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CLASIFICACIÓN DESCRIPCIÓN ENVASE
1. SANGRE
Sangre y sus componentes, únicamente en su forma líquida así como sus derivados no comerciales (hemoderivados).
Recipientes herméticos. Color: Rojo.
2. CULTIVOS Y CEPAS
Cultivos de agentes biológico infecciosos generados en procedimientos de diagnóstico, investigación, producción y control. Utensilios desechables que tengan contacto con los cultivos.
Bolsas de polietileno. Color: Rojo.
3. PATOLÓGICOS
Tejidos y órganos extirpados durante necropsias y cirugías. Muestras biológicas para distintos análisis, excluyendo orina y excremento. Cadáveres y partes de animales utilizados en centros de investigación.
Bolsas de polietileno (sólidos). Recipientes herméticos (líquidos). Color: Amarillo.
4. NO ANATÓMICOS
Recipientes desechables que contengan sangre líquida. Materiales de curación empapados de sangre u otros fluidos corporales (sinovial, líquido pericárdico, líquido pleural, líquido céfalo- raquídeo o líquido peritoneal). Materiales desechables que estuvieran en contacto con secreciones de pacientes sospechosos a tuberculosis o alguna otra enfermedad infecciosa. Materiales absorbentes utilizados en jaulas de animales en centros de investigación.
Bolsas de polietileno (sólidos). Recipientes herméticos (líquidos). Color: Rojo.
5. PUNZOCORTANTES
Los que han estado en contacto con humanos o animales o sus muestras biológicas. tubos capilares, navajas, lancetas, agujas de jeringas desechables, agujas hipodérmicas, de sutura, de acupuntura y para tatuaje, bisturís y estiletes de catéter
Recipientes rígidos de polipropileno. Color: Rojo.
Tarea 1
NOM- 087 - SEMARNAT-SSA1- 2002
OCHOA MANUEL YESSICA SECCIÓN: 11 MATRÍCULA: 1900029E
Fecha: 02 de octubre de 2021 Hora: 23 :59 hrs Sección: 11
CLASIFICACIÓN DESCRPCIÓN PERIODO DE RECOLECCIÓN
NIVEL I
Unidades hospitalarias de 1 a 5 camas e instituciones de investigación. Laboratorios clínicos y bancos de sangre con 1 a 50 muestras al día. Unidades hospitalarias psiquiátricas. Centros de toma de muestras para análisis clínicos.
Máximo 30 días. No requiere un lugar específico para almacenamiento temporal.
NIVEL II
Unidades hospitalarias de 6 hasta 60 camas. Laboratorios clínicos y bancos de sangre que realicen de 51 a 200 muestras al día. Bioterios que se dediquen a la investigación con agentes biológico-infecciosos. Establecimientos que generen de 25 a 100 kilogramos al mes de RPBI.
Máximo 15 días. Requiere lugar específico para almacenamiento temporal.
NIVEL III
Unidades hospitalarias de más de 60 camas. Centros de producción e investigación experimental en enfermedades infecciosas. Laboratorios clínicos y bancos de sangre que realicen más de 200 muestras al día. Establecimientos que generen más de 100 kilogramos al mes de RPBI.
Máximo 7 días. Requiere lugar específico para almacenamiento temporal.
Gavilán, I., Alcántara, V., Cano, S. & Gavilán, A. (2014). Guía técnica de acción para
residuos biológicos. Universidad Nacional Autónoma de México. [Archivo PDF]
https://tucomunidad.unam.mx/galeria/residuos_biologicos.pdf
Fecha: 02 de octubre de 2021 Hora: 23 :59 hrs Sección: 11
Tamaño Se describe en milímetros y puede variar desde colonias pequeñas que miden algunos milímetros hasta colonias con 10 mm o más.
Forma Pueden ser circulares, filamentosas , regulares, puntiformes, entre otras.
Bordes Puede ser entera, ondulada, lobulada, dentada, filamentosa y arrisada.
Elevación Puede ser plana, convexa, pulvinada, umbonada, crateriforme o umbilicada.
Superficie Puede ser lisa, rugosa o granular.
Aspecto Puede ser húmedo o seco.
Luz reflejada Puede ser brillante o mate.
Luz transmitida Puede ser transparente , traslúcida u opaca.
Producción de pigmento Algunas bacterias producen pigmento soluble en agua, que puede difundir el medio de cultivo.
Consistencia Dura, suave, butirosa, mucoide o friable.
