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Práctica I Histología (EyF I, 1º Grado Veterinaria): Procesado histológico
LABORATORIO DE HISTOLOGÍA:
PROCESADO HISTOLÓGICO
La finalidad de esta práctica es conocer el funcionamiento rutinario de un laboratorio de Histología y la complejidad que encierra la elaboración de una preparación histológica.
Todo el proceso se compone de los siguientes pasos:
1) RECOGIDA E IDENTIFICACIÓN DE LAS MUESTRAS:
Se inicia con la llegada de la muestra al laboratorio de histología. Existen dos maneras de conseguir una muestra de una animal:
A) Biopsia: se extrae una muestra del órgano/lesión a estudiar de un animal vivo ( por endoscopia, cirugía, punch, punción con aguja gruesa, etc).
B) Necropsia: se obtienen muestras de órganos de un animal muerto. En este caso es muy importante que el tiempo transcurrido entre la muerte y la toma de las muestras sea lo más corto posible, para una mejor calidad final de la preparación.
De cada órgano o tejido hay que cortar un pequeño trozo, o el órgano entero, según su tamaño; y también depende del estudio que queramos realizar. La muestra obtenida hay que introducirla en frascos adecuados según su tamaño, y que contienen una solución fijadora.
IDENTIFICACIÓN: el frasco se identifica normalmente con el número de orden de llegada de la muestra al laboratorio y el año en curso. Cada frasco se corresponderá a su vez con una ficha aparte cuyo encabezamiento es el del frasco y además contiene datos sobre: el tejido conservado, la especie de la que procede, la fecha de llegada, la procedencia geográfica, datos del animal, la historia clínica del animal, las lesiones macroscópicas observadas al realizar la biopsia/necropsia, etc. Estas fichas además incluyen un apartado para un diagnóstico probable según la historia clínica y las lesiones macroscópicas y otro para un diagnóstico definitivo tras su estudio histológico.
2) FIJACIÓN:
Las muestras que hemos recogido hay que fijarlas, con el fin de:
A) Evitar su descomposición (autolisis) por los gérmenes y preservar la estructura de los tejidos.
B) Producir una insolubilización de las proteínas. Así se consigue aumentar la dureza de la muestra, con lo que es más fácil de manipular.
No hay un fijador perfecto. Pero el agente fijador empleado más comúnmente es una solución de Formol al 10% (10 ml de formaldehído comercial y 90 ml de agua
Práctica I Histología (EyF I, 1º Grado Veterinaria): Procesado histológico
destilada o solución tamponada). Aunque también se puede otras soluciones fijadoras: congelación, alcohol de 70º-96º, acetona, solución de Bouin, etc.
Es muy importante que el fijador llegue bien a todas las zonas del tejido, para eso tendremos que cuidar que el tamaño de la muestra no sea demasiado grande (máximo 4 x 2 x 2 cm) y que no queden zonas sin cubrir (la proporción pieza/fijador debe ser 1/10).
El proceso de fijación viene a tardar entre 24 y 48 horas empleando esta metodología.
3) TALLADO DE LAS MUESTRAS:
Las muestras, tras el proceso de fijación se tallan con un grosor de 3 ó 4 mm, se van introduciendo en los cassettes , más o menos agrupadas por órganos o por similitud en la dureza al corte, y se vuelven a introducir en formol. Los cassettes se identifican rotulándose a lápiz con la reseña que tenemos tanto en el frasco de fijación como en la ficha.
4) INCLUSIÓN:
Este proceso tiene como fin impregnar el tejido con una sustancia que le confiera la dureza adecuada para poder cortarlo posteriormente en finas láminas, y poder observarlo posteriormente al microscopio. La sustancia que se utiliza normalmente en un laboratorio de histología para este propósito es la parafina , que es una cera que a temperatura ambiente permanece en estado sólido y que al calentarla pasa a ser líquida. En el mercado existen parafinas de distinto tipo y con diferentes puntos de fusión, la más utilizada es la de punto de fusión de 56º-58º.
