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UNIDAD DE PARASITOLOGIA. DPTO SANIDAD ANIMAL. FACULTAD DE VETERINARIA
ESTUDIO DE LA ENFERMEDAD PARASITARIA
DIAGNOSTICO
Constituye uno de los capítulos más importantes de la enfermedad parasitaria.
1.- Finalidad
La finalidad del diagnóstico es el reconocimiento de una determinada patología parasitaria en un individuo ó entre los miembros de un colectivo animal y la identificación del agente causal, utilizando distintos métodos de diagnóstico.
2.- Métodos de Diagnóstico
2.1.- En el animal vivo
1) Clínico-Epidemiológico
Se realiza por un lado, en base a la sintomatología que muestran los animales y por otro gracias al conocimiento epidemiológico de las enfermedades en una zona determinada.
Dado que la enfermedad parasitaria se caracteriza por presentar normalmente un curso crónico, con una sintomatología poco apreciable e inespecífica, en contadas ocasiones nos será de utilidad, y será siempre de carácter orientativo, pero de gran ayuda en la toma de muestras para poder realizar un diagnóstico asertivo.
2) Parasitológico
Es un diagnóstico asertivo, con el que se pretende el hallazgo e identificación de los parásitos adultos: entre los helmintos, ejemplares enteros o partes sexuadas; entre los protozoos, trofozoitos, es decir, formas vegetativas. O bien, lo que es más frecuente, la observación de sus elementos de diseminación: quistes, ooquistes, huevos, embriones, larvas.
*** Coprológico**
Teniendo en cuenta que la mayoría de los parásitos animales se encuentran en el intestino, el diagnóstico de los mismos se realizará a partir de muestras de heces.
La coprología parasitaria es el conjunto de métodos de identificación y de evaluación de los parásitos y formas parasitarias que se eliminan por las heces.
Es preciso tener en cuenta que un examen coprológico negativo carece de valor predictivo. Por muchas causas el análisis puede ser negativo y, sin embargo, el paciente o el colectivo estar parasitado. Por ello es conveniente realizar al menos tres exámenes coprológicos sobre muestras obtenidas en días alternos, o con intervalos de media a una semana, para descartar la presencia de parásitos patentes intestinales.
El diagnóstico coprológico es cualitativo, cuando utilizamos técnicas que nos permiten detectar la presencia de elementos de diseminación parasitaria y será cuantitativo cuando empleamos técnicas con las que determinamos en qué cantidad están esos elementos de diseminación parasitaria en las muestras de heces.
A) Coprología cualitativa
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Podemos realizar un examen macroscópico de las heces para apreciar entre otras características su consistencia y/o la presencia de sangre y lo que no es menos importante, la presencia de trematodos adultos expulsados, los proglotis de cestodos, los nematodos adultos visibles.
El examen microscópico es el fundamental en coprología y se ha de hacer en dos etapas complementarias: un examen microscópico directo y un examen microscópico, previo enriquecimiento de las muestras.
a) Examen microscópico directo
Este examen es suficiente cuando el número de formas parásitas presentes es abundante, permitiendo, además, si se hace a 37ºC y en suero fisiológico, ver trofozoitos de protozoos.
Consiste en diluir una pequeña muestra de heces con unas gotas de suero fisiológico, de manera que a través de la preparación, se pueda leer la letra impresa o los dígitos de un reloj.
Para facilitar la observación, se pueden emplear algunos colorantes como el cristal violeta o la fucsina, entre otros.
b) Examen microscópico previo enriquecimiento
Tiene por objeto concentrar los elementos parasitarios dispersos en la materia fecal. Existen muchos métodos, pero ninguno pone en evidencia a todos los parásitos que pueden ser eliminados por heces. Hay dos grupos de métodos
- Físicos: sedimentación o flotación con o sin centrifugación
- Físico-químicos o difásicos: se realizan en dos etapas, en la primera se separan los residuos más voluminosos que tienen un diferente peso específico del de los elementos parasitarios y en la segunda etapa se concentran por sedimentación los elementos parasitarios ya aislados. - Enriquecimiento por métodos físicos
Se basan en la diferencia de densidad entre la materia fecal y los elementos parasitarios.
Las heces han de estar muy diluidas ya sea en un líquido de menor densidad para concentrarlos en un sedimento, o en un líquido más denso concentrando los elementos parasitarios en la superficie del líquido.
No hay un procedimiento universal. En cada caso se debe utilizar uno u otro método según el tiempo disponible y la economía. Sea cual sea el método el elegido, se puede realizar de forma lenta, o de forma acelerada por centrifugación.
*** Técnica de Sedimentación**
El líquido de dilución, que comúnmente es el agua, posee una densidad mayor que las partículas de alimento y menor que los elementos parasitarios.
