¡Descarga Diagnóstico de Escherichia coli y Shigella flexneri en Infecciones Gastrointestinales - Pr y más Apuntes en PDF de Medicina solo en Docsity!
Semana 11 –Guía N° 20 Taller – “Diagnóstico de bacterias causantes de infecciones del tracto gastrointestinal” GRUPO 1 Escherichia coli (ECTS – causante de síndrome urémico hemolítico) Generalida des o E. Coli → ECTS - causante de síndrome urémico hemolítico o E. coli enterohemorrágica (ECEH) o verotoxigénica pues puede producir dos citotoxinas denominadas toxinas Shiga-like (Stx1 y Stx2), shigatoxinas o verotoxinas. Su reservorio es principalmente el ganado bovino. o La mayor parte de la información disponible sobre E. coli productora de toxina Shiga guarda relación con el serotipo O157(Ag somático): H7(Ag flagelar), pues es el más fácil de distinguir bioquímicamente de otras cepas de E. coli. o Los síntomas de la enfermedad causada por E. coli productora de toxina Shiga son calambres abdominales y la diarrea, que puede progresar en algunos casos a diarrea sanguinolenta (colitis hemorrágica). También puede haber fiebre y vómitos o El periodo de incubación varía entre tres y ocho días. La mayoría de los pacientes se recuperan en el término de diez días, pero en un pequeño porcentaje de los casos (especialmente niños pequeños y ancianos) la infección puede conducir a una enfermedad potencialmente mortal, como el síndrome hemolítico urémico que se caracteriza por una insuficiencia renal aguda, anemia hemolítica y trombocitopenia (deficiencia de plaquetas). Característ icas macroscóp icas de la muestra ○ Diarrea no inflamatoria y acuosa → se convierte a diarrea hemorrágica (sangre a veces visible al cabo de 1-3 días del comienzo) (15-20% sin diarrea sanguinolenta) ○ Diarrea disentérica Característ icas microscópi cas ● Escherichia coli es un bacilorecto gram negativo, anaerobio facultativo de la familia Enterobacteriaceae ● tamaño medio (0.4-0.6 x 2-3 um), no formadores de esporas, inmóviles o móviles mediante flagelosperítivos, fermentador de D-glucosa **Pruebas de orientació n Gram (-) → Prueba de la oxidasa:
- → Enterobacterias Desarrollo en medios de cultivo Fermentación de lactose ■ Medio selectivo frente bacterias (+) vs enterobacterias ■ Gram (+) ven inhibido su crecimiento debido a la presencia de sales biliares y cristal violeta ■ Solo crecen enterobacterias fermenten la lactosa (coliformes) liberarán productos ácidos que producirán un cambio de pH que se detectará gracias al rojo neutro. ■ Las colonias lactosa (+) aparecerán de color rojo o violeta contrastando con la coloración amarillenta de las colonias lactosa (-). → para todas las e. coli Fermentación de sorbitol en agar macconkey ■ E. Coli O157h7 causante del síndrome uremico hemolítico. (cepa enterohemorrágica) ■ F ermenta lactosa como todas las cepas de E. coli pero no sorbitol. Los medios de cultivo que contienen lactosa no permiten diferenciar entre estas cepas de E. coli, por eso se ha desarrollado el Mac Conkey con sorbitol Agar, el cual es un medio de cultivo similar en su formulación al agar macconkey excepto que se ha reemplazado la cantidad de lactosa por igual cantidad de sorbitol lográndose así un medio nutritivo, selectivo y diferencial en base a la fermentación de sorbitol. Cepa de E. coli (E. coli enteroinvasiva) que no tiene flagelos y no fermenta lactosa → ahora será parte de Shigella. ■ Fermentadoras de sorbitol → colonias rosadas-rojizas por fermentación del sorbitol disminuye el pH alrededor de la colonia ■ No fermentadores → colonias incoloras → E. Coli o157h CHROMagar STEC es un medio selectivo diferente que puede identificar E. coli o157:H7 así como algunos aislados se STEC no O157:H7 pero puede no ser tan sensible para ciertos STEC no O157:H7 como inmunoensayo de antígeno después de cultivo en caldo Pruebas bioquímica AGAR TSI - Es un método microbiológico.
s - Un medio de diferenciación para organismos entéricos gram negativos.
