Informe de laboratorio: microscopia, Guías, Proyectos, Investigaciones de Histología

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PROGRAMA MEDICINA

HISTOLOGIA I

TITULO:

LABORATORIO 2: MICROSCOPIA

PRESENTADO POR:

JUAN MANUEL HERNANDEZ LENGUA

CURSO:

GRUPO:

2A

BARRANQUILLA 2022

4. PRE-LABORATORIO

**1. Dibuje un microscopio óptico compuesto y señale sus partes R/

2. Investigue que otras clases de microscopios existen y cuál es su utilidad R/** MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO Es un tipo de microscopio que cuenta con un condensador especial que dirige los rayos luminosos desde la parte lateral, de manera que ilumina la muestra oblicuamente. Las lentes del microscopio reciben solo la luz dispersada por los diferentes componentes celulares (fenómeno Tyndall), por lo que las estructuras celulares aparecen brillantes, contra un fondo oscuro. La iluminación en campo oscuro se puede realizar de dos maneras diferentes: transmitida o incidente. En el primer caso, la parte central del rayo de luz queda ocluida por una lámina circular colocada en su trayectoria, antes de atravesar la muestra, de tal manera que esta queda oblicuamente iluminada. Los objetos pequeños aparecen brillantes sobre un fondo oscuro o bien con un curioso efecto de bajorrelieve. Esta iluminación puede conseguirse colocando un filtro opaco circular dentro del condensador del microscopio. El segundo tipo de iluminación o incidente necesita de un condensador especial provisto de una superficie central en forma de parábola que refleja lateral y periféricamente la luz hacia un espejo, con la inclinación suficiente para enviar un cono de luz hacia la muestra. Estos condensadores proporcionan una mayor intensidad de iluminación que los convencionales, permitiendo así la observación a gran aumento. Normalmente, se usa la microscopía de fondo oscuro para la observación de células vivas y móviles, como bacterias y espermatozoides. Por ejemplo, una célula de un cultivo puede mostrar brillantes el nucléolo, la envoltura, las mitocondrias y las gotitas de lípidos, que se destacan sobre el fondo oscuro del citoplasma. MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES

distancia de trabajo y poder observar células creciendo en medios de cultivo de varios milímetros de espesor. Generalmente se emplea la observación de contraste de fases o de interferencia diferencial. También puede disponer de una lámpara de fluorescencia y de los correspondientes filtros de excitación para realizar observaciones sobre células vivas a diferentes intervalos de tiempo (time lapse). Existe, igualmente, la posibilidad de adaptar al microscopio toda una gama de accesorios orientados a la micromanipulación y obtención de diminutas porciones de la muestra. Otra aplicación de este tipo de microscopio sería el control periódico de los cultivos celulares. También se usa para observar y manipular gametos o embriones vivos in vitro, en técnicas de fecundación asistida. MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA Este tipo de microscopio permite detectar moléculas que se vuelven fluorescentes, es decir, que absorben luz de determinada longitud de onda y reemiten luz de una longitud de onda mayor. El microscopio de fluorescencia se caracteriza por poseer una fuente de luz de gran intensidad y dos sistemas de filtros. Uno de estos sistemas filtra la luz antes de que alcance la muestra, de modo que deja pasar solo la longitud de onda que excita las moléculas fluorescentes que se quieren visualizar. La muestra es visualizada a través del segundo sistema de filtros, que deja pasar solo la longitud de onda correspondiente a la luz reemitida por los componentes fluorescentes. De esta manera, las estructuras fluorescentes aparecen luminosas y brillantes, y resaltan sobre un fondo oscuro. Como fuente de luz puede utilizarse luz visible, de longitud de onda corta, o bien ultravioleta, lo que permite detectar moléculas que absorben dicho tipo de luz y se vuelven fluorescentes, con lo que emitirán una luminosidad que se encontrará dentro del espectro visible. Con este tipo de microscopio pueden revelarse fluorescentes naturales, como la vitamina A o la clorofila. Sin embargo, con mayor frecuencia se utiliza para detectar, en células o tejidos, la presencia de proteínas u otro tipo de moléculas a las que previamente se haya acoplado un colorante fluorescente (fluorocromo) agregado a la preparación, de manera que adquieran una fluorescencia inducida o exógena (fluorescencia secundaria). Las técnicas de inmunofluorescencia, que proporcionan gran especificidad y sensibilidad en la detección de moléculas en células y tejidos, se basan en la utilización de anticuerpos unidos a colorantes fluorescentes. EL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO es un instrumento de gran utilidad en la investigación científica gracias a su gran poder de aumento. Mediante este tipo de microscopio es posible aumentar imágenes de muestras hasta niveles muy superiores a los del microscopio óptico. Para entender cómo funciona un microscopio electrónico es necesario definir algunos conceptos físicos. Uno de estos conceptos es la longitud de onda. Dada una onda periódica, la longitud de onda es la distancia entre dos ciclos consecutivos. En el caso de la luz visible, cada onda de un determinado color tiene una longitud de onda específica. Este concepto es importante en el campo de la microscopía óptica porque está relacionado con el

