microscopía electrónica, Apuntes de Biología

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PRÁCTICA 7

MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA

Cambiamos la “luz visible” por una radiación de menor longitud de onda “electrones”. Electrones: Su longitud de onda varía con la aceleración (se pueden acelerar aplicando una diferencia de potencial).

MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA

Casi todo el contenido celular queda por debajo del límite de resolución del M.O.

Con el M.O. no podemos analizar el interior celular

SOLUCIÓN

Si eV= 100.000 volts, l = 0,004 nm.

Límite de resolución teórico del M.E. debería ser 0,002 nm (100.000 veces menor que el del M.O)

El poder de resolución del M.E. debería ser mucho mayor que el del M.O.

0,2 nm

La longitud de onda es 100.000 veces menor que la más pequeña de la luz visible

Límite de Resolución

del M.E. en la práctica

0,1 nm

PROPIEDADES DE LOS ELECTRONES

Poseen carga negativa.

1.- Pueden acelerarse utilizando una diferencia de potencial.

2.- Pueden manipularse con ayuda de campos magnéticos (lentes electro-

magnéticas).

Poseen un masa muy pequeña y un poder de penetración muy escaso.

1.- No pueden atravesar secciones de grosor superior a 100 nm.

2.- Son dispersados por las partículas de aire y para trabajar con ellos se

requiere alto vacío. No se pueden analizar muestras vivas.

Visualización.

1.- Los electrones no son directamente detectables por el ojo humano.

2.- La información que den debe ser convertida en una imagen visible.

High-resolution electron microscope from

Siemens and Halske (1938)

Construction sketch from Ernst Ruska's

M.E. Convencional: 0.1 MV

Alto voltaje: 3 MV

• Similar en su diseño básico al M.O.
• Diferencias básicas entre el M.O. y el M.E.:

1. Fuente de iluminación.
2. Lentes.
3. Alto vacío. Lente electromagnética

1.- Tubo: Constituye el armazón del microscopio. En sus interior necesitamos alto vacío. 2.- Fuente de electrones: Situada en la parte alta del tubo. Es un filamento de tungsteno (o de lantano) que calentado en vacío desprende los electrones (cátodo) que forman el haz. 3.- Ánodo: Situado enfrente del cátodo. Aplicando entre ellos una diferencia de potencial se aceleran los electrones. 4.- Condensador: Enfoca el haz de electrones sobre la muestra.

ELEMENTOS

FUENTE DE ELECTRONES Y ÁNODO

Electron Sources

Filament Current (Heating Current) Current running through the emitter

Beam Current Current generated by the emitter

EMISOR DE TUNGSTENO

Alambre doblado sobre un lazo de diversas dimensiones.

EMISOR TERMOIÓNICO

Utiliza calor para generar el haz de electrones. Filamento de Tungsteno (W). Hexaboruro de Lantano (LaB6).

LENTES ELECTROMAGNÉTICAS

- Son bobinas electromagnéticas que generan campos magnéticos que modifican el haz.

BRAZO ARTICULADO

PANTALLA RECUBIERTA DE CRISTALES DE FÓSFORO

El fósforo, al ser bombardeado por los electrones, emite luz (visible)

Formación de la imagen:

• Un electrón que pase cerca de un átomo de bajo número atómico no será desviado.
• Ese electrón alcanzará la pantalla.
• En la pantalla aparecerá un punto de luz.

PANTALLA RECUBIERTA DE CRISTALES DE FÓSFORO

Formación de la imagen:

• En la pantalla, se formará un réplica de la muestra (imagen) a partir de puntos de luz y oscuridad. CONTRASTE
• Será una imagen en blanco y negro.

PANTALLA RECUBIERTA DE CRISTALES DE FÓSFORO