Es una técnica económica y sencilla con la que se pueden tratar grandes volúmenes de heces y es específica para formas parasitarias de gran densidad. Como inconvenientes podemos señalar su lentitud.
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Se debe añadir una solución antifúngica, se dejan a temperatura ambiente y las larvas se pueden aislar utilizando el método de Baermann. Debe hacerse en la oscuridad, procurando que las heces no se desequen.
*** Cultivo de coccidios**
Los ooquistes eliminados sin esporular, acaban haciéndolo si los ponemos en capa poco profunda con una solución de dicromato potásico al 1%, a temperatura ambiente al abrigo de la luz, o en una incubadora a 20ºC.
El tiempo de esporulación depende de cada especie, y se completa entre los 3 y los 5 días de cultivo.
B) Coprología cuantitativa
Para conocer la carga parasitaria, se realizan determinaciones cuantitativas, que proporcionan la intensidad del parasitismo, expresada en número de elementos parasitarios por gramo de heces.
Existen varios métodos, siendo uno de los más conocidos y utilizados el que emplea la cámara de recuento diseñada por MacMaster, compuesta por dos cámaras con una capacidad de 0,15 ml. cada una. El número medio de huevos contados es el que corresponde a 0,15 ml, por 100, es el número de formas parasitarias por gramo de heces.
*** Hemático**
La sangre puede examinarse en fresco, añadiendo anticoagulante a la gota de la muestra depositada sobre el portaobjetos y poniendo encima un cubreobjetos. De esta forma podemos observar parásitos móviles como por ejemplo los tripanosomas o las microfilarias.
Los parásitos hemáticos intracelulares (babesias o teilerias), se diagnostican mediante frotis delgados, fijados con metanol y teñidos con Giemsa.
Cuando los parásitos son poco abundantes puede recurrirse a técnicas de concentración mediante centrifugación en capilar de hematocrito.
Otro método de concentración es el de Knott para microfilarias, utilizando formol como hemolizante y la centrifugación como medio de concentración. Para facilitar la detección de las microfilarias se puede añadir al sedimento una gota de azul de metileno.
Las microfilarias pueden concentrarse también con membranas de policarbonato de 3 μm de luz de poro, añadiendo un colorante vital como el azul de metileno.
*** Cutáneo**
La presencia de ácaros, aradores de la sarna o Demodex , se observa en raspados realizados en las zonas cutáneas afectadas. Estos raspados se aclaran con lactofenol o con hidróxido potásico al 5%.
*** Otros**
En los productor de un aborto por T. foetus , en examen directo se pueden encontrar los tricomonas con su movimiento característico. En caso de duda, puede ciltivarse la muestra en medio Diamond.
Para investigar parásitos en los esputos, se añade a la muestra obtenida el triple de su volumen de suero fisiológico, se centrifuga y el sedimento se examina en fresco o se tiñe con Giemsa.
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Con el material procedente de raspados de mucosas o de punciones ganglionares o medulares, se hacen extensiones que se fijan con metanol y se tiñen con Giemsa.
3) Inmunológico
Pretende explorar las modificaciones del sistema inmunitario producidas específicamente por parásitos concretos, por tanto, indirectamente se permite su diagnóstico.
Se puede determinar la presencia de inmunoglobulinas específicas o de antígenos parasitarios en el plasma, líquidos orgánicos, excreciones (saliva, heces) y en las mucosas. La muestra más frecuentemente empleada es el plasma y su derivado, el suero sanguíneo, utilizando diversas reacciones serológicas como son:
- Reacciones de precipitación , utilizando técnicas tales como la doble difusión (DD), la inmunodifusión radial (IDR), la electroinmunodifusión (ED), la contrainmunoelectroforesis (CIEF), etc. - Reacciones de aglutinación , con técnicas de aglutinación directa (AD) o de aglutinación indirecta (AI) con látex, bentonita o con glóbulos rojos ((HAI). - Reacciones de lisis , como la fijación del complemento (FCT), prueba de la tinta o del colorante (Dye-Test de Sabin-Feldman). - Reacciones con anticuerpos o antígenos marcados , con un fluorocromo, como inmunofluorescencia directa (ID) o indirecta (IFI); con un radionúcleo, como el radioinmunoensayo (RIA); con una enzima, como el inmunoenzimoensayo (ELISA)o la inmunotransferencia (Eestern Blot), etc.
La utilización de este tipo de diagnóstico no siempre es fácil dada la complejidad antigénica de los parásitos y la existencia de reacciones cruzadas entre parásitos del mismo grupo taxonómico.
