Preparación de Medios de Cultivo: Guía Práctica para Ingeniería de Alimentos | Ejercicios de Microbiología Farmacéutica

PRACTICA N°4 PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y

MÉTODOS DE AISLAMIENTO Y SIEMBRA

Idrobo Andrea (2043659), Narváez Stella (2060076), Angela

Orrego(2042344) ,Fuelpaz Paula (2041510)

Escuela de Ingeniería de Alimentos, Facultad de Ingeniería, Universidad del

Valle

RESUMEN

Los medios de cultivo son preparaciones nutritivas especiales para la recuperación, aislamiento y

mantenimiento de microorganismos bacterianos y fúngicos. Estos medios pueden ser sólidos,

líquidos o semisólidos. Para la siembra y aislamiento de microorganismos, parte del medio de

cultivo se esterilizó por autoclave para luego fue fraccionado en placas de Petri estériles y otra

parte, se disolvió por calentamiento a baño de María, cabe resaltar que los microorganismos

necesitan nutrientes de acuerdo a sus necesidades para llevar a cabo su desarrollo, estos

nutrientes deben ser provistos por el medio en el que viven, denominados medio de cultivo. En la

práctica se buscó inocular microorganismos para el estudio de su aislamiento y reconocimiento

de sus características, su capacidad de crecer y multiplicarse para formar colonias ya que estas

ayudan a distinguir diferentes especies de microorganismos presentes. Por ello, se han

desarrollado los medios de cultivo (agar nutritivo y caldo nutritivo). Además de diferentes

técnicas de aislamiento como aislamiento por agotamiento por estrías en superficie y obtención

de cultivos en profundidad, el microorganismo observado S.aureus, tuvo predominio de cocos y

bacilos, frecuentemente dispuestos respectivamente en sarcinas, forma de maza y agrupados en

empalizada.

Palabras claves: cultivo, siembra, aislamiento, autoclave, agar nutritivo

INTRODUCCIÓN

Los primeros cultivos puros fueron obtenidos por el micólogo Brefeld, quien logró aislar esporas

de hongos y cultivarlas sobre medios sólidos a base de gelatina. Por su menor tamaño, este

método se hacía inviable para las bacterias, por lo que se recurrió a un método basado en

diluciones: Lister, en 1878 realizó diluciones secuenciales de cultivos mixtos, hasta lograr

muestras en las que existía una sola célula. Un medio de cultivo está conformado por sustancias

usualmente complejas que hace posible el crecimiento de bacterias. Éstas consiguen de su medio

las fuentes de carbono, nitrógeno, fósforo, potasio, sodio, magnesio y otros elementos o

sustancias necesarias para su metabolismo. (García Martos et al. 1993).

Koch buscaba métodos sencillos de cultivo puro, indispensables para proseguir sus

investigaciones sobre bacterias patógenas,empleó rodajas de patata como sustrato sólido

nutritivo sobre el que se podían desarrollar colonias macroscópicas de bacterias recurrió a

compactar el típico caldo de cultivo a partir de carne (diseñado por Loeffler) añadiendo

gelatina(1881). El medio sólido logrado era transparente, lo que permitía visualizar fácilmente

los rasgos coloniales, y contenía los nutrientes adecuados para el crecimiento de una amplia

gama de bacterias. Los medios de cultivo contienen nutrientes ricos en factores de crecimiento

Vista previa parcial del texto

¡Descarga Preparación de Medios de Cultivo: Guía Práctica para Ingeniería de Alimentos y más Ejercicios en PDF de Microbiología Farmacéutica solo en Docsity!