Olor Frutal o putrefacto.
Morfología colonial
Clasificación según su
Bibliografías
Canese, A. & Canese A. (2012). Manual de MICROBIOLOGÍA y PARASITOLOGÍA
MÉDICA. General Díaz 270, Asunción, Paraguay.
Madigan, M., Martinko, J., Bender, K., Buckley, D. & Stahl, D. (2015). BROCK Biología de los
microorganismos. PEARSON.
Vargas, T. & Kuno, A. (2014). Morfología bacteriana. Revista de Actualización Clínica. [Archivo
PDF]. http://metabase.uaem.mx/bitstream/handle/123456789/1466/280_2.pdf?sequence=
Vega, R., Guzmán, J., Torres, M., Suárez, S., Díaz, R., Ayala, J., Figueroa, P. (2016). MANUAL
DE PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA GENERAL. Facultad de Químico Farmacobiología UMSNH.
[Archivo PDF]. https://drive.google.com/drive/u/0/my-drive
Siembra y desarrollo en diferentes
medios de cultivo
Introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y multiplicación. Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento.
Consiste en
Se efectúa mediante 5 reglas
Que se efectúen asépticamente.
Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados.
Que se realicen solo los manipuleos indispensables.
Que se trabaje fuera de toda corriente de aire.
De ser posible utilizando un mechero o un flujo laminar.
Existen diferentes tipos de siembras
Medios líquidos^ Medios^ sólidos^ Medios semisólidos
- Siembra por inmersión. Se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Se utiliza para microorganismos aerobios.
- Siembra en doble capa. Se procede de la misma manera que por inmersión. Solidificado el medio se vierte una cantidad de medio para cubrir la capa anterior. Se utiliza para microorganismos anaerobios facultativos y microaerofílicos.
- Siembra en superficie. se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo. Con una espátula de Drigalsky, se extiende el inóculo hasta su absorción total por el medio de cultivo. Se usa para microorganismos aerobios estrictos.
- Siembra en agar en tubo inclinado o bisel. En este caso se colocan 5 ml de medio de cultivo fundido y estéril, se inclina el tubo y se deja enfriar.
Se realiza en tubos, frascos o Erlenmeyer. Antes y después de realizada la siembra, se debe pasar la boca del recipiente sin tapa por la llama del mechero.
En los cultivos líquidos no tiene lugar la formación de colonias.
El aislamiento se puede lograr directamente a partir de una muestra cuando los microorganismos están en una proporción adecuada.
Se utilizan tubos sin inclinar, se siembra por picadura o punción utilizando un hilo. Contiene menor porción de agar que los medios sólidos. El medio queda inoculado al introducir el hilo en profundidad, sin tocar el fondo del tubo, retirándolo por la misma trayectoria utilizada al realizar la picadura.
Existe un tipo de siembra más importante
Características y propiedades
Que se define como como La técnica con la cual observamos objetos demasiado pequeños por medio de un microscopio en una imagen aumentada.
Se puede observan en
Microscopio de luz o campo claro
Microscopio de campo oscuro
Microscopio de contraste de fases
Microscopio de fluorescencia
Microscopio Electrónico
Usa luz visible, tiene un alcance de 0.23 μm y se muestra sobre un fondo brillante.
Se utiliza para observar tinciones y características morfológicas generales de bacterias, hongos, algas y protozoos.
Utiliza luz visible difractada y se observa la muestra sobre un fondo oscuro.
Se utiliza para observar microorganismos de difícil tinción y para determinar la motilidad de algunos microorganismos, así como características morfológicas especiales.
Utiliza luz difractada y se observa la muestra con diferentes grados de brillo y contraste.
Se utiliza para observar estructuras internas de las células y organismos vivos sin teñir.
Utiliza luz ultravioleta y obtenemos una muestra fluorescente sobre un fondo no fluorescente.
Se utiliza para observar en los métodos de inmunofluorescenci a y auramina.
Utiliza un haz de electrones y tiene un alcance de estructuras menores a 0. μm.
Se utiliza para observar virus y ultraestructuras.
Los cuidados que deben tener son
- Mantenerse en un lugar estable
- Se cubre cuando no se usa
- Sentarse para observar
- Observarse con los 2 ojos abiertos
MICROSCOPIO
- La imagen que el microscopio genera es virtual, invertida y aumentada.
- El microscopio óptico tiene 3 sistemas: mecánico, óptico y de iluminación.