Desde el formol hasta llegar a la parafina existen distintos pasos en el procesado de una muestra. Seguidamente al formol se produce el paso por alcoholes de graduación creciente, consiguiendo una deshidratación de la muestra, que asegura su perfecta conservación. Pero como su conservación definitiva será tras la inclusión en parafina y el alcohol no es miscible en ésta, necesitamos pasar por una sustancia intermedia que sea miscible tanto con la parafina como con el alcohol, esta sustancia en nuestro caso, es el xilol , que elimina el alcohol y permite la entrada a la parafina.
Todo este proceso lo realiza un aparato denominado inclusor , que consta de una serie de cubetas con diferentes líquidos, por los que han de ir pasando las muestras y permanecer en ellas durante un tiempo determinado. Este equipo es totalmente automático y programable, de forma que solamente tenemos que introducirle el programa que deseamos que ponga en práctica, darle los tiempos que el robot debe permanecer sumergido en cada cubeta y la hora a la que deseamos que termine el proceso.
El programa que nosotros solemos utilizar en este laboratorio es el siguiente:
- Primera cubeta: contiene formol al 10 % , es el punto de partida, aquí únicamente permanecerán durante unos 30 minutos, ya que suponemos que la fijación se ha completado previamente. Aunque normalmente permanecerá unas cuantas horas más, el tiempo que vaya a transcurrir entre el momento de la programación y la hora calculada para el inicio del programa.
Práctica I Histología (EyF I, 1º Grado Veterinaria): Procesado histológico
6) CORTE DE BLOQUES Y OBTENCIÓN DE LAS PREPARACIONES:
La obtención de preparaciones histológicas se realiza mediante la obtención de finas láminas de tejido, las cuales pueden verse al microscopio. Para ello se utiliza un aparato denominado microtomo , que nos corta estas finas láminas a partir del bloque de parafina.
La primera parte en el corte de bloques es fase es el desbastado , que consiste en realizar cortes con el microtomo sobre la muestra, a unas 20 micras, hasta asegurarnos que el corte incluye tejido y no solamente parafina.
Para realizar los cortes definitivos , el microtomo se ajusta a 3 ó 4 micras (1000 micras = 1mm) y, procurando que las cuchillas sean nuevas, hacemos una serie de 6 ó 7 cortes. Los cuales después llevamos con cuidado hasta un baño histológico , que no es más que una cubeta con agua a una temperatura de 37 – 40 ºC, sobre la que se extienden los cortes. Una vez aquí y ayudándonos con un pequeño pincel o aguja histológica, eliminamos los cortes que presenten estriaciones o irregularidades en su superficie hasta quedarnos con un solo corte, que será el que recogeremos directamente del baño mediante un portaobjetos. En ocasiones, trataremos previamente estos portaobjetos con determinadas sustancias para favorecer la adherencia de la muestra.
El siguiente paso es la identificación y secado de las preparaciones. Etiquetamos o rotulamos el porta con la identificación que iba en el bloque y se lleva a una estufa a temperatura de 60ºC, donde se dejan secando durante unos 20 ó 30 minutos, o bien durante 2 ó 3 horas en una estufa de 37ºC. En la práctica, se suele cortar un día y teñimos al día siguiente, tras pasar la noche en la estufa; una vez se han secado los portas, pasamos al proceso de tinción.
7) TINCIÓN:
La mayoría de los tejidos son incoloros al grosor que los hemos cortado (3- micras). Por lo que para facilitar su visualización al microscopio se tiñen con unos colorantes. La mayoría de los colorantes que se utilizan en histología actúan como ácidos o bases. En concreto, la tinción que se usa de manera estándar en histología es la técnica de la Hematoxilina-Eosina. Esta técnica consiste en el empleo de dos colorantes. Uno de ellos, la hematoxilina, es basófilo y nos tiñe estructuras ácidas de las células como el ADN. Mientras que el otro, la eosina es un colorante ácido que tiñe principalmente las proteínas citoplásmicas.
Ya que estos colorantes se utilizan en solución acuosa, el primer paso es el desparafinado de la muestra, para ello introducimos sucesivamente los portas, ya secos, en dos cubetas con xilol. El segundo paso, es rehidratar la muestra, para ello, vamos pasando sucesivamente por alcoholes de graduación decreciente, hasta llegar al agua. De esta forma, dejamos ya listas las preparaciones para permitir la entrada a los diferentes colorantes que queramos usar. Posteriormente, ya que las muestras se conservan mucho más tiempo sin agua, se vuelve a proceder a su deshidratación.