- Basada en su capacidad para fermentar dextrosa, lactosa y sacarosa y para producir sulfuro.
- contiene tres carbohidratos (glucosa, lactosa y sacarosa). Cuando dichos carbohidratos se fermentan, la producción resultante de ácido es detectada por el indicador rojo fenol. RESULTADO: (+) E. Coli resultados del crecimiento se ven colonias amarillas, medio amarillo AGAR MIO Medio utilizado en identificación de miembros de la familia Enterobacteriaceae en base a la movilidad, producción de indol y actividad enzimática ornítica decarboxilasa Movilidad Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento más allá de la línea de siembra (E. coli). Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra Ornitina descarboxi lasa Resultado positivo: color púrpura (E. coli). Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color violáceo en la superficie del medio. Prueba de indol Resultado positivo: color rojo (E. coli). Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento. CITRATO DE SIMMONS General Medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base a su capacidad de usar citrato como única fuente de carbono y energía. En el medio de cultivo el fosfato monoamónico es la fuente de nitrógeno y el citrato de sodio es la única fuente de carbono → Ambos son componentes necesarios para el desarrollo bacteriano Resultados ● Positivo: Crecimiento bacteriano con un intenso color azul en el pico de flauta. ● Negativo: Ausencia de crecimiento y permanencia del color verde en el medio de cultivo. (Como Escherichia Coli) ROJO DE METILO Generale s ● El RM es un indicados con pH entre un rango de 6 (amarillo) y 4.4 (rojo) ● El pH al cual él rojo de metilo detecta los ácidos es mucho más bajo al pH correspondiente a otros indicadores utilizados en medios de cultivo bacteriológicos. ● Para provocar un cambio de color, el microorganismo debe producir grandes cantidades de acido del sustrato de hidratos de carbono que se utilice
● Es una prueba cuantitativa de la producción de ácido, que
requiere que los microorganismos positivos producen ácidos fuertes (láctico, ácido, fórmico) de la glucosa Resultad os ● POSITIVO para E. coli: el desarrollo de color rojo estable en la superficie del medio indica la suficiente produccion de acido como para disminuir el pH a 4. ● NEGATIVO: Como otros microorganismos pueden producir pequenas cantidades de acido del sustrato probado, puede observarse un color naranja entre amarillo y rojo → esto NO indica una prueba positiva Agar urea de Christens en Generale s ● Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad ureásica. ● Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea (mediante la enzima ureasa), tales como Proteus spp., enterobacterias y estafilococos. Fundamento: ● En el medio de cultivo, la tripteína y la glucosa, aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos
PRUEBA DE LA CATALASA
El test de catalasa facilita la detección de la enzima catalasa en las bacterias Resultado (+) Shigella Metodo del tubo o Reacciones positivas: Efervescencia inmediata (formación de burbujas) o Reacciones negativas: No hay formación de burbujas (no hay una enzima catalasa que hidrolice al peróxido de hidrógeno) Metodo de inclinacion del tubo Metodo de deslizamiento Desarrollo en medios de cultivo
MEDIO CARACTERÍSTICAS INTERPRETACIÓN
Agar Salmonell a Shigella Selectividad alta No permite crecimiento de Gam (+) Permite diferenciar la salmonella de Shigella Salmonella (fermeta lactosa) y Shiguella no fermetan lactosa Lactosa (-) Sin evidencia de producción de H2S. Incoloras y rosa pálido Agar Mac conkey No permite el crecimiento de Gram (+) Shigella no fermenta lactosa por lo que no hay coloración rosada como en el caso de E.coli o Salmonalle Incoloro o color beige y no hay precipitación Agar xilosa lisina desoxicol ato (XLD) Aisla shigella Otras bacterias fermentan xilosa, lisina y desoxicolato permite colorear de rojo a amarillo Como el medio de cultivo el rojo y no hay cambios porque no hay fermentación la shiguella se ve transparente cultivo se ve rojo Agar entérico de Hektoen Selectividad alta: Las sales biliares hacen que el medio sea selectivo, inhibiendo los gram + y ↓ el crecimiento de gram- diferentes de Salmonella y Shigella: EN ESTE CASO, LA SHIGELLA SERÍA LA ÚNICA QUE CRECE y se ve como puntitos verdes alrededor Colonias verdes claro con buen crecimiento y húmedas No fermenta lactosa, sacarosa ni salicina, por lo que el color NO CAMBIA en el sistema indicador del pH (sis. formado por fucsina ácida y azul de bromotimol) → se reporta como LACTOSA – A comparación con E. coli que fermenta lactosa→ amarillo, naranja. Pruebas bioquímica s