PRACTICA N°4 PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y

MÉTODOS DE AISLAMIENTO Y SIEMBRA

Idrobo Andrea (2043659), Narváez Stella (2060076), Angela Orrego(2042344) ,Fuelpaz Paula (2041510) Escuela de Ingeniería de Alimentos, Facultad de Ingeniería, Universidad del Valle RESUMEN Los medios de cultivo son preparaciones nutritivas especiales para la recuperación, aislamiento y mantenimiento de microorganismos bacterianos y fúngicos. Estos medios pueden ser sólidos, líquidos o semisólidos. Para la siembra y aislamiento de microorganismos, parte del medio de cultivo se esterilizó por autoclave para luego fue fraccionado en placas de Petri estériles y otra parte, se disolvió por calentamiento a baño de María, cabe resaltar que los microorganismos necesitan nutrientes de acuerdo a sus necesidades para llevar a cabo su desarrollo, estos nutrientes deben ser provistos por el medio en el que viven, denominados medio de cultivo. En la práctica se buscó inocular microorganismos para el estudio de su aislamiento y reconocimiento de sus características, su capacidad de crecer y multiplicarse para formar colonias ya que estas ayudan a distinguir diferentes especies de microorganismos presentes. Por ello, se han desarrollado los medios de cultivo (agar nutritivo y caldo nutritivo). Además de diferentes técnicas de aislamiento como aislamiento por agotamiento por estrías en superficie y obtención de cultivos en profundidad, el microorganismo observado S.aureus , tuvo predominio de cocos y bacilos, frecuentemente dispuestos respectivamente en sarcinas, forma de maza y agrupados en empalizada. Palabras claves: cultivo, siembra, aislamiento, autoclave, agar nutritivo INTRODUCCIÓN Los primeros cultivos puros fueron obtenidos por el micólogo Brefeld, quien logró aislar esporas de hongos y cultivarlas sobre medios sólidos a base de gelatina. Por su menor tamaño, este método se hacía inviable para las bacterias, por lo que se recurrió a un método basado en diluciones: Lister, en 1878 realizó diluciones secuenciales de cultivos mixtos, hasta lograr muestras en las que existía una sola célula. Un medio de cultivo está conformado por sustancias usualmente complejas que hace posible el crecimiento de bacterias. Éstas consiguen de su medio las fuentes de carbono, nitrógeno, fósforo, potasio, sodio, magnesio y otros elementos o sustancias necesarias para su metabolismo. (García Martos et al. 1993). Koch buscaba métodos sencillos de cultivo puro, indispensables para proseguir sus investigaciones sobre bacterias patógenas,empleó rodajas de patata como sustrato sólido nutritivo sobre el que se podían desarrollar colonias macroscópicas de bacterias recurrió a compactar el típico caldo de cultivo a partir de carne (diseñado por Loeffler) añadiendo gelatina(1881). El medio sólido logrado era transparente, lo que permitía visualizar fácilmente los rasgos coloniales, y contenía los nutrientes adecuados para el crecimiento de una amplia gama de bacterias. Los medios de cultivo contienen nutrientes ricos en factores de crecimiento

(que el microorganismo no puede sintetizar por sí mismo). Se utiliza principalmente para aquellas bacterias difíciles de cultivar. Un ejemplo conocido de este tipo de medios es el agar sangre (Negroni, 2009). El desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento fue una consecuencia de las investigaciones llevadas a cabo por Beijerinck y Winogradsky entre 1888 y los primeros años del siglo XX, sobre bacterias implicadas en procesos biogeoquímicos y poseedoras de características fisiológicas distintivas (quimioautótrofas, fijadoras de nitrógeno, etc.). favorecen el crecimiento de la bacteria de interés y que inhiben el resto. Esto puede lograrse mediante el uso de sustancias inhibidoras como los antibióticos, o cierta concentración de algunas sales; o simplemente agregando una sustancia que sea utilizada únicamente por el tipo de bacteria que se desea aislar. Algunos ejemplos de medio de cultivo selectivo es el Agar Sal que posee una concentración de NaCl del 10%, lo que inhibe la mayoría de las bacterias, no así a algunas como el Staphylococcus aureus la cual puede crecer sin ninguna dificultad. (García Cortés,2004). Otra importante aportación a este "período de cultivo" dentro del desarrollo de la Microbiología surgió del uso de medios diferenciales, en los que se manifiesta algún rasgo bioquímico o metabólico, lo que contribuye a la identificación microbiana. Fue Würtz quien, en 1892, introdujo el uso de indicadores de pH, incorporados en los medios, lo cual permitía revelar la producción de acidificaciones por fermentación en ciertas bacterias. Por ejemplo, muchas bacterias fermentan azúcares produciendo ácido, mientras que otras no. Si se incorpora un azúcar, como la lactosa, en el medio y además se agrega un indicador ácido-base, se podrá saber si la bacteria la fermenta debido al cambio de color que ocurre al acidificarse en el medio de cultivo. (García Cortés, 2004). Son utilizados con la finalidad de diferenciar o resaltar ciertas características propias sobre la fisiología de la bacteria cultivada. Se acompañan además de algunas tinciones, como el rojo de fenol, para identificar estos cambios. (Negroni, 2009).