- También tiene 3 objetivos: seco débil 10x, seco fuerte 40x e inmersión 100x.
LENTES
- Apertura numérica: Cantidad de luz que captura una lente para formar imágenes
- Límite de resolución
- Distancia mínima a la que 2 objetos están separados y se ven.
Se analizan observándose a simple vista o con la ayuda de la microscopía
Pueden tener
Que son
Tipos
BIBLIOGRAFÍA:
- Bernaro. (2020). Microbiología General. “Siembra, Aislamiento e Identificación de
Microorganismos”. Recuperado 17 de octubre de 2021, de
https://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/202403/mod_resource/conte
nt/1/2020%20TP2%20BIOQ%20Y%20LCTA.pdf
- Equipos y Laboratorios de Colombia. (2011). “Técnicas Básicas para el Cultivo de
Microorganismos: Siembra y Estudio de Bacterias”. Recuperado 1 7 de octubre de
2021, de https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articulo-ampliado/tEcnicas-
bAsicas-para-el-cultivo-de-microorganismos:-siembra-y-estudio-de-bacterias
- Fernández, J.L., FISICALAB. (s.f.). “Aberraciones Ópticas”. Recuperado 17 de octubre
de 2021, de https://www.fisicalab.com/apartado/aberraciones-opticas
- Montalvo Arenas, C.E. (2010). “Microscopía”. Recuperado 1 7 de octubre de 2021, de
http://bct.facmed.unam.mx/wp-content/uploads/2018/08/2_microscopia.pdf
- Notario Collado, B. CENIEH. (2020). “Microscopía”. Recuperado 1 7 de octubre de
2021, de https://www.cenieh.es/infraestructura/laboratorios/microscopia
- Sánchez Lera, R.M., & Oliva García, N.R. (2015). “Historia del Microscopio y su
Repercusión en la Microbiología”. Recuperado 17 de octubre de 2021, de
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S172 7 - 81202015000200010
Aberraciones
Las imperfecciones que se presentan en un sistema óptico
Esféricas: al concentrarse los rayos no lo hacen todos en el foco.
Geométricas: incluyen efectos tales como astigmatismo, coma, distorsión y curvatura del campo.
Cromáticas: distintos colores se refractan con distintos ángulos debido a la dispersión.
- Realizar una extensión con el material a estudiar en un portaobjetos.
- Fijar el frotis pasando la muestra de 3-4 veces por encima de la llama del mechero.
- Cubrir la muestra con Cristal Violeta y esperar 1 min.
- Lavar con agua destilada.
- Cubrir la preparación con Lugol y dejar actuar 30 segundos.
- Lavar con agua destilada.
- Decolorar con alcohol-cetona gota a gota hasta que salga el colorante.
- Lavar con agua destilada.
- Añadir el colorante de contraste, safranina y dejar actuar 1 min.
- Lavar con agua destilada y dejar secar al aire.
- Observar al microscopio.
- Realizar una extensión de la muestra y dejar secar al aire en un portaobjetos.
- Fijar muestra pasando de 3- 4 veces por encima de la llama del mechero.
- Cubrir por completo la superficie de la muestra con fucsina fenicada.
- Calentar suevamente la muestra hasta la emisión de vapores.
- Lavar con agua destilada.
- Decoloración con alcohol-ácido 3 minutos.
- Lavar con agua destilada.
- Añadir el colorante de contraste, azul de metileno por 1 minuto.
- Lavar con agua destilada.
- Dejar secar y observar al microscopio.
Gram positivas.
Gram negativas.
Mantienen el
color azul-
violeta.
Se tiñen de un
color rojo-rosa.
- _Staphylococcus aureus.
- Streptococcus pyogenes._
- Escherichia coli. - Pseudomonas aeruginosa.
- Mycobacterium tuberculosis. - Mycobacterium phlei.
BAAR (+)
Mantienen un color rosa.
BAAR (-)
Se tiñen de color azul. se interpreta como
se interpreta como
por ejemplo
por ejemplo
Estas permiten determinar las
características metabólicas de
las bacterias objeto de
identificación. Algunas de
estas pruebas son técnicas
rápidas, ya que evalúan la
presencia de una enzima
preformada y su lectura varía
entre unos segundos hasta
unas pocas horas. Otras
pruebas requieren para su
lectura el crecimiento del
microorganismo con una
incubación previa de 18 a 48h;
a este grupo pertenecen la
mayoría de las pruebas que
detectan componentes
metabólicos o aquellas que
determinan la sensibilidad de
un microorganismo a una
sustancia dada tras cultivo en
medios de identificación que
contienen el sustrato a
metabolizar. (Fernández, A.,
García, C., et al. 2010. p.8)
Pruebas bioquímicas
para el metabolismo
del carbono.
