practica 10 estraccion, Diapositivas de Bioquímica

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Extracción de ADN e

Identificación de sus

componentes

Relación de Experimentos

• Extracción y purificación del DNA de un tejido animal
• Identificación de desoxirribosa: Reacción de Dische
• Identificación de fosfatos
• Desnaturalización del DNA: Efecto hipercrómico

Bases Nitrogenadas Azúcar Grupo Fosfato

Dogma Central de la Biología Molecular Años mas tarde se comprobó que la información no va siempre del ADN hacia el ARN (ADN→ARN), en algunos casos la información puede fluir del ARN hacia el ADN (ARN→ADN), es decir sintetizar ADN tomando como molde ARN , teniendo lugar el fenómeno de la transcripción inversa ( propio de algunos virus y

Parte Experimental

Aislamiento del DNA Pesar 2 g de timo (^25) mL de NaCl 0.15 M más EDTA 0.1 M pH Procedimiento :

Transferir el homogenizado a una probeta de 100 mL Añadir 2 mL de detergente anionico : Lauril Sulfato al 25 % Colocar en baño maría a 60°C durante 10 min Aislamiento del DNA Procedimiento :

Colocar la varilla de vidrio con el DNA enrollado en un tubo de prueba y disolverlo en 20 ml de solución salina citrato ( 0 , 015 - 0 , 0015 M). Dejar en reposo 30 min. Añadir 2 ml de solución acetato de sodio 3 M a pH 7 la cual contiene 0, M de EDTA. Mezclar con una varilla de vidrio, añadiendo simultáneamente gota a gota 9 , 5 volúmenes de isopropanol para precipitar selectivamente al DNA. Seguir mezclando con la varilla de vidrio tratando de enrollar el DNA. Disolver el DNA obtenido en 20 ml. de solución salina citrato, esta solución nos servirá para los siguientes ensayos

Aislamiento del DNA

• En el siguiente video podrás observar un método empleado para extraer material genético del células vegetales https://www.youtube.com/watch?v=PkjtFM_UVxk&t=177s https://www.youtube.com/watch?v=PN1UvhW6miw Siguiendo las indicaciones del último video realizarán la extracción casera del DNA, a la cual adjuntarán las mejores fotos donde se evidencie el trabajo.

Identificación de Desoxirribosa : Reacción de Dische Procedimiento

• Mezclar el contenido de cada tubo, colocarlos en baño hirviente durante 10 min.
• Enfriar en baño de agua corriente por unos minutos. La presencia de desoxirribosa se revela por la aparición de un color azul https://www.youtube.com/watch?v=42nsG13X_Zg

Identificación de fosfato Primero se procederá a hidrolizar el DNA con el objeto de liberar el fosfato, luego se identificará éste mediante una reacción de coloración Colocar en baño maría hirviente por 30 minutos Enfriar y proceder a identificar el fosfato inorgánico de la siguiente manera

Identificación de fosfato

DESNATURALIZACION DEL DNA D E S N A T U R A L I Z A C I O N R E N A T U R A LI Z A CI O N

T°

Constante dielectrica pH < Rápido Lento

T°

Debilitan las interacciones hidrofóbicas y rompen los puentes de hidrógeno