4) Biomolecular
Se utilizan técnicas que requieren el empleo de sondas de ADN o ARN para detectar ácidos nucleicos parasitarios, siendo una de las técnicas más utilizadas en los últimos años la de la reacción en cadena de la polimerasa o PCR
5) Experimental
En casos muy determinados y concretos, en los que resulta difícil poner en evidencia la presencia del parásito, se puede recurrir al empleo de:
- Cultivos in vitro , en medios artificiales adecuados, ya sean medios difásicos, sólidos o líquidos. La utilización de medios de cultivo tiene una doble vertiente, por un lado poner en evidencia la presencia del parásito en una muestra orgánica y por otro la obtención de antígenos parasitarios, ya sean somáticos o de excreción/secreción.
- Animales de experimentación , con inoculación parenteral del material sospechoso en animales de experimentación adecuados. El examen de los animales inoculados se realiza pasado el periodo de prepatencia del parásito que se sospecha.
- Xenodiagnóstico , en parasitosis transmitidas por artrópodos. Consiste en permitir que un hospedador intermediario adecuado, exento de parásitos, se alimente sobre el hospedador
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***** Que son colectividades ganaderas , en las que la economía es más bien baja y con poco interés en gastar dinero.
*** Las características del fármaco**
*** Eficacia** , que sea eficaz contra formas adultas y jóvenes
*** Efecto residual** , que evite tener que repetir el tratamiento
*** Toxicidad** , del propio fármaco y tener en cuenta que no sea tóxico para individuos depauperados, débiles, hembras gestantes, etc.
*** Económico**
*** Fácil administración** , dependiendo del número de animales, del tipo de ganado, buscar la vía más fácil y cómoda de administrar el fármaco. Se debe tener siempre en cuenta que el animal enfermo pierde las ganas de comer, pero no la sed, por tanto un tratamiento preventivo se administra con el pienso y uno curativo con el agua de bebida.
3.- Fármacos disponibles
Existen diversos grupos farmacológicos para el tratamiento de las diferentes enfermedades parasitarias, algunos de los grupos más utilizados son:
Antibióticos Ionóforos
Lasalocid, Monensina, Maduromicina
Anticoccidiósicos sintéticos (químicos)
Amprolio, Halofuginona
Bencimidazoles
Albendazol, Fenbendazol, Mebendazol
Lactonas macrocíclicas
Ivermectina, Doramentica, Milbemicina
Piretrinas y piretroides
Permetrina, Deltametrina, Cipermetrina
Organofosforados
Diclorvos, Diazinon, Fention, Triclorfon
4.- Problemas del control antiparasitario: la resistencia a los fármacos
En ocasiones, después de la desparasitación de un colectivo, no se obtienen los resultados esperados, es decir, se producen fallos terapéuticos que suponen problemas del control antiparasitario.
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Una de las causas de mayor importancia es la presencia en el colectivo de “cepas” de parásitos con genes resistentes, lo que se traduce en una eficacia sensiblemente menor a la que corresponde al fármaco utilizado.
De todas formas, no siempre los fallos terapéuticos son debidos a resistencias a un antiparasitario determinado, existen otras causas que pueden ser responsables de tratamientos ineficaces. Las más importantes pueden ser:
* Diagnóstico incorrecto y uso inadecuado de fármacos , existen infecciones causadas por bacterias, virus así como deficiencias minerales, intoxicaciones y cambios en la dieta, que pueden cursar con signos parecidos a los de algunas parasitosis digestivas. Naturalmente, en esos casos, los antiparasitarios son absolutamente ineficaces.
* Uso inadecuado de fármacos , como por ejemplo administrar fármacos poco eficaces frente a determinados estadios de desarrollo del parásito.
* La subdosificación , es un problema bastante frecuente generado por distintas causas, entre las que se pueden señalar el que los ganaderos calculan las dosis estimando el peso medio de los animales, también sucede que no se tienen en cuenta las instrucciones del fabricante o que las pistolas dosificadoras no se calibran adecuadamente. También aparece este problema en el caso de parasitaciones mixtas por grupos parasitarios con diferente susceptibilidad a un fármaco determinado, si se usa la dosis que elimina a los más sensibles, no se actúa frente a los más resistentes.
A pesar de las causas expuestas, ciertamente el desarrollo de resistencias a los antiparasitarios constituye un serio problema que, en algunas partes del mundo, limita seriamente la producción animal.
La resistencia a fármacos es un fenómeno pre adaptativo de carácter hereditario y consecuencia de la quimioterapia intensiva.
La aparición de una cepa resistente resulta de la eliminación de todos los organismos susceptibles, lo que significa que la siguiente generación estará constituida por la descendencia de la minoría que resistió la acción del fármaco.
Es decir, la resistencia ocurre cuando una parte de una población parásita es capaz de tolerar dosis de un producto que elimina a otras poblaciones de la misma especie. La clave del desarrollo de resistencia es el porcentaje con el que los parásitos que sobreviven a un tratamiento contribuyen a la siguiente generación.
