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Investigación:
Análisis por Microscopia Electrónica de
Barrido.
“ Micorrizas Huxtable del Bosque
Tropical Ecuatoriano”
El estudio se realizó en el Laboratorio de la Plataforma Científica de Microscopia Electrónica y Confocal del Instituto Nacional de Investigación en Salud Pública “Leopoldo Izquieta Pérez” (INSPI) en Guayaquil.
RESUMEN
Las micorrizas constituyen una importante y especial relación de simb iosis que se presenta como fenómeno natural en la mayoría de las raíces de plantas vasculares y hongos del suelo, que al penetrar en raíces resultan beneficiadas porque, reciben de la planta el suministro de carbohídratos.
Con fines de Investigación se realizó el análisis por Microscopia Electrónica de Barrido (MEB-SEM) con aislamiento de muestras provenientes de FERBIOHUX DEL ECUADOR. Planta N°1 Alto Tambo-San Lorenzo, Esmeraldas. Planta N° Pimán Chiquito, Ibarra, Imbabura. Planta N°3 Juncal- Chalguayacu Pimampiro, Imbabura-Ecuador. Fertilizantes Bioquímicos Huxtable, Micorriza Sólida y Micorriza Liquida VAM, del producto basado en el cultivo ordinario de micorrizas del bosque tropical Ecuatoriano, para determinar y caracterizar la morfología del tipo de hongo que existe en dicho producto, que se lo utiliza para fines comerciales en el campo de las flores y del banano.
METODOS DE PROCESAMIENTO; se aplicaron técnicas especiales para Microscopia Electrónica de Barrido. 1.- FIJACIÓN: Gluteraldehido 3%. 2.- ENJUAGUES BUFFER .3.- FIJACIÓN TETRAOXIDO DE OSMIO 4.-SECADO POR CONGELACIÓN. 5.- MONTAJE Y PEGAMENTO. 6 .- RECUBRIMIENTO CON “ORO”, veinte segundos descarga, fenómeno “sputtering”. Se utilizó para su observación el Microscopio Electrónico de Barrido JEOL_JEM JSM 5310.
RESULTADOS DE INVESTIGACION:
Caracterización morfológica por microscopia electrónica de barrido, del tipo ectomicorriza “micorriza ectotrofica” hifas, cordon miceliar – esporas - ectoendomicorrizas: - micelios, conidias.
Palabras clave : MICORRIZAS, BOSQUE ECUATORIANO, MICROSCOPIA ELECTRONICA.
SUMMARY
Mycorrhizal constitute an important and special symbiotic relationship that occurs as a natural phenomenon in most roots of vascular plants and soil fungi, which once penetrated into roots are benefited because they receive the supply of carbohydrates from the plant.
For research purposes, the analysis by Scanning Electron Microscopy (SEM-SEM) with isolation of samples from FERBIOUX DEL ECUADOR was performed. Plant N ° 1 AltoTambo-San Lorenzo, Esmeraldas. Plant N ° 2 Pimán Chiquito, Ibarra, Imbabura. Plant N° 3 Juncal-Chalguayacu Pimampiro, Imbabura
- Ecuador. Huxtables Biochemical Fertilizers, Solid Mycorrhiza and VAM Liquid Mycorrhiza of the product based on the ordinary culture of mycorrhizal of the tropical forest of Ecuador to determine and characterize the morphology of the type of
INTRODUCCION
El presente estudio preliminar muestra resultados interesantes obtenidos por análisis en el Microscopio Electronico Barrido- Scanning (MEB-SEM).
MATERIALES y METODOS Fertilizantes Bioquímicos Huxtable. Micorriza Sólida que consiste en “arcilla” color café, con aspecto de gránulos en polvo y Micorriza Liquida VAM, que consiste en abono vivo, 100% natural y ecológico proveniente de nuestros bosques de árboles nativos, basado en el cultivo ordinario de micorrizas del bosque tropical Ecuatoriano, que se lo utiliza en el campo de las flores y del banano. De los sitios 1.AltoTambo-San Lorenzo, Esmeraldas. 2 Pimán Chiquito, Ibarra, Imbabura. 3 Juncal-Chalguayacu Pimampiro, Imbabura de la República del Ecuador. El método de inicio utilizado, consistió en colocar dentro de Tubos Falcón la arcilla en polvo granulada, mezclado con H2O, se procedió a la suspensión y centrifugación a 2000 rpm., del
Fertilizante precipitándolo por 3 ocasiones, la arcilla expandida de color café ocre, eliminándolo, poco a poco, realizando el método de limpieza mediante enjuagues con H2O destilada.