Pruebas bioquímicas
para el metabolismo
del nitrógeno.
TSI
CITRATO
MALONATO
RM-VP
Identifica la fermentación de glucosa (anaerobia), lactosa y sacarosa (aerobias) hasta la producción de CO 2 e identifica a las
bacterias fijadoras de hierro con la producción de Sulfuro de hierro, tras reaccionar los iones Fe 3+^ con el H 2 S. Contiene: Peptonas,
NaCl, lactosa, sacarosa, glucosa, sulfato de hierro y amonio, tiosulfato de sodio y Rojo de fenol como indicador. Resultados. Glucosa
(+): Color amarillo en el fondo. Sacarosa y Lactosa (+): Color amarillo en el pico. (CO 2 +): Burbujas o ruptura del medio. (Fijación
de Fe +): Precipitado negro. Todos los productos poseen un pH ácido.
Comprueba la capacidad de un microorganismo para utilizar Citrato de Sodio como única fuente de carbono (enzima citrato
permeasa) produciendo carbonatos y bicarbonatos alcalinos. Contiene Na 3 C 6 H 5 O 7 , NaCl, K 2 HPO 4 , (NH 4 ) H 2 PO 4 , MgSO 4.
Indicador: Azul de bromotimol. Resultado (+): Coloración azul intenso pH alcalino. Resultado (-): Permanencia del color verde
original del medio pH ácido.
Evidencia aquellas bacterias que son capaces de utilizar malonato de sodio como única fuente de carbono dando productos
alcalinos. Contiene sulfato de amonio, fosfato dipotásico, fosfato monopotásico, cloruro de sodio, malonato de sodio y dextrosa.
Indicador: Azul de bromotimol. Resultado (+): Coloración azul claro o intenso pH alcalino. Resultado (-): Sin alteración de color
(verde) o coloración amarilla pH ácido.
Comprueba si el microorganismo en estudio fermenta la glucosa por la ruta ácido mixta (productos ácidos) o por la ruta butilén
glicólica (productos neutros). Contiene pluripeptona, glucosa y fosfato dipotásico. Reveladores: Reactivo Rojo de metilo (+): anillo
rojo pH <4.4. Reactivo Voges Proskauer (+): anillo rosado-violáceo pH >4.4. (RM+) = (VP-) (RM-) = (VP+)
Es útil para la diferenciación inicial de especiesproteus margonella y providencia de otros bacilos gram negativos. Se usa para ver
la capacidad de un microorganismo para desaminar la fenilalanina a ácido fenilprúvico. Indicador: Cloruro férrico. Resultado (+):
Formación de un quelato de color verdoso con un pH ácido. Resultado (-): Sin alteración de color.
Utilizada para la detección de cultivos deSalmonella spp; basado en la descarboxilación y desaminación de la lisina, como así
también la producción de sulfuro de hidrógeno (H2S). Indicador: purpura de bromocresol, su color es amarillo cuando el pH es
igual o menor a 5.2 y violeta cuando el pH es igual o mayor a 6.8. Resultados de descarboxilación de la lisina (+): superficie alcalina
(K) / profundidad alcalina (K) (pico violeta/ fondo violeta). Resultado (-): superficie alcalina (K) / profundidad ácida (A) pico
violeta / fondo amarillo). Resultados de desaminación de la lisina (superficie +): superficie rojiza / profundidad ácida (amarillo).
Resultado de producción de H2S (+): el medio de cultivo presenta color negro (especialmente en el límite entre la superficie y
profundidad). Resultado (-): el medio de cultivo permanece sin cambio de color.
Medio de cultivo altamente nutritivo por la presencia de extracto de levadura, peptona y tripteína. La tripteína aporta gran cantidad de triptofano, sustrato de la enzima triptofanasa a partir del cual se forma indol que puede ser revelado con el reactivo de Ehrlich o de Kovac´s por la formación de un compuesto de color rojo. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la detección de la enzima ornitina decarboxilasa, el púrpura de bromocresol es el indicador de pH, que en medio alcalino es de color púrpura y en medio ácido es amarillo. Los microorganismos fermentadores de glucosa acidifican el medio de cultivo y producen viraje del color púrpura al amarillo. Las condiciones de acidez son favorables para la actividad enzimática ornitina decarboxilasa, que actúa sobre la ornitina generando putrescina, con la consecuente alcalinización del medio de cultivo y viraje al color púrpura.
