 mg/ml extracto etanólico Utilizando una relación proporcional: a) abs = 0.025 C = 0.1095 mg/ml b) abs = 0.0075 C = 0.0328 mg/ml En base a la dilución: 0.5 g harina quinua en 10 ml metano: a) 𝐶 = 0. mg MKA ml extracto x 10 ml extracto 0.5 g quinua = 0.657 mg MKA/ g quinua Espectro de Absorción de la Monacolina K ácida (pico 3) (Según literatura). Desarrollo de un pico de máxima absorción a 223 nm. Otras sustancias presentan picos de absorbancia diferentes. Otros cromatogramas presentan la misma secuencia de picos: Monacolina J – Monacolina K ácida – Monacolina K. Espectro de Absorción de la Monacolina K ácida (pico 3) (Según literatura).
Espectro de Absorción de la Monacolina K ácida (pico 3) (Según literatura). Monacolina J Ácida Monacolina J Monacolina K ácida Monacolina K Fuente: Li et al. (2004) Condiciones: Flujo Gradiente: a) Acetonitrilo b) Solución acuosa ácido acético 0.2%
Según datos de la literatura a un tiempo de retención de 11.66 min corresponde al pico de la monacolina K ácida. Comparando con datos de la literatura la concentración de monacolina K ácida en la quinua fermentada sería 0.657 mg/g harina quinua fermentada (valor muy aproximado) El espectro de absorción obtenido mostró un pico a 223 nm, otros autores indican picos máximos a 240 nm, puede deberse a variaciones en la composición de la fase móvil.
6. BIBLIOGRAFIA Avula, G; Cohen, P; Wangh, Y; Sagi, S; Feng, W; Wang, M; Khan, I. 2014. Chemical profiling and quantification of monacolins and citrinin inred yeast rice commercial raw materials and dietary supplementsusing liquid chromatography- accurate QToF mass spectrometry:Chemometrics application. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 100 (2014): 243 – 253. Li, Y; Liu, H; Wang, Z. 2005. A Validated Stability-Indicating HPLC with photodiode Array Detector (PDA) method for the Stress Tests of Monascus purpureus- fermentated rice, red yeast rice. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 39 (2005): 82 – 90. Li, Y; Zhang, F; Wang, Z; Hu, Z. 2004. Identification and chemical profiling of monacolins in red yeast rice using high-performance liquid hromatography with photodiode array detector and mass spectrometry. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 35 (2004): 1101 – 1112. Martínez Álvarez JR. La levadura roja de arroz en el tratamiento de la hipercolesterolemia. Nutr. clín. diet. Hosp. 2012; 32(2):106-109. Consultado on- line http://www.nutricion.org/publicaciones/revista_2012_32_2/LEVADURA- ROJA.pdf