PROTOCOLO DE TINCIÓN RUTINARIA CON HEMATOXILINA-EOSINA
Desparafinado de la muestra:
Práctica I Histología (EyF I, 1º Grado Veterinaria): Procesado histológico
- Xilol: 10´-15´ Rehidratación de la muestra:
- Alcohol de 100º : 5´
- Alcohol de 100º : 5´
- Alcohol de 96º : 5´
- Alcohol de 60º : 5´ Lavado en agua corriente , debajo del grifo, durante 5 minutos. Hematoxilina: 5´- 10´ Lavado en agua corriente durante 5´. Eosina: 30”- 2´ (dependiendo de la concentración del colorante). Lavado en agua corriente durante 5” – 10 “. Deshidratación de la muestra para asegurar su conservación, pasando de nuevo por alcoholes de graduación creciente:
- Alcohol de 96º: 2"- 3"
- Alcohol de 96º: 2"- 3"
- Alcohol de 100º: 2"- 3"
- Alcohol de 100º: 2"- 3" Finalmente y para facilitar el pegado :
- Xilol: 2"- 3"
- Xilol: 2´- 3 ´
Existen otras técnicas tintoriales mas específicas que sirven para teñir sustancias determinadas dentro de los tejidos. Ejs: técnica del PAS para teñir el moco, carmín de Best para el glucógeno, tricrómico de Masson para el colágeno, etc…
8) MONTAJE DE LA MUESTRA:
El último paso es el pegado y montaje de un cubreobjetos sobre la muestra para protegerla. Ponemos una gota del medio de montaje (Eukitt, DPX, …) sobre el cubreobjetos, y dejamos caer suavemente el portaobjetos sobre él. Para asegurarnos un secado perfecto, evitaremos manipular estas preparaciones durante al menos un día tras el montaje.
OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO:
Finalmente ya tenemos la preparación histológica, que podemos observar al microscopio óptico. Para ver las preparaciones histológicas con el microscopio, empleamos siempre en primer lugar el objetivo de menor aumento 4x, para lograr una visión global de la muestra y situarnos sobre las zonas concretas de estudio. Una vez localizadas éstas, pasamos a objetivos de mayores aumentos, normalmente 10x, 20x y 40x, lo que suele ser suficiente para una correcta visualización histológica. Cuando vayamos a quitar la preparación, hay que volver al objetivo de 4x, para evitar dañar las lentes ópticas.
Práctica II Histología (EyF I, 1º Grado Veterinaria): Epitelios de revestimiento
1.B) - Epitelio simple cúbico: Una capa única de células poliédricas bajas ( cúbicas ) con núcleos redondeados de ubicación central. Las células presentan polarización de sus orgánulos (Golgi apical supranuclear, RE basal). Localización típica : en los túbulos contorneados renales, conductos excretores de las glándulas, conductos biliares, epitelio ovárico, epitelio de la retina.
1.C) - Epitelio simple cilíndrico: Similar al anterior, pero las células son poliédricas altas ( cilíndricas, más altas que anchas ) y los núcleos más bien ovalados y de localización basal. También existe polarización. En la cara apical podemos encontrar especializaciones: microvellosidades, polo mucoso cerrado y cilios. Localización típica: intestino y túbulos colectores renales (microvellosidades), estómago (polo mucoso cerrado), y trompa uterina y bronquiolos (cilios).
A.1.d) - Epitelio pseudoestratificado cilíndrico: El prefijo pseudo- significa falso. Es un epitelio simple , aunque puede ser confundido con un epitelio estratificado ya que los núcleos aparecen a distintos niveles. Lo que sucede es que está formado por células de diferentes alturas dando una apariencia de varias capas, aunque todas las células que integran este epitelio descansan en la membrana basal. También puede tener especializaciones: cilios, estereocilios. Localización típica :
- con cilios y células caliciformes aparato respiratorio: cavidad nasal, laringe, tráquea y bronquios. Por esta localización también se le conoce como “epitelio respiratorio”.