máximo aumento que puede alcanzarse. El máximo aumento de un microscopio es proporcional a la longitud de onda del medio con el que se observa. A menores longitudes de onda, mayor resolución puede obtenerse. Por este motivo, el máximo aumento que se puede obtener con un microscopio óptico difícilmente supera los 1500 aumentos. MICROSCOPIOS DE BARRIDO CON SONDAS También denominados de sonda de barrido (scanning probe microscopes): Son instrumentos primordiales en la nanociencia. Se constituyen básicamente de una plataforma y una sonda o aguja fina que recorre la superficie de la muestra con gran precisión (escaneo o barrido). Este filamento se coloca muy cerca (a 1 nm) del objeto a estudiar, generando una corriente eléctrica y se desplaza por la superficie, captando electrones que se escapan en lo que se llama efecto túnel. Los electrones saltan de la punta a la muestra y viceversa. La corriente del efecto túnel varía dependiendo de la distancia entre la sonda y la muestra. De esta manera se reproduce la topografía o relieve de la muestra con una alta resolución y mediante programas informáticos, la imagen es traducida por la computadora, pudiéndose distinguir un átomo de otro y se genera una imagen en tres dimensiones

3. ¿Cuáles son los diferentes poderes del microscopio? Explique cada uno de ellos R/ El poder de definición: que es la capacidad de proporcionar imágenes con contornos nítidos. Esta también depende de la calidad del sistema óptico. Un microscopio definirá bien cuando tenga objetivos apocromáticos y oculares compensados, es decir cuando se hayan corregido las aberraciones de esfericidad y cromática. El poder de penetración: que es la capacidad de permitir la observación simultanea de dos o más planos en el objeto observado. La potencia total del microscopio: que se calcula multiplicando la potencia (aumentos) del objetivo por la potencia del ocular y por el factor de tubo (normalmente igual a 1, si la longitud del tubo es la correcta, generalmente de 160 mm y si no hay ninguna lente intermedia). En el caso de un objetivo 25/0.55 y un ocular 10X/18, con un factor de tubo 1, la potencia del microscopio es de 25X10X1 = 250:1. La potencia depende del poder de resolución del microscopio. 4. Investigue que tipo de microorganismo podemos encontrar en el agua procedente de estanques o charcos, realice ilustraciones de los más comunes. R/ Lo s diferentes tipos de microrganismos que podemos encontrar en el agua de estanques o charcos son los siguientes: Acinetobacter

Escherichia Coli Helicobacter pylori Klebsiella

Legionella Leptospira

**6. PROCEDIMIENTO

• Se coloca una gota pequeña de la muestra sobre un portaobjetos usando la pipeta o el gotero.
• Colocar el cubre objetos sobre el porta objetos lentamente con el objetivo de que no se formen burbujas.
• Se observa al microscopio, primero con el objetivo de menor aumento y una vez localizado algún microorganismo se utilizan otros objetivos de mayor aumento para verlo con detalle.
• Identificar con la ayuda de su consulta realizada en el pre-laboratorio, los diferentes organismos que se vayan encontrando. R/** el organismo encontrado al realizar la observación fue un crustáceo muy pequeño llamado Ostrácoda **7. POST-LABORATORIO:
• Realizar un esquema (fotografía o dibujo coloreado) de cada estructura observada con sus respectivas partes.**

