MONOGRAFÍA TINCIONES ., Guías, Proyectos, Investigaciones de Histología

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I. INTRODUCCIÓN

Para su estudio microscópico, la mayor parte de los cortes histológicos deben estar teñidos. La razón es que, con pocas excepciones, los tejidos son incoloros y su observación directa del microscopio óptico es prácticamente inútil. Hay métodos de tinción no solamente se destacan los diversos componentes de los tejidos, sino también establecen diferencias entre ellos. La selectividad con la que las distintas técnicas de tinción dan color a los diferentes componentes de los tejidos puede ser mayor o menor. La mayor parte de las técnicas de tinción tiene un carácter ácido o básico, y tiende a formar enlaces electrostáticos (salinos) con los radicales ionizados de los tejidos. Los componentes de los tejidos que se tiñen bien con los colorantes básicos se denominan basófilos , mientras que los que presentan una mayor afinidad por los colorantes ácidos se denominan acidófilos.

De todas las técnicas de tinción, la más utilizada es la combinación de hematoxilina y eosina (HE). La hematoxilina proporciona un color azul o violeta al núcleo de la célula y a otras estructuras ácidas (como las porciones de citoplasma ricas en ARN y la matriz del cartílago hialino). Por el contrario, la eosina da un color rosado al citoplasma y al colágeno. Hay otras muchas técnicas de tinción que se emplean habitualmente, como los tricrómicos (por ejemplo: los colorantes de Mallory y de Masson). Además de definir bien tanto el núcleo como el citoplasma, en los tricrómicos facilitan la diferenciación entre el colágeno y el músculo liso. Una técnica especialmente adecuada para el estudio de la diferenciación de colágeno es la del colorante pricosirio visualizado mediante luz polarizada. Aunque la mayor parte de los colorantes tiene utilidad para la visualización de los distintos componentes de los tejidos, generalmente ofrecen poca información acerca de su naturaleza química.

Hay numerosas técnicas con las que las distintas estructuras se visualizan debido a la aparición de un precipitado mediante un color fluorescente, por lo que las células de sus límites no son bien visibles. En este caso, se suele utilizar una tinción de contraste , es decir, una técnica de tinción aplicada a un corte histológico para facilitar únicamente visualización de los contornos de las células y los núcleos. Otra manera de visualizar los componentes de las células y los tejidos eso impregnación mediante sales de metal como la plata o el oro, un método frecuente en el estudio del sistema nervioso.

III. METACROMASIA

¿Si es azul porque teñí de rojo?

Esto ocurre porque los sillones del colorante unidos al sustrato cambien longitud de onda de la solución de la luz y por lo tanto el color observado del objeto detenido es distinto al del colorante libre.

IV. TINCIONES MÁS UTILIZADAS

• Hematoxilina-eosina

Tinción general contiene un colorante básico para las estructuras ácidas como (ADN y ARN) y otro ácido para el citoplasma y estructuras en extracelulares. Es un compuesto que se obtiene de la planta leguminosa Haematoxylum campechianum, conocida también con el nombre de palo de Campeche. Requiere ser oxidada para convertirse en una molécula coloreada azul.

• Eosina

Derivado halógeno del xanteno. Molécula autoflorescente por sus átomos halógenos y es soluble en agua y en alcohol es lo que le confiere mucha versatilidad para la tinción histológica presenta un cierto carácter ácido rosa.

• Tricrómicos

Es una técnica para la coloración de fibras colágenas y elásticas. Se observan colores distintos; tejido conjuntivo de verde, tejido muscular verde pardo, eritrocitos de rojizo, núcleos azul negro y citoplasma y fibras musculares rosa.

• Giemsa

Es una tinción general que se emplea mucho en hematología, permite distinguir, por su coloración, los gránulos de Los diferentes leucocitos

polimorfonucleares. Contiene una mezcla de colorantes catiónicos (azul de metileno) y aniónicos (eosina).

• Papanicolau

Coloración histológica empleada principalmente para extensiones citológicas, sirve para la detección precoz del carcinoma del cérvix. Contiene una mezcla de colorantes que no produce sobre coloración. Normalmente tiene cuatro colorantes: uno nuclear (hematoxilina), eosina Y, que tiñe de rosa el citoplasma, verde brillante que tiñe el moco y Orange G tiñe la queratina.