Puede usarse para la determinación de la actividad de urea deEnterobacterias, así como de microorganismos de las familias deBrucella, Bacilos,Micrococos,Micobacterias yProteus. Está especialmente recomendado para diferenciar entre los miembros del géneroProteus y aquellos que son del género deSalmonella yShigella. Cuando los organismos utilizan urea, se genera amoníaco durante la incubación, lo cual
hace que la reacción de estos medios sea alcalina. Los tubos ureasa positivos hacen que el indicador de fenol tome un color rojo oscuro-violáceo
(alcalinización). Así es como la producción de ureasa puede detectarse mediante un cambio en el indicador rojo fenol. Indicador: El rojo de
fenol; la producción de ácido se ve como cambio del color de rojo anaranjado a amarillo, en tanto que la alcalinización se observa como viraje
hacia el rojo fucsia. Resultado (+): Microorganismos que hidrolizan la urea desarrollo y viraje del indicador de pH a color rojo fucsia. Resultado
(-): Microorganismos que no hidrolizan la urea no hay viraje del indicador de pH, o cambio hacia el amarillo pálido.
FENILALANINA
LIA
UREA
MIO
MOVILIDAD
INDOL
ORNITINA
Para determinar si un microorganismo es móvil o inmóvil, las bacterias son móviles por medio de flagelos. Resultado (+): microorganismos móviles que emigraron desde la línea de siembra y difunden en el medio lo que produce turbidez pueden mostrar estrías de crecimiento velloso. Resultado (-): crecimiento bacteriano a lo largo de la línea de siembra (1,2) el medio que lo rodea permanece claro.
La actividad de la enzima ornitina decarboxilasa las peptonas y el extracto de levadura aportan aminoácidos y nutrientes esenciales, la dextrosa constituye una fuente de energía. La actividad de la ornitina decarboxilasa se observa como un viraje hacia el color púrpura (resultado positivo), en tanto que la ausencia de la enzima produce un viraje hacia el color amarillo (resultado negativo).
Funciona para determinar la capacidad de un microorganismo para separar en dos a partir del triptófano. Resultado (+): En segundos aparece un anillo rojo (fucsia brillante) en la interfase del medio con la porción inferior de la fase alcohólica sobre el medio. Resultado (-): No hay ningún desarrollo de color en la capa de alcohol o aparece un anillo turbio; toma el color del reactivo Kovac’s o de Ehrlich (amarillo). Resultado variable: Color anaranjado en la superficie del medio, debido al escatol un compuesto metilado que puede ser precursor de la formación de indol.
TINCIÓN DE ESPORAS
(diagrama de bloques)
Secar y fijar al calor un frotis
Cubrir el frotis con Verde de Malaquita al 5%
Hervir por 3 minutos
Dejar secar
Lavar con agua por 30 segundos
Cubrir con Safranina al 0.5% por 30 segundos
Lavar y dejar secar al ambiente
Observar al microscopio
Procedimiento de Kirby – Bauer
(diagrama de bloques)
Tomar con el asa bacteriológica una colonia aislada de la cepa
pura
Prepara una suspensión con caldo Mueller Hinton
En caso de que se trate de una suspensión de microorganismos:
Gram negativos, se incuba por un lapso de 1 a 2 horas a 37°C
Gram positivos, no requerirá de incubación
Ajustar la turbidez del tubo 0.5 de la escala de Mc Farland. (1 x 108 UFC/ml)
Introducir un hisopo en el caldo Mueller Hinton
Eliminar el exceso de líquido
Inocular la placa de Petri con el hisopo toda la superficie del medio
con una estría masiva
Para preparar el inoculo:
Para la difusión del antibiótico en agar empleando sensidiscos:
Pasar el hisopo por la periferia de la placa con gelosa
Dejar secar la superficie de la placa
Colocar los discos de antibióticos con una pinza desinfectada
Atemperar los discos de antibióticos
Tomar los discos con las pinzas en forma aséptica
Aplicar el disco en el agar haciendo presión con la pinza
Incubar a 37°C por 24 horas
Medir el diámetro en las zonas de inhibición
buscar el resultado en la tabla con el diámetro y el nombre del antibiótico
Reportar observaciones y resultados