DESCRIPCIÓN RESULTADO IMAGEN
Agar hierro de Kligler (AHK) Del cultivo en la zona del medio se toma la muestra (se supone que es la menos contaminada Se coloca en el agar por 24h a 38-45 grados centigrados Produce una cuña alcalina zona roja Fndi acido amarillo No produce ni gas ni H2s (existen serotipos que si generan burbujitas Agar hierro triple azúcar (AHTA) Agar motilidad Tmb se toma una muestra del cultivo en la zona central , se coloca en el agar Se deja toda la noche La shigella al ser inmóvil se forma una línea Si fuera móvil se formaría un halo difuso Agar urea Se observa si es ureasa + o – Si el resultado fuera + Se vería un tono rosado o rojo Si es (-) Se ve de color amarillo o rosado palido Shigella es (-) a ureasa se ve de color amarillo Agar Hierro Lisina (AHL) (-) Cuña roja y fondo amarillo (+) todo de color rojo (-) en caso de Shiguella Notas:
- Si da positivo a todos los exámenes mencionados anteriormente se pasan a las pruebas serológicas como : Aglutinacion ver grafico
- No olvidar hacer una coloración Gram
- Muchas bacterias podrían ocasionar bacterias de la misma naturaleza
- Fundamental la prueba de movilidad para diferenciar salmonella y shigella (recordar que shigella es inmóvil porque no tiene flagelos)
- Shigella no usa lactosa por lo que no se ve en Mac Conkey rojito los puntitos
- La shigella solo usa glucosa, no usa lactosa, no es móvil, creció sin formar puntitos negros en la prueba ( Agar entérico de Hektoen GRUPO 3 Salmonella spp Característ icas macroscóp icas de la muestra Grandes volúmenes, de 3,6 - 10,3 litros por día, pueden contener sangre y moco. La muestra puede llegar a ser totalmente líquida. Por lo que esta gran pérdida de liquido puede llevar a una deshidratación severa y también desencadenar en shock hipovolémico. Característ icas microscópi cas El análisis microscópico de las heces en el caso de infección por Salmonella no suele ser de utilidad, porque, aunque pueden aparecer heces sanguinolentas y existir leucocitos (PMN), estos también se presentan en otras diarreas invasivas. Gram – Tamaño: 0,7-1,5 de ancho x 2-5 de largo μm (micras). Anaerobios facultativos. Móviles (flagelos peritricos es decir que son bacterias peritricas que tienen flagelos que se proyectan en todas las direcciones. Pruebas de orientació n Salmonella spp pertenece a la familia de Enterobacteriaceae Se caracterizan por ser Gram (-). Por lo que la prueba de orientación que suele hacerse es oxidasa, es oxidasa (-) Prueba de la oxidasa La citocromo oxidasa es una enzima de la cadena de transporte de electrones en la ruta metabólica de obtención de energía de algunas bacterias. La prueba consiste en añadir sobre las colonias de la placa de agar nutritivo unas gotas de reactivo oxidasa (clorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina al 11% en agua) Si aparece una coloración azul-violeta el microorganismo es oxidasa positivo o EJ: Campylobacter, Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio. Si no aparece esta coloración azul-violeta es oxidasa negativo. o Salmonella es oxidasa negativo Desarrollo en medios de cultivo
AGAR MCCONKEY