- Con estereocilios Epidídimo.
- Sin especialización Bolsa de Fabricio.
2)- Epitelios estratificados: 2.A) - Epitelio estratificado plano queratinizado: Posee varias capas o estratos, cuyas células se van aplanando progresivamente a medida que se aproximan a la superficie del epitelio. Recordad, si el epitelio posee más de una capa lo nombramos en función de la morfología de la capa más alejada de la membrana basal:
-Estrato basal: el más profundo. Células basófilas (muchos ribosomas) cúbicas o cilíndricas bajas sobre membrana basal. Producen los demás estratos por mitosis celular. -Estrato espinoso: una o varias capas de células grandes, acidófilas y poliédricas. Presentan separación entre células (“canales interfaciales”) que permiten la nutrición y múltiples desmosomas con aspecto de espinas. -Estrato granuloso: una o varias capas de células cada vez más aplanadas. El núcleo comienza a degenerar y en su citoplasma podemos observar numerosos gránulos basófilos de queratohialina (precursor de la queratina). Se pierden los canales interfaciales.
-Estrato lúcido: acidófilo y homogéneo. Compuesto por células muy aplanadas con grandes depósitos de queratina. Aún podemos observar algunos núcleos degenerados.
Práctica II Histología (EyF I, 1º Grado Veterinaria): Epitelios de revestimiento
-Estrato córneo: células anucleadas y aplanadas muy acidófilas dispuestas a modo de escamas que se van desprendiendo progresivamente. Localización típica : piel (epidermis), papilas linguales, mucosa de los carrillos, paladar duro,
esófago de algunas especies, proventrículo de las aves, preestómago de rumiantes.
2.B) - Epitelio estratificado plano no queratinizado: En el EEP no queratinizado vemos que los estratos no están tan bien definidos como en el anterior, y por tanto no se diferencian como tales. Las células más superficiales poseen núcleo. No observamos escamas de queratina. Localización típica : cavidad oral, orofaringe, esófago, canal anal,vagina.
2.C) - Epitelio estratificado cúbico: Las capas basales son más o menos cúbicas o irregulares y la más superficial es claramente cúbica. Aparece en conductos excretores en algunas glándulas, como glándulas salivares y sudoríparas, y en la conjuntiva ocular.
2.D) - Epitelio estratificado cilíndrico: Las capas basales son más o menos cúbicas o irregulares y la más superficial es claramente cilíndrica. Aparece en conductos excretores de gran calibre, como por ejemplo el conducto excretor de la glándula parótida y el del páncreas, y en la uretra_._
2.E) - Epitelio de transición: Se trata de un epitelio estratificado especial, localizado en vías urinarias. Por ello se le llama también epitelio urinario o urotelio. La morfología del epitelio se adapta al estado funcional del órgano al que reviste. Por tanto su forma varía: las células superficiales adoptan una forma globosa cuando el órgano está vacío, y se aplanan cuando el órgano se distiende. Localización típica : pelvis renal, uréteres y vejiga urinaria.
Práctica II Histología (EyF I, 1º Grado Veterinaria): Epitelios de revestimiento
Epitelio pseudoestratificado cilíndrico ciliado con células caliciformes: Preparación :
TRÁQUEA Este tipo de epitelio tiene principalmente tres tipos celulares diferentes: unas células
basales que no llegan a la luz, las células cilíndricas ciliadas muy altas, y las células o
glándulas caliciformes, con forma de copa o cáliz, muy poco teñidas y con núcleo basal.
Epitelio estratificado plano queratinizado: Preparación : ALMOHADILLA PLANTAR Y LABIO. Identifica cada uno de los estratos del epitelio. Identifica los gránulos de queratohialina y los desmososmas que unen las células del estrato espinoso.
Epitelio estratificado plano NO queratinizado: Preparación : ESÓFAGO y LABIO. Identifica este tipo de epitelio y fíjate bien la diferencias con el queratinizado. ¿Por qué en el
esta preparación de labio podemos observar tanto el queratinizado como el no queratinizado?.
Recuerda que el esófago de algunas especies sí posee queratina.