• Impresiones argéntica

Implica dos pasos:

• Impregnación primaria.- Los tejidos son expuestos a una solución ligeramente alcalina en la que hay una concentración muy alta de nitrato de plata (AgNO3) que proporciona y iones de plata en exceso.
• Segunda fase.- Los cortes son tratados con una solución (hidroquinona y sulfito) que captura parte de los iones de plata que se han unido débilmente el tejido.
• Tinción negativa

No todos los colorantes se unen a las estructuras tisulares. Algunas tinciones se basan en la exclusión de la coloración. El contraste negativo consistente en teñir todo menos la estructura que queremos visualizar.

V. TINCIONES ESPECIALES

Las tinciones especiales se usan principalmente para ayudar en el diagnóstico de las enfermedades infecciosas, y pueden también ser usadas en el diagnóstico del cáncer. Las tinciones especiales se realizan con tintes químicos que identifican los microorganismos encontrados en los tejidos y tejidos específicos.

Estos son:

Es un colorante catiónico (básico) metacromático de color azul, utilizado en histología y algunas veces en el ambiente clínico. El compuesto es un derivado del aminotoluol, compuesto homólogo de la anilina derivada del toluol.

En suspensión presenta un color azul y cuando se expone a estructuras ricas en grupos aniónicos (heparina, condroitín sulfatos, etc.) las moléculas de esta sustancia se ordenan formando agrupaciones que alteran la longitud de onda absorbida, virando del color azul al color rojo. Este efecto se denomina metacromasia.

Este colorante tiñe estructura basófilas, tales como la cromatina. Se puede comportar como colorante ortocromático (tiñe de color azul) o metacromático (tiñe de color violeta-rojo), dependiendo del pH y de la naturaleza química de la sustancia teñida.

Se usa frecuentemente como colorante ortocromático para teñir tejido nervioso, donde tiñe la heterocromatina y los gránulos de Nissl (acúmulos de cisternas de retículo endoplásmico rugoso de los somas neuronales, así como las fibras nerviosas amielínicas y células glíales.

Se usa frecuentemente como colorante metacromático en las estructuras ricas en proteoglucanos sulfatados, como el heparán sulfato, presente, por ejemplo, en el cartílago joven (condroblastos y matriz inmadura) y en los gránulos de las células cebadas.

• Tricrómico de Masson

Como su nombre indica esta tinción emplea tres colorantes, hematoxilina, fucsina y verde luz. Esta tinción es muy útil para poner de manifiesto las fibras de colágeno, y el conectivo en general, respecto a otros tipos celulares como el músculo o epitelios. Se emplea mucho en la diagnosis de procesos tumorales. Hay muchas variantes de esta tinción adaptadas a necesidades particulares de cada laboratorio.

• Van Gieson

Corresponde a la mezcla de ácido pícrico-fucsina ácida y hematoxilina férrica de Weigert.

Es el método más simple mediante tinción para diferenciar colágeno de otros tejidos conectivos.

• Verhoeff

Forma enlaces catiónicos, aniónicos y no iónicos con la elastina, el constituyente principal del tejido elástico fibroso.2 La elastina tiene una afinidad fuerte por el complejo hierro-hematoxilina formado por los reactivos en la tinción y por lo tanto la retendrá mucho más tiempo que otros componentes del tejido, por lo que aparecerá teñida, mientras los otros elementos aparecen poco coloreados. El uso de tiosulfato de sodio remueve el exceso de iodo y se utiliza una contratinción (mayoritariamente tinción de Van Gieson) para dar contraste a la tinción principal. Las fibras elásticas y los núcleos celulares se tiñen de negro, las fibras de colágeno de rojo y otros elementos del tejido incluyendo el citoplasma se tiñen de amarillo.

• PAS

Este método de tinción se emplea para detectar polisacáridos en tejidos, tanto glucógeno como mucopolisacáridos. También es una buena tinción para membranas basales y cartílago. Cualquier fijador es apropiado para esta técnica.

El mecanismo de coloración de la tinción de PAS no es como la de los colorantes habituales, sólo por afinidad eléctrica, sino que es una tinción histoquímica, es decir, se realiza inicialmente una modificación química al tejido previa a la coloración. Es el ácido peryódico quien lleva a cabo esta reacción.

• Wartin Starrin

La tinción de Warthin-Starry basa en la capacidad de ciertas bacterias y espiroquetas de unirse a iones plata de la solución. Esta reacción es una reacción argyrophil similar a la tinción especial reticulina. La posterior adición de un agente reductor, posteriormente, convierte esta cota de plata a plata metálica visible. En la tinción de Warthin-Starry, el tejido se sensibilizó antes de la aplicación del complejo de plata. Se aplica una solución acuosa de nitrato de plata se combina con el agente reductor, y se genera un complejo de plata diamina.

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