Las sales biliares y cristal violeta inhiben significativamente a las bacterias gram positivas. Haciendo una comparación, la E. coli es una colonia lactosa positiva, la fermentación disminuye el pH alrededor de la colonia por lo que podemos ver a las colonias rojas mientras que las colonias de Salmonella son lactosa negativas por lo que se verán incoloras. Agar Salmonella Shigella Es un medio selectivo y de diferenciación para el aislamiento de bacilos entéricos patógenos, en especial los pertenecientes al género Salmonella, a partir de muestras clínicas (muestras fecales humanas).La diferenciación de los organismos entéricos se logra agregando lactosa en el medio. Resultado: Salmonella → Incoloro, generalmente con centro de color negro. Agar Sangre La mayoría de enterobacterias producen colonias grandes, grisáceas y lisas y esta no es una excepción. Las colonias de S. typhi son grisáceas que van de transparente a opacas. Agar XLD: Xilosa Lisina Desoxicolato Es de alta sensibilidad al igual que el SS (Salmonella-Shigella). Las colonias de Salmonella se ven rojas con centro negro. Se vuelven negros debido a la producción de sulfuro de hidrogeno. El desoxicolato del agar va a inhibir a los gram positivos. Agar Verde Brillante Es un medio de enriquecimiento altamente selectivo y diferencial para Salmonella (excepto la salmonella entérica serovar typhi y paratyphi). La lactosa y sacarosa actúan como hidratos de carbono fermentables, cloruro de sodio para mantener el balance osmótico y verde brillante como agente selectivo. Las colonias de salmonella se observan de color rosa, blanca o transparente sobre fondo rojo. Pruebas bioquímica s
AGAR TSI
(DIFERENCIAL)
Compuesto por 3 azúcares que son 10% lactosa, 10% sacarosa y 1% dextrosa/glucosa. En caso de Salmonella con cepas con resultado positivo a sulfuro de hidrógeno veremos que las colonias serán rosas con centro negro y el medio es de color rojo.
En el Agar Salmonella Shigella, Salmonella forma colonias con manchas negras. Este centro negro se debe a que durante su metabolismo produce hidrógeno sulfurado, y como el medio tiene hierro, se forma una sal de hierro que es de color negro. En el caso de la motilidad, el tubo de la derecha será el de Salmonella. En el MacConkey no usa lactosa. Por ello en el TSI, tampoco. Salmonella usa solo glucosa. Se diferencian en el SS. En caso de Shigella se forma centro negro por el sulfuro de hidrógeno, que con el hierro del medio precipita (H2S). El hidrógeno sulfurado reacciona con el hierro. Considerar que el segundo es de Shigella. El tercero, tiene arriba rojo, pero todo abajo está negro. Podría haber usado lactosa, sacarosa. Pero si en el MacConkey no usó lactosa, acá tampoco, y además ha formado H2S que reacciona con el hierro del TSI, y se forma la sal de hierro negra. Así se ve el tubo de TSI de Salmonella. Si es ácido poner A, si es alcalino poner K. Salmonella sería K/A H2S. Salmonella también tiene pruebas de aglutinación como Shigella. Ejemplos de pruebas de aglutinación: Del antígeno somático, flagelar, de virulencia de cápsula. GRUPO 4 Vibrio cholerae Algoritmo de diagnostico
- Características macroscópicas y microscópicas de la muestra
- Pruebas de orientación (Prueba oxidasa) y desarrollo de medios de cultivo (Agar TCBS, TTG, MacConkey)
- Pruebas bioquímicas: Agar KIA y TSI Agar LIA, Prueba del Indol, Crecimiento en NaCl, Test de descarboxilasa-hidrolasa, Ensayo de Voges-Proskauer Característi cas macroscópi cas de la muestra Características microscópicas Pruebas de orientación Prueba de la Oxidasa La prueba de oxidasa usa el reactivo de Kovac (una solución al 1% de N–tetrametil-p- dihidroclorofenilendiamina) para detectar la presencia de citocromo C en la cadena respiratoria de la bacteria; si el reactivo de la oxidasa es catalizado, se torna púrpura. La prueba de la oxidasa se puede hacer en papel de filtro o en un hisopo. Esta prueba se hace con crecimiento fresco de la superficie inclinada (cuña) del AIC o AHTA o cualquier otro medio no selectivo que no contenga carbohidratos; no se usa un crecimiento de agar tiosulfato, citrato, sales biliares y sacarosa [ATCSBS] porque puede producir tanto resultados falsos negativos como falsos positivos. No usa el asa de Nicromo para esta prueba, pues puede producir una reacción falsa positiva. Para los propósitos de control de calidad, los controles positivo y negativo se deben probar al mismo tiempo que se hace la prueba del aislamiento Método del papel de filtro humedecid o
- En una placa de Petri, añada a un pedazo de papel de filtro dos o tres gotas de reactivo de oxidasa de Kovac y deje que el papel absorba el reactivo; el papel de filtro debe estar húmedo (pero no mojado) después que ha absorbido el reactivo.