Se continuó con técnicas especiales PROCESAMIENTO MEB – SEM aplicando los siguientes pasos: 1.- FIJACIÓN: Gluteraldehido al 3% 2.- ENJUAGUES BUFFER por 3 ocasiones, cada
enjuague, durante15 minutos. 3.- FIJACIÓN OSO4 - TETRAOXIDO DE OSMIO, 40 minutos, a temperatura ambiente. 4.- ENJUAGUES H2O DESTILADA 3 veces, cada enjuague dejandolo 15 min. 5.- SECADO POR CONGELACIÓN, en tert-Butanol a 25 Grados de Temperatura 70% durante 1 Hora 80% 1 Hora 90% 1 Hora 100% puro. 1 Hora Aplicable para congelado seco de espécimen en SEM.
6. MONTAJE Y PEGAMENTO de las muestras. El espécimen seco, se procedió a montarlo sobre una barra de metal, adjuntarle pegamento y cemento. 8.- RECUBRIMIENTO CON METAL PESADO “ORO”, durante veinte 20 segundos de descarga, con el fenómeno “sputtering”, para aumentar la emisión secundaria de electrones. Lo que permitirá durante la observación en MEB -SEM, que los átomos expulsados del metal sean depositados sobre la superficie del espécimen. Se realizaron adicionalmente comparaciones observaciones en microscopio de Luz, Polarización.
9.- OBSERVACIÓN EN MEB-SEM.
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO JEOL_JEM JSM 5310.
RESULTADOS
Evidenciamos con microfotografías de luz-Polarización y Electrónica de Barrido.
Foto 3.- MEB-SEM. Componentes arcilla expandida mezclado con perlita.
Foto 4.- Análisis con Microscopio Polarización , la misma muestra 3, pero usando “almidón” comparado cristales, perlita, componentes de producto biológico micorriza.
Foto 4.1.- Magnificado. Análisis con Microscopio Polarización, la misma muestra, usando “almidón” comparado cristales, perlita y componentes de producto biológico micorriza.
Paso seguido se procede a inocular, Método de cultivo, Agar Nutriente. Misma muestra 3. Pero se inocula con Método de Cultivo, Agar Nutriente.
Resultado: Presencia de colonias. Se toma parte y se analiza en SEM en diferentes magnificaciones que van desde baja magnificación poco a poco aumentando magnificaciones hasta conseguir la caracterización morfológica, colonia de hongos.
Foto 5.- Microscopia de Luz: Nuevo Cultivo, en Agar Nutriente. Colonia de hongos. Contaminación en la periferia.
Foto 8. Microscopia Electrónica de Barrido-MEB-SEM, con magnificación, (comparado foto 7) con estructura intermedia entre Ectomicorrizas y Endomicorrizas.
Foto 9.-Microscopia Electrónica de Barrido MEB-SEM , CON MAGNIFICACION. EN MEDIOS DE CULTIVO DETALLES DEL MICELIO Y CONIDIAS DE ECTOMICORRIZAS, (MICORRIZAS ECTOTROFICAS). Caracterización morfologica Microconidias.
Foto 10.- Microfotografía: Medio de Cultivo SABOURAND (incluyendo glucosa 40%). Tiempo: 3 días. Temperatura: 24 C° Resultado: Colonias en Agar Nutriente.
Foto11.- Microscopia Electrónica de Barrido-MEB-SEM. Baja magnificación. Fijación en Tetraoxido de Osmio (OSO4): Colonias en grupos y fibrillas. Comparado con anterior (foto 11).
Foto 14.-Microscopia Electrónica de Barrido-MEB-SEM comparado con anterior foto 13, grupos de fibras.
15.-Microscopia Electrónica de Barrido-MEB- SEM.
MORFOLOGIA DEL TIPO ECTOMICORRIZA “MICORRIZA
ECTOTROFICA” HIFAS, CORDON MICELIAR comparado con foto anterior 14. Caracterización morfológica, evidencia de grupos de fibras y esporas de hongos.
16.-Microscopia Electrónica de Barrido-MEB-SEM. ALTA MAGNIFICACION. MORFOLOGIA DEL TIPO ECTOMICORRIZA “MICORRIZA ECTOTROFICA” HIFAS, CORDON MICELIAR caracterización morfológica, comparado con foto anterior 15, evidencia de grupos de fibras y esporas de hongos.
17.- Microscopia Electrónica de Barrido-MEB- SEM. Cultivo de Agar Nutriente esporas de Hongos.
CONCLUSION
- Se evidencia la caracterización morfológica en Micorrizas Líquida VAM MORFOLOGIA DEL TIPO ECTOMICORRIZA “MICORRIZA ECTOTROFICA” HIFAS. Procesadas en Medio de Cultivo saboround, dispuestos en forma de tallarín.
Ensayo de Huxtable Germinación en Maíz Buena Fé, Quevedo
- Zona de siembra Buena Fe. 25 de Enero
