Practicas bioquímica, Esquemas y mapas conceptuales de Bioquímica

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Aísla miento de glucógeno hepático y determinación cuanhtativa mediante conversión en glucosa Y ensayo enzimático, Fase 1: Extracción de glucégeno Homagenización del Hejido y ruptura celular, precipitación precipitado, hidrólisis Acida Fase 2: Determinación enzimatica_de la glucosa método de glucosa 0xidasa y peroxidasa 0,9410 lucosa — ¿cido glucónico ¿ H202 TN 4470 4 -2minofenazona + Feno) —2 quinonaimina + sustancia coloreada —> medible por GBSOrBanGia) proporciona) ed 21a concentración deglucosa presente Fased anicialmente en la muestra -2ml KOH a130%”" + Baño calvente Centrifugar para eliminar restos. «(0.2 -ml de Na, SO, 15% o U 4 ml alconal etílico. (precipitación Precipilación quedgeno — megciar: para resus pender precipitado Procedimiento: . y por tanto lacantidadde -Pesar hígado ayuno l0.629) y comirol Ds en el hígado. Aicohdlica) calentar (papelde filtro gue absorbe «dol 11250, 2.5m (MANE acid) salpicaduras) q. L ww" H20 (hasta llegar a2m)) sedimento - Neutratización Gola a gola NaQH5M / H250, 0.5M, con papel indicador “Anotar volumen de la disolución (mdrolizado de glucógeno) Ayuno 5Bml Combrol 54ml Fase 2 A coger d parte coger Iparle Preparación diluciones 4:40-»coger 10 partes — 4/10=»Total coger 9 partes) 10 — Amb — 04mb »muentro control. + 0.9 ml Nac 09% a > 4d —> 0.05 ml muera control + 095ml Nad 09% La delerminaciónde glucosa se hace con un «método enzimático, reguiere tiempo de wcobación para que la glucosa reaccione y se oxide el cromógeno. “Preparar (2 +ubos com imdicaciones de la tabla. “Añadir lml de eromógeno. Tubod: 04-30 _ EA Tubod: 04-90 a q (i-Vá = (4-14 2000 =[0905] ooo =[0-0045] - Medir absorvanda. Tubo 3: 0.4150 _ Tubo 4: 0.4- 300 - Costrir COAIEMAETO 2000 =l0%5] ooo “loo Tubo 5: 04-500 -[£:025] S Al hacer la curva obtenemos las concentraciones 2000 3 finales y des pejando obtenemos las miciales. 3 _ UD 0. + diluciones _Lontrol_ A m . 5. 544 —_<0 do 2.001- 2000 -00286-40=0.216m9/ml 0.236mg (mb Sm! = 4.54 “mg de glucosa Tocón sa 2 1/20 0.0005 -2000 z . (480 -18d9 d Gi — 7 043 20 = O. 236109 /aml «masa del gucágeno: masa de glucasa- 1 sed ua eno T . A a AE AE m9/mb 0001544 - de dut 0.0139 y glucógeno habria que hacer lá media, d 0.00134 y glacigemo ea delos3 y usaresedato en el 0.59 de brígado comjrol e siguiente paso, pero se nos olvido ¿ncluw el tubo 6.