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practica 5 y 6 de biologia celular
Tipo: Diapositivas
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1. Título. “ Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)” 2. Objetivos principales: Conocer el uso de equipos anexos a la PCR, y ver el desarrollo del protocolo específico para la obtención de copias de ADN obtenidas en un laboratorio. **3. Material y Métodos: Observar los siguientes videos: https://www.youtube.com/watch?v=kwSxlWD39ak, https://www.youtube.com/watch?v=DZ7uNG9dy0E, https://www.youtube.com/watch?v=tPtM78RVLM8, y leer el artículo “PCR Detection of Genes Encoding Nitrite Reductase in Denitrifying Bacteria”
(Carolina del Norte, Estados Unidos 1944) Se licenció en química en el Georgia Institute of Technology. En 1966 se trasladó a (California), para estudiar bioquímica, consiguiendo un doctorado en la Universidad de Berkeley. En 1972 consiguió empleo como investigador en cardiología pediátrica, adquiriendo formación en biología. En 1979 fue contratado por la compañía californiana Cetus Corporation, donde trabajaba con oligonucleótidos (moléculas cortas de ADN o ARN). En 1985, mientras seguía trabajando en Cetus, desarrolló la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa, (PCR en sus siglas en inglés). Por esta invención, de gran valor en biotecnología y como herramienta de investigación científica y forense, En 1993 la Academia Sueca concede el Premio Nobel de Química a Kary Banks Mullis por la invención en 1983 de la reacción en cadena de la polimerasa o PCR. El galardonado declaró que su idea surgió conduciendo el coche en un viaje de fin de semana con su novia. Hoy en día, gracias a esta herramienta, investigadores de diversos campos pueden obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN en particular, partiendo de una cantidad mínima de muestra.
3. ¿Cuántas etapas tiene la PCR convencional? Desnaturalización (96°C) la reacción se calienta bastante para separar, o desnaturalizar, las cadenas de ADN. Esto proporciona los moldes de cadena sencilla para el siguiente paso. Alineamiento (45 y 65 ºC) Al disminuir la temperatura de incubación los iniciadores se unen al ADN molde en las zonas 3´complementarias. Ambos iniciadores se unen de manera específica al ADN flanqueando el fragmento que se quiere amplificar. En este caso, la temperatura y el tiempo van a depender de 3 factores relacionados con los iniciadores: la concentración, el número de bases y el porcentaje de guaninas-citosinas. En la práctica, la temperatura de alineamiento oscila entre 45 y 65 ºC durante un tiempo entre 30 segundos y 1 minuto. Un aumento de temperatura o del tiempo favorece la especificidad porque disminuye las uniones incorrectas de los iniciadores con la hebra molde Extensión (72 °C)
6. Referencias Bibliográficas: Serrato Díaz, A. (2014). PCR: reacción en cadena de la polimerasa. Disponible en: http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/pcr.pdf Tamay de Dios L. (2012). Fundamentos de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y de la PCR en tiempo real. Disponible en: https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2013/ir132d.pdf https://www.ucm.es/data/cont/docs/261-2019-03-22-pr%C3%A1ctica %204_DISE%C3%91O%20EXPERIMENTAL%20Y%20AN%C3%81LISIS %20DE%20DATOS%20EN%20LA%20T%C3%89CNICA%20DE%20LA%20RT %20qPCR%20(1).pdf https://www.recercat.cat/bitstream/handle/2072/12321/ MolToolsAquacult_Spanish.pdf?sequence=