- Tome una porción de la colonia a probar de un medio no selectivo y frótela en el papel de filtro humedecido usando un asa de platino, un asa plástica, un hisopo estéril, un aplicador de madera estéril o un mondadientes estéril. (No use un asa de Nicromo).
- Si el aislamiento es V. cholerae , en 10 segundos debe darse una reacción positiva (púrpura) en la región donde el crecimiento ha sido extendido. Método del hisopo:
- Escoja con un hisopo las colonias sospechosas de una placa de cultivo no selectivo o de un crecimiento de una cuña de agar no
selectivo.
- Añada una gota del reactivo de oxidasa de Kovac al hisopo usando una pipeta de Pasteur.
- Si el aislamiento es V. cholerae, en 10 segundos habrá una reacción positiva (púrpura). Desarrollo en medios de cultivo Agar TCBS General EI agar con tiosulfato, citrato, sales biliares y sacarosa (TCBS) es el medio que se prefiere para el aislamiento de V. cholerae y se utiliza ampliamente en todo el mundo. EI agar TCBS se expende en el comercio y es fácil de preparar; no requiere esterilización en el autoclave y es diferencial y selectivo. Sin embargo, tiene una vida de almacenamiento relativamente corta una vez preparado (de 3 a 5 días), a menos que las placas se protegen cuidadosamente de la desecación. EI agar TCBS es verde cuando se prepara. EI crecimiento de un dia para otro (18 a 24 horas) de V. cholerae producirá colonias grandes (2 a 4 mm de diámetro), ligeramente aplanadas, amarillas, con el centro opaco y la periferia translúcida. EI color amarillo se debe a la fermentación de la sacarosa en el medio. Los microorganismos que no fermentan la sacarosa, como es el caso de V. pamhaemolyticus, producen colonias de color verde a azul verde. Las colonias sospechosas que se someterán a pruebas ulteriores deben sembrarse en un medio no inhibitorio, como agar gelatina, agar infusión de corazón (RIA) agar hierro de Kligler (KIA) o agar hierro con tres azúcares (TSI). Interpreta ción Microorganismos fermentadores de sacarosa: Colonias Amarillas Microorganismos no fermentadores de sacarosa: Color del color del medio, con centro verde Agar taurocolato-telurito-gelatina (agar TTG o modelo de Monsur) Gener al EI agar taurocolato-telurito-gelatina ('ITG) es un agar diferencial y selectivo ideado específicamente para el aislamiento de V. cholerall. Tiene una vida de almacenamiento relativamente larga después de preparado, y se pueden utilizar las colonias tomadas directamente del medio para efectuar las pruebas de la oxidasa y de aglutinación. EI crecimiento de un día para otro (18 a 24 horas) de V. cholerae en agar TTG se caracteriza por colonias pequeñas y opacas con el centro ligeramente oscuro. Como muchos miembros del género Vibrio tienen características similares en el agar TTG, se requieren pruebas adicionales (antisueros, pruebas bioquímicas o ambos) para identificar los microorganismos aislados en este medio. Interpreta ción AI cabo de 24 horas, el centro de la colonia se hace más oscuro y, al final, toda ella toma un color de "acero pavonado". Además del color oscuro, que se debe a la reducción del telurito, hay una zona opaca semejante a un halo alrededor de las colonias. EI efecto de halo, debido a la producci6n de la enzima gelatinasa, se puede intensificar mediante refrigeración breve (15 a 30 minutos) de la placa Agar Mac Conkey General Se utiliza mucho el agar de MacConkey(Para aislar especies de la familia Enterobacteriaceae), que también permite el crecimiento de algunas cepas de V. cholerae Interpreta ción Las colonias de este bacilo incubadas de un dia para otro en agar de MacConkey tienden a ser pequeñas o medianas (1 a 3 Mm) y por lo general se ven como lactosa negativas o ligeramente rosadas; con frecuencia recuerdan a las colonias de