TEJIDO O PLACA HISTOLÓGICA : Papel Japon OBJETIVO: X DESCRIPCIÓN: aquí podemos observar detalladamente líneas en forma de tubo por toda la muestra que parecen a los vasos conductores de la célula vegetal

TEJIDO O PLACA HISTOLÓGICA : Papel Japón OBJETIVO: X DESCRIPCIÓN: aquí podemos ver de una forma mas detallada los diferentes tubos conductores (xilema, floema)

TEJIDO O PLACA HISTOLÓGICA : Hilo OBJETIVO: X DESCRIPCIÓN: podemos observar de una forma un mas detalladas las hebras del hilo y como estas están enlazadas entre si

TEJIDO O PLACA HISTOLÓGICA : Hilo OBJETIVO: X DESCRIPCIÓN: aquí podemos observar detalladamente las hebras del hilo con un gran detalle pudiendo diferenciar algunas de estas de las demas

TEJIDO O PLACA HISTOLÓGICA : Polen OBJETIVO: X DESCRIPCIÓN: podemos ver el polen aun mas de cerca y observamos como se torna de un color un poco verdoso

TEJIDO O PLACA HISTOLÓGICA : Polen OBJETIVO: X DESCRIPCIÓN: observamos de una forma muy detallada la partícula de polen y con un color verdoso y podemos ver los diferentes células sexuales que se encuentra dentro de este

TEJIDO O PLACA HISTOLÓGICA : Agua de charco OBJETIVO: X DESCRIPCIÓN: Se puede observar de una mejor manera, algas y un pequeño animal llamado ostrácodo que se encuentra junto a las algas

• ¿Cómo se calcula el aumento total de la imagen de la preparación obtenida con el microscopio óptico? R/El aumento de un microscopio es una de sus características esenciales que define su calidad y el tipo de muestras que se podrán observar. El aumento total de un microscopio indica en qué medida este puede aumentar la imagen de la muestra observada. En el caso del microscopio óptico compuesto, el aumento de la muestra se produce en dos etapas, primero en las lentes del objetivo y a continuación en las lentes del ocular. De este modo, es necesario conocer el aumento de estas dos partes del microscopio para conocer el aumento total que se obtiene. El aumento total del microscopio se puede calcular fácilmente multiplicando el aumento del objetivo por el aumento del ocular: Aumento microscopio = Aumento objetivo × Aumento ocular Por ejemplo combinando un objetivo con un aumento de 60x con un ocular de 10x se obtiene un aumento total de 600x.
• ¿Por qué se utiliza aceite de inmersión con el objetivo de 100x? R/ ¿Para qué sirve el aceite de inmersion? En general el aceite de inmersión sirve para aumentar la resolución de un microscopio mediante la inmersión del lente objetivo y el espécimen en un aceite transparente de alto índice de refracción. ¿Por qué usar aceite de inmersión con el objetivo de inmersión? Los objetivos de mayor aumento, tienen una distancia focal muy pequeña y ademas la primera lente del objetivo es de pequeño diámetro. Los rayos que desde la muestra se dirigen al objetivo atraviesan el vidrio del cubreobjeto y al pasar al aire se separan de la normal. Algunos rayos incluso sufren reflexión total en la interfase vidrio- aire Solo llega al microscopio una pequeña parte de la luz que parte de la muestra, con el problema que conlleva para la visión. Al intercalar, entre el objetivo y el cubreobjeto una gota de aceite de cedro, de indice de refracción casi igual al vidrio, los rayos emergentes ya no se apartan de la normal, sino que continúan su camino sin desviación, consiguiendo así que una mayor cantidad de luz llegue al objetivo, mejorando notablemente la visión. ¿Como se utiliza el aceite de inmersión? Se utiliza colocando una gota en el objetivo para facilitar la visión del microscopio al entrar en contacto con el cubre-objetos. Su falta o secado puede producir una mala visión en el microscopio. Para usos de laboratorio, análisis, investigación y química fina.
• Describa que es la apertura numérica, distancia focal del microscopio