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3. Pruebas bioquímicas: con fotos, nombre de la prueba, positivo y negativa, qué microorganismos se pueden ver en cada uno. Ensayo del Rojo de Metilo La prueba del rojo de metilo es una prueba de laboratorio utilizada en microbiología para determinar la capacidad de un microorganismo para llevar a cabo la fermentación de glucosa. En esta prueba, un indicador llamado rojo de metilo se añade a un cultivo y se observa un cambio de color. - Si el medio se vuelve rojo brillante, indica que el microorganismo es capaz de producir grandes cantidades de ácido pirúvico cuando fermenta la glucosa. Esto es típico de ciertas bacterias, como las enterobacterias. - Si el medio se vuelve amarillo, significa que el microorganismo no produce grandes cantidades de ácido. En cambio, estos producen acetoína y butanodiol Voges-Proskauer El ensayo de Voges-Proskauer se centra en la capacidad de un microorganismo para producir ácido 2,3-butanodiol (diacetilo) como producto de fermentación de glucosa y de la oaxidacion de la acetoína. Para realizar la prueba se añade una solución de reactivo llamada reactivo A y reactivo B al cultivo. El reactivo A es alfa-naftol y el reactivo B es KOH (hidróxido de potasio al 40%).Luego esperamos de 10-15 minutos - Si la bacteria produce ácido 2,3-butanodiol, los reactivos A y B reaccionarán con él, generando un compuesto rojo-rosado denominado "Voges-Proskauer positivo". Esto indica que el microorganismo tiene la capacidad de llevar a cabo la fermentación de glucosa para producir ácido 2,3-butanodiol. Esta prueba es útil para diferenciar: Echerichia Coli (rojo metilo positivo se mantiene rojo ) de klebsiela (rojo metilo negativo se torna amarillo - naranja )
- Si no hay cambio de color se denomina "Voges-Proskauer negativo " Prueba de la Urea La prueba de urea es un ensayo de laboratorio utilizado para evaluar la capacidad de una bacteria de hidrolizar la urea. La urea es un compuesto que contiene nitrógeno y es un producto de desecho del metabolismo de las proteínas. En esta prueba, se emplea un medio de cultivo especial llamado medio de urea para determinar si una bacteria produce una enzima llamada ureasa.Si la bacteria produce ureasa, esta enzima hidroliza la urea, dividiéndola en amoníaco y dióxido de carbono.La presencia de amoníaco aumenta el pH del medio, volviéndolo alcalino.Se añade un indicador de pH al medio, generalmente rojo de fenol, que cambia de color de amarillo (ácido) a rosa o rosa oscuro (alcalino) cuando el pH aumenta.
- El cambio de color del indicador hacia rosa oscuro o fucsia indica un resultado positivo para la prueba de urea, lo que significa que la bacteria produce ureasa y es capaz de hidrolizar la urea.
- Si no se produce un cambio de color y el medio permanece amarillo, se considera un resultado negativo. Esta prueba es útil para diferenciar: Echerichia Coli ( Voges-Proskauer positivo, da un complejo rojo) de klebsiela (Voges-Proskauer negativo n no hay cambio de coloración )
Ácido sulfhídrico: A partir del tiosulfato de sodio los microorganismos pueden generar ácido sulfhídrico que reacciona con el hierro presente formán- dose un compuesto de color negro. Agar kliger Contiene dls azúcares la glucosa ( en la parte de abajo ) y la lactosa ( en la parte de arriba ) Si el microorganismo fermenta da un color amarillo y representa la acidez Si el microorganismo no fermenta da un color rojo que representa alcalinidad Es útil para identificar bacterias como E- coli son indol positivo por esta razón forman un anillo rojo Es útil para comparar la presencia de Salmonella (positivo, da una coloración negra. También se puede evaluar la motilidad debido a que se observa turbidez
Estría ácida / fondo ácido – amarillo – amarillo Existe fermentación tanto de la glucosa como de la lactosa Microorganismo: E – coli Estría alcalina / fondo alcalino No hay fermentación ni de glucosa ni de lactosa Microorganismo: Seudomona aeruginosa
decarboxilar la lisina, un aminoácido. Esta prueba se realiza utilizando un medio de cultivo especial llamado medio de lisina. Si la bacteria posee la enzima lisina descarboxilasa, la bacteria metabolizará la lisina y producirá cadaverina, un compuesto alcalino. Esto aumentará el pH del medio, volviéndolo alcalino y cambiando el indicador de color.El cambio de color del indicador de pH hacia el alcalino (a menudo de púrpura a rojo) indica un resultado positivo para la prueba de la lisina, lo que significa que la bacteria tiene la capacidad de decarboxilar la lisina. Citrato La prueba del citrato es una prueba bioquímica utilizada en microbiología para evaluar la capacidad de una bacteria para utilizar el citrato como fuente de carbono. Si la bacteria posee la enzima citrato permeasa, puede tomar el citrato del medio y utilizarlo como fuente de carbono. A medida que la bacteria utiliza el citrato, alcaliniza el medio debido a la producción de amoníaco a partir de las sales de amonio. Esto provoca un aumento del pH y un cambio en el indicador de pH en el medio, generalmente de verde a azul. El cambio de color del indicador de pH hacia azul indica un resultado positivo para la prueba del citrato, lo que significa que la bacteria tiene la capacidad de utilizar el citrato como fuente de carbono. Prueba lisina es útil para la diferenciación de Edwardsiella y Salmonella ( son positivas por lo que dan una coloración púrpura ) de Citrobacter (negativo no cambia de coloración ) Enterobacter aerogenes (+) de Enterobacter cloacae (-) y Enterobacter agglomerans (-) Es útil para el diagnóstico de : Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Citrobacter y algunas especies de Salmonella.( son positivas producen una coloración azul verdosa )
Malonato Presenta el mismo fundamento que el citrarto ( se diferencia en que es un medio líquido y se evalúa la capacidad de utilizar el malonato como fuente de carbono Fenilalanina. La prueba de la fenilalanina es una prueba bioquímica utilizada en microbiología para identificar y caracterizar bacterias, especialmente para evaluar la capacidad de una bacteria para desaminar o metabolizar la fenilalanina, un aminoácido. El medio de fenilalanina contiene fenilalanina y un indicador de pH. Si la bacteria posee la enzima fenilalanina desaminasa, puede desaminar la fenilalanina, lo que produce ácido fenilpirúvico y amoníaco. Esto acidifica el medio y cambia el indicador de color. El cambio de color del indicador de pH hacia un pH más ácido(verde) en presencia de 5 gotas de Fe3CI indica un resultado positivo para la prueba de la fenilalanina, lo que significa que la bacteria tiene la capacidad de desaminar la fenilalanina.
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