microorganismos que producen fermentación "tardía" o "Ienta" de la lactosa. Las colonias que presuntivamente correspondan a V. cholerae se resembrarán en medios no inhibitorios para efectuar pruebas adicionales. Pruebas bioquímica s Agar Hierro Tres Azucares (TSI) y Agar Kligler(KIA ) General EI agar hierro de Kligler (KIA) y el agar hierro de tres azucares (TSI) son medios selectivos que contienen carbohidratos y son de uso general en la microbiología de diagnóstico. Aunque se usan de modo parecido, contienen distintos carbohidratos. AGAR KIA Las reacciones de V. cholerae en KIA, que contiene glucosa y lactosa, son similares a las de los miembros de la familia Enterobacteriaceae que no fermentan la lactosa EI medio TSI, determina la capacidad de un organismo de atacar un hidrato de carbono especifico incorporado en un medio de crecimiento básico , con producción o no de gases , junto con la determinación de posible acido sulfhidrico. Interpretaci ón Agar General Mide la capacidad enzimática de un organismo para descarboxilar
Característ icas macroscóp icas de la muestra Las heces son muy abundantes (hasta varios litros por día), Acuosas Contienen una concentración de sodio >70 mmol/l y se caracterizan por un bajo valor de la brecha osmótica (<50 mOsm/l). Aunque se mantenga al paciente en ayunas no se reducen ni el número ni el volumen de las deposiciones (la diarrea despierta al paciente por la noche). Característ icas microscópi cas Presencia de Leucocitos: No hay presencia de leucocitos en las diarreas provocadas por Bacillus cereus Adoptan una coloración violeta (gram positiva) En las tinciones de Gram de fluidos corporales, B. cereus aparece recto o ligeramente curvado con extremos cuadrados dispuestos solos o en cadenas cortas. Las uniones entre los miembros de la cadena son claramente visibles. La tinción de Gram de B. cereus tomada de colonias de agar tiende a tener una apariencia bacilar más uniforme que varía en tamaño desde 3 por 0,4 micrones hasta 9 por 2 micrones. B. cereus presente en las secciones de tejido puede parecer largo y filamentoso. Las esporas no siempre son visibles en la tinción de Gram pero, cuando son aparentes, están ubicadas en el centro, no distorsionan la forma bacilar y tienen un aspecto claro. Bacilo grande (1 x 3-4 micras) Tiene forma de bastón alargado. Presentan flagelos distribuidos por su superficie En los cultivos se pueden apreciar como barras rectas. Se pueden encontrar de forma individual o formando cadenas cortas Pruebas de orientació n
CATALASA
Esta prueba facilita la detección de la enzima catalasa en las bacterias. También, es valiosa para diferenciar las bacterias aerobias y anaerobias obligadas, ya que generalmente se sabe que los anaerobios carecen de la enzima .Por ello, la prueba de catalasa es valiosa para diferenciar las cepas aerotolerantes de Clostridium, que son catalasa negativas, de Bacillus, que son catalasas positivas Procedimiento catalasa: Tomar una colonia aislada y suspender en una gota de solución de peróxido de hidrógeno al 3 % en un portaobjeto. Una reacción positiva se ve por la formación inmediata de burbujas de gas→ POSITIVO OXIDASA Se toma con un palillo grueso de madera una muestra bacteriana a partir de una colonia aislada proveniente de un cultivo de 24h La muestra se pone en contacto con la tira o disco impregnado. Se debe observar una coloración morada en un lapso no mayor a 30 segundos para que sea positivo, de lo contrario el resultado es negativo Desarrollo en medios de cultivo Agar selectivo o Se usa para satisfacer las necesidades nutricionales de Bacillus cereus o Hay que tomar en cuenta que esta bacteria es resistente a ciertas concentraciones de polimixina, la cual inhibe la flora acompañante. o Se usa el extracto