3. OBJETIVOS 3.1 Objetivo General Aplicar técnicas para la preparación de los medios de cultivo y la importancia de sus componentes para el crecimiento bacteriano 3.2. Objetivos específicos 3.2.1 Aprender a realizar un agar inclinado 3.2.2 Aplicar las técnicas para siembra de microorganismos (S.aureus) en caldo nutritivo y agar inclinado. 3.2.3 Aplicar procedimientos para propagar microorganismos en cultivos mixtos. 4. MATERIALES -Mechero -Candela -Asa -Balanza -Autoclave -Plancha de calentamiento -Guantes de tela -Agua destilada -Microorganismo S. aureus

6. RESULTADOS

6.1 Observación de siembra en medio líquido: En la tabla 1 se exponen los tubos de ensayo sembrados en medio líquido, la imagen 1 muestra el microorganismo S.aureus sembrado en un caldo nutritiv o , también se utilizó la técnica de siembra en profundidad como se expone en la imagen 2 y siembra en zigzag como se muestra en la imagen 3 con el mismo microorganismo. Caldo Nutritivo Agar Nutritivo Agar Nutritivo Inclinado Imagen 1. Tubo de ensayo con medio líquido con microorganismo s,aureus Imagen 2. Tubo de ensayo agar nutritivo con microorganismo s.aureus siembra en profundidad Imagen 3. Tubo de ensayo de agar nutritivo con microorganismo s.aureus con siembra en zig zag Tabla 1. Tubos de ensayo con microorganismos s. aureus 6.2. Observación de siembra en medio sólido: En la tabla 2 se exponen las 3 diluciones sembradas en las cajas petri con el microorganismo S. aureus en un cultivo mixto, como se muestra en la imagen 4,5 y 6.

Dilución 10-1 Dilución 10-2 Dilución 10- Imagen 4. Dilución 10-1 con cultivo mixto Imagen 5. Dilución 10-2 con cultivo mixto Imagen 6. Dilución 10-3 con cultivo mixto Tabla 2. Diluciones de la 10-1 a la 10-3 con microorganismo mixto

6.3 Observación de cultivos axénicos: En la tabla 3 se exponen las cajas petri

sembradas en un cultivo mixto con las diferentes técnicas, en la imagen 7 zig zag y en la

imagen 8 en cuadrantes.

Siembras Petri en zig zag Siembra petri en cuadrantes Imagen 7. Siembra en caja petri de microorganismo mixto en zig zag. Imagen 8. Siembra en caja petri de microorganismo mixto en cuadrantes. Tabla 3. Siembras en caja petri con microorganismo mixto

La siembra del microorganismo S. Aureus , sembrada en cuadrantes obtuvo colonias aisladas, suponiendo que cada colonia formada por la descendencia de una sola célula, dio por resultado un cultivo puro. La calidad del rayado por estría depende de la cantidad de bacterias que se tomó en el primer inóculo, dependiendo de la concentración de bacterias en la muestra original. La utilización de medios sólidos de cultivo implantados en cajas de Petri y tubos, permitió la siembra de uno o un grupo pequeño de microorganismos que se multiplicó formando una colonia separada donde se manifestaron sus características que permitió evaluar la pureza del cultivo resultante. “El crecimiento implica la división celular, que resulta en la duplicación del número celular. La duplicación celular puede ser mediante la fisión binaria, la gemación o la esporulación. El crecimiento celular bacteriano depende de una amplia variedad de tipos de reacciones químicas, por ello el diseño de medios de cultivo específicos no es trivial y la recuperación de microbios sigue siendo limitada (Madigan et al., 2009)”. Por otro lado la siembra en zig zag evidencia que el microorganismo creció en todo el medio con una coloración blanca y de forma redonda muy parecidas al crecimiento de levaduras.

