Práctica IV: Diluciones de Hemoglobina, Ejercicios de Biología

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Práctica IV:

Diluciones

Diluciones de muestras y cuantificación (espectrofotometría y colorimetría).

Esther Cabrera Velasco. 1º Grupo A 14/11/

Resultados

4.1.- ¿Qué volumen (ml) y concentración de hemoglobina (mg/ml) se obtendrá en cada caso del apartado 2.1?

Se preparan diluciones 1/2, 1/5, 1/10 a partir de una disolución inicial de hemoglobina a una concentración de 1 mg/ml. El diluyente será siempre tampón fosfato potásico 10 nM, pH 7 donde el volumen total es 2 ml.

1/2 → cogeremos 1 ml de la disolución de 1mg/ml de hemoglobina y 1ml de disolvente para obtener los 2 ml finales. La nueva concentración es 1 mg/ml/2 =0,5mg/ml.

1/5→ se coge 0,4 ml de la disolución de hemoglobina de 1mg/ml y 1,6 de disolvente para obtener así los 2 ml finales. La nueva concentración será1/5= 0,2 mg/ml.

1/10→ se coge 0,2 ml de la disolución de hemoglobina 1 mg/ml y 1,8 ml de disolvente para obtener los 2 ml finales. La nueva concentración será 1/10=0,1 mg/ml.

4.2.- completa la tabla del apartado 2.2.

Nº tubo Diluc.final Diluc.parcial Tampón(ml) Hb (ml) mg/ml A 1/1’ 0 0 4 5 1, 2/2’ ½ ½ 2 2 2,5 0,659/0, 3/3’ 1/5 2/5 2,4 1,6 1 0,429/0, 4/4’ 1/10 5/10 2 2 0,5 0,247/0, 5/5’ 1/20 ½ 2 2 2,5 0,130/0, 6/6’ 1/50 2/5 2,4 1,6 0,1 0,040/0, 7/7’ 1/100 5/10 2 2 0,05 0,022/0, 8 Blanco 4 0 0 A/A’ Problema 0, B/B’ Problema 0,

4.3.- Representa la recta patrón (Absorbancia/concentraciones de hemoglobina conocidas) y calcula la concentración de la muestras problemas A Y B.

(Mirar hoja milimetrada que esta junto al trabajo)

Como vemos en la tabla la concentración de A es y la concentración de B es

Discusión de los resultados obtenidos:

Hemos obtenido la absorbancia de la hemoglobina que absorbe en el rango visible gracias a su grupo prostético, absorbe a 555nm.La ley de Lamber-Beer se cumple para valores de absorbancia entre 0,1 y 1 por lo que implica concentraciones limitadas, por eso muchas veces es necesario diluir muchas veces la muestra problema. De modo que en el tubo uno la absorbancia es mayor que 1 y por lo tanto no lo represento en la gráfica ya que la recta se curvaría y la ley de Lamber-Beer no se cumple. Y las absorbancias de los tubos 6/6’ y la de los tubos 7/7’ son