y la peptona de carne para proporcionar nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales para el crecimiento de la bacteria. o El manitol es el hidrato de carbono fermentable que proporciona carbono y energía. o La polimixina B actúa como agente selectivo, el carácter diferencial lo confiere la actividad lecitinasa de B. cereus sobre la yema de huevo y su incapacidad para catabolizar el manitol. o Estas técnicas pueden aplicarse en alimentos, en heces y a aislamientos de B. cereus a partir de cultivo para determinar su toxigenicidad. Agar sangre Esta especia forma colonias betahemolíticas, grandes y planas con apariencia de vidrio esmerilado. Medio de Bcara Es un medio cromogénico selectivo y diferencial que facilita el crecimiento e identificación de B.cereus, inhibiendo el crecimiento de la flora acompañante. Garantiza rapidez y confiabilidad de los resultados. Rápida y fácil interpretación, requiere solo 24 horas de incubación. Es un método que ahorra costos y tiempo Las colonias de B. cereus cultivadas en MYP son rosadas y lecitinasas positivas, pero otras bacterias no se inhiben y pueden interferir con el aislamiento de B. cereus. Las colonias de B. cereus cultivadas en Bacara son de color rosa anaranjado y son lecitinasas positivas, pero
otros organismos están inhibidos. Pruebas bioquímica s B.cereus es un germen Voges-Proskauer-Positivo ; si aparece una coloracion rosa. B.cereus reduce los nitratos a nitrito → cuando el nitrato se reduce a nitrito; aparece una coloración anarajanda o rojiza en el transcurso de 10 minutos; si no aparece la coloracion en 15 minutos; se añade zinc en polvo; y si a los 10 minutos no se colorea consideramos la prueba como positiva. Producción de Lectinasa por bacillus cereus en agar yema de huevo. El microorganismo ha sido sembrado por estrias debajo del centro de la placa. o La prueba positiva para lectinasa está indicada por una zona opaca de precipitación alrededor del crecimiento bacteriano (flechas). Agar glucosado (AG) si aparece la coloración amarilla es positivo. Agar Citrato de Simmons : Se cultiva el microorganismo en agar citrato de Simmons. Este medio contiene citrato de sodio y fosfato de amonio como fuentes de carbono y de nitrógeno respectivamente, y azul de bromotimol, como indicador de pH. o Sólo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrán multiplicarse en este medio y liberarán iones amonio lo que, junto con la eliminación del citrato (ácido), generará una fuerte alcalinización del medio que será aparente por un cambio de color del indicador de pH, de verde a azul. o Las bacterias capaces de usar el citrato provocarán el cambio de color del medio de verde a azul intenso o B. cereus es positivo en agar citrato de simmons Agar urea de Christensen : Se cultiva el microorganismo en agar urea de Christensen. Este medio se complementa después del autoclavado con 50 ml/l de urea. Ésta será degradada por aquellos microorganismos capaces de producir la enzima ureasa. o Esta degradación produce amoniaco que hará variar el color del indicador de amarillo a rojo, poniéndose así de manifiesto la actividad ureasa. o Las bacterias que hidrolizan la urea hacen que el medio de cultivo tome color fucsia, debido a la alcalinización de este por producción de amonio, que manifiesta por un viraje del indicador de pH (rojo de fenol). o En b.cereus es variable. Bacillus cereus Forma esporas resistentes a diferencia de todos los anteriores. Normalmente se encuentran en alimentos secos donde puede resistir. Tener cuidado con alimentos secos, deshidratados, para niños, harinas, pastas, alimentos crudos. Tiene la toxina (enterotoxinas) Hay pruebas que detectan directamente a los genes, y pruebas de aglutinación directas y ELISA para la enterotoxinas