6. CONCLUSIONES ● La preparación de los medios de cultivo microbiológico es el proceso de mezcla de nutrientes, agentes amortiguadores y agentes destinados al mantenimiento del equilibrio osmótico, además de inhibidores o indicadores selectivos para crear un agar o caldo que sustente el crecimiento y la diferenciación de los microorganismos. Tanto la preparación como el almacenamiento del medio son críticos para garantizar un crecimiento exitoso. ● Los medios de cultivo están conformados por nutrientes favorables para la proliferación de microorganismos, deben proporcionar condiciones de crecimiento óptimas para todos los microorganismos o para tipos específicos de microorganismos. La composición precisa de un medio depende de la especie que vaya a cultivarse y del objetivo de la aplicación. ● El conocimiento de la nutrición microbiana permite el cultivo de los microorganismos en el laboratorio. En general, todos los microorganismos tienen parecidos requerimientos de macro- y micronutrientes, aunque ha quedado claro que la forma en que cada nutriente es captado puede variar mucho entre unas bacterias y otras, así como la cantidad relativa de cada nutriente.

8. REFERENCIAS

Castro, f., González, I.A.; rondón, f., Vélez m. c. (2002). Manual de prácticas y talleres de biología general. Cali, Colombia: Universidad del valle. Departamento de biología. Págs. 87-98.
Clavell, L., Pedrique de Aulacio, M.,Cavalcante y Döbereiner, (1988) (1992). Microbiología. Manual de Métodos Generales. Segunda edición. Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela. Págs. 178-198.
Cerra H.; Fernández M. C., Horak C., Lagomarsino M., Torno G., Zarankin E. (2013). Manual de Microbiología aplicada a las Industrias Farmacéutica,Cosmética y de Productos Médicos. Publicado como ebook en ww.aam.org.ar.
Diaz R., Gamazo C., López Goñi I. (2005) Manual Práctico de Microbiología (3|Ed). Editorial Masson. Barcelona España. Págs. 25-32.
Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case, Introducción a la Microbiología. 2007, 9ª edición. 6.Instituto Nacional de Seguridad y Salud en el T.rabajo. C. “Staphylococcus Aureus - Agentes Biológicos - Bacteria,2020.” https://www.insst.es/agentes-biologicos-basebio/bacterias/staphylococcus-aureus.
Martínez M, Gutiérrez V, Novo R, Negroni. Microbiología aplicada al manejo sustentable de suelos y cultivos. 2010. Serie: Gestión, Innovación y Tecnología. Universidad Técnica Federico Santa María. Santiago, Chile. Editorial USM. Págs. 182-235.
Madigan M.T., Martinko J. M., Bender K. S., Buckley D. H., Stahl D. A. (2015) Brock. Biología de los microorganismos. 14ª Edición. Editorial Pearson. Madrid,España. Págs. 76-87.
Madigan M.T, Martingo J. M., Jack Parker y Garcìa M. (2004). Brock Biología de los Microorganismos Prentice Hall. Décima Edición 1. Págs.157-206.
Microbiología básica para el área de la salud y afines, Hugo Humberto Montoya Villafañe, 2008, 2ª edición.
Rodríguez, E., Gamboa, M., Hernández, F., & García, J. (2005). Bacteriología general: Principios y prácticas de laboratorio. Costa Rica: Editorial Universidad de Costa Rica. Págs. 139-147.

Preparación de Medios de Cultivo: Guía Práctica para Ingeniería de Alimentos, Ejercicios de Microbiología Farmacéutica

Documentos relacionados

Vista previa parcial del texto

¡Descarga Preparación de Medios de Cultivo: Guía Práctica para Ingeniería de Alimentos y más Ejercicios en PDF de Microbiología Farmacéutica solo en Docsity!

PRACTICA N°4 PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y

MÉTODOS DE AISLAMIENTO Y SIEMBRA

6. RESULTADOS

6.3 Observación de cultivos axénicos: En la tabla 3 se exponen las cajas petri

sembradas en un cultivo mixto con las diferentes técnicas, en la imagen 7 zig zag y en la

imagen 8 en cuadrantes.

8. REFERENCIAS