Prácticas de Microbiología: Resultados y Discusión, Ejercicios de Microbiología

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Informe de

Prácticas

Juranny Michelle Morán Lalangui

Practica I: Preparación de medios de cultivo.

Resultados.

En esta práctica se prepararon 2 botellas de 700ml de suero salino cuya concentración debe ser 9g/100ml, por tanto, se realizaron los cálculos y procedimos a la preparación del suero salino añadiendo 6,3 g en cada botella. Posteriormente se repartió el contenido de ambas botellas en tubos de ensayo, 9 ml en cada uno. Finalmente se esterilizaron en el autoclave.

Práctica V: Pruebas bioquímicas para identificación bacteriana.

Resultados.

Realizamos pruebas morfológicas y bioquímicas para identificar nuestra bacteria problema. De las cuales obtenemos los siguientes resultados.

Tinción Gram. Bacilo negativo

Producción de catalasa. +

Prueba de la citocromo C oxidasa. -

Metabolismo oxidativo de la glucosa. -

Metabolismo fermentativo de la glucosa. +

Fermentación de azucares Ácido. + Gas. - Vías de la fermentación de la glucosa. Rojo de metilo - Voges-Proskauer + Utilización de citrato como fuente de C. +

Hidrólisis de almidón. -

Hidrólisis de gelatina. -

Producción de indol. -

Reducción de nitratos a nitritos. +

Discusión.

La identificación de nuestra bacteria problema requiere el uso de un mapa dicotómico en el que tenemos en cuenta los siguientes factores: los resultados de la tinción Gram, el metabolismo, la fermentación de azucares, en este caso de lactosa, la vía fermentativa que sigue, y la producción de gas de glucosa. Teniendo en cuenta los resultados nuestra bacteria problema pertenece al género Enterobacter.

La prueba para saber si se realiza la producción de gas de glucosa, necesaria para la identificación de la bacteria problema, no se ha elaborado. Sin embargo, podemos deducirlo ya que en la prueba del metabolismo el medio es la glucosa y el resultado de este es fermentativo.

En la prueba bioquímica de la fermentación de la lactosa el indicador de pH, púrpura de bromocresol, ha realizado un doble viraje puesto que presenta un color intermedio entre

Finalmente, analizando el halo del lugol observamos en todas las bacterias problemas colonias resistentes a este producto. Por lo que se concluye que para inhibir el crecimiento se debe usar el peróxido de hidrógeno ya que tiene un mayor espectro de acción y, en ningún caso lugol debido a la resistencia adquirida por todas las bacterias problema.

Práctica VII: Bioluminiscencia

Resultados.

Se observan matraces que contiene Vibrio harveyi en medio Sea Water y dos placas en las que se ha cultivado Vibrio harveyi en una habitación oscura, una de ellas fue recubierta con papel de aluminio mientras que la otra se mantuvo descubierta. En ambas se observa bioluminiscencia en las zonas con abundantes células. Al agitar los matraces observamos como la intensidad de la luz aumenta.

Discusión.

Al encontrar el mismo resultado en ambas placas se demuestra la independencia de luz y, por tanto, el fenómeno por el cual emiten luz no depende de la absorción previa de la luz, descartando así la fosforescencia y debido a que tampoco existe captación de rayos ultravioleta se descarta también la fluorescencia. De tal manera que, se trata del fenómeno de bioluminiscencia.

El aumento de la intensidad al agitar los matraces se debe a que el contenido contacta con el oxígeno en mayor proporción que cuando está en reposo. Esto implica también la bioluminiscencia. Además, es muy importante que la concentración de células sea lo suficientemente alta puesto que cuando es insuficiente no se produce el fenómeno de bioluminiscencia.

Práctica VIII: Titulación de bacteriófagos.

Resultados.

Hileras Recuento X10 8 ufc/mL Observaciones 1 16 2 Resistentes en placas 100^0 , 100-2^ , 100-^. 2 26 3 Resistentes en placas 100^0 , 100-^. 3 40 4 Resistentes en placas 100^0 , 100-2^ , 100-^. 4 42 4 Resistentes en placas 100^0 , 100-2^ , 100-4^. Contaminant placa 100 -2. 5 14 1 Resistentes en placas 100^0 , 100-2^ , 100-4^. Agar blando deformante en placa x100 -^. 6 35 3 Resistentes en placas 100^0 , 100-4^. Posibles diluciones erróneas. 7 17 2 Agar blando defectuoso en placa 100 -8. Media(X) 27,14 3

Discusión.

Realizamos siete réplicas del experimento para disminuir el error, diluyendo hasta 10 -8^ la concentración inicial del fago. Sin embargo, no todas las diluciones sirven para calcular las unidades formadoras de placas realizadas por el fago T7 ya que las demasiado concentradas lisan las bacterias completamente mientras que en las placas con el fago demasiado diluido las placas presentan un césped bacteriano.

Debemos tener en cuenta que con este método subestimamos el número real de partículas víricas ya que únicamente se tienen en cuenta las unidades formadoras de placas.