Práctica II Histología (EyF I, 1º Grado Veterinaria): Epitelios de revestimiento
Epitelio estratificado cúbico: Preparación : CÓRNEA
Localizar este tipo de epitelio en la córnea. ¿Por qué piensas que son necesarias tantas capas en la córnea?.
Epitelio de transición: Preparación : VEJIGA URINARIA****. Este tipo de epitelio se denomina así porque es intermedio entre un epitelio plano y uno cúbico, por tanto, debes ver toda la preparación para poder diferenciarlos. ¿Cómo estará la
vejiga, llena o vacía?
Práctica III Histología (EyF I, 1º Grado Veterinaria): Epitelio glandulares
2) - ENDOCRINAS:
Producen hormonas que son vertidas directamente al torrente sanguíneo (no existen conductos excretores).
2.A) - Unicelulares: Las glándulas endocrinas unicelulares son células aisladas homogéneamente distribuidas
por diferentes órganos y sistemas. Se conoce a este conjunto de células como “sistema endocrino difuso” o también sistema APUD. Son difíciles de diferenciar con Hematoxilina-
Eosina.
2.B) - Multicelulares: Las glándulas endocrinas multicelulares se clasifican fundamentalmente según la
disposición de las células:
- Cordonales o compactas: los elementos celulares forman cordones o agrupaciones sin forma definida, y entre ellas los capilares sanguíneos. Ejs: islotes de Langerhans (páncreas endocrino), glándula adrenal, paratiroides, hipófisis, etc.
- Foliculares: las células se disponen como una única capa de células cúbicas alrededor de una cavidad central (“folículo”) donde se vierte y almacena el producto de secreción, para luego ser reabsorbido y utilizado por las células para terminar la síntesis de hormona, que será vertida a sangre.
Práctica III Histología (EyF I, 1º Grado Veterinaria): Epitelio glandulares
PREPARACIONES
Glándula unicelular: Preparación : TRÁQUEA Recuerda localizar el epitelio, ¿qué tipo de epitelio posee la tráquea? ¿qué tres tipos de células predominan? ¿qué tipo de secreción produce este tipo de glándula según su tinción?
Glándula exocrina mixta: Preparación : GLÁNDULA SALIVAL ¿Por qué decimos que es una glándula exocrina mixta? Identifica un adenómero mucoso, un
adenómero seroso y un adenómero mixto. Identifica un conducto, ¿qué tipo de epitelio
pose? ¿serías capaz de localizar un epitelio estratificado cúbico?
Práctica IV Histología (EyF I, 1º Grado Veterinaria): Tejidos conjuntivos
TEJIDOS CONJUNTIVOS
El tejido CONJUNTIVO o CONECTIVO es un tejido de origen mesodérmico que proporciona soporte estructural y metabólico al resto de tejidos. Incluye a un amplio grupo de tejidos que presentan diferencias morfológicas y estructurales. Está constituido por dos componentes: células y matriz extracelular o sustancia fundamental, que caracteriza a esta clase de tejido y además determina sus tipos.
- SUSTANCIA FUNDAMENTAL o MATRIZ EXTRACELULAR: Es el componente dominante y sus características nos definen el tipo de tejido conjuntivo. La abundancia de matriz extracelular (a diferencia del tejido epitelial) caracterizada al tejido conjuntivo. Está integrada por dos componentes:
1.a) SUSTANCIA FUNDAMENTAL AMORFA (SFA): formada por una especie de gel que rellena el espacio que queda entre células y fibras. Compuesto por glucosaminoglucanos, proteoglucanos y glucoproteínas estructurales.
1.b) SUSTANCIA FUNDAMENTAL CONFIGURADA (SFC): constituida por fibras de naturaleza proteica, lo que le da al tejido cierta elasticidad y resistencia a la tracción. En la SFC existen tres tipos de fibras:
o Fibras de colágeno: son el tipo de fibra más frecuente. Forman fibras flexibles que confieren al tejido una gran resistencia a la tensión. Características tintoriales: son acidófilas, tiñéndose de rosa con Hematoxilina- Eosina.
o Fibras reticulares: son fibras muy delgadas que se disponen a modo de red, formando el estroma de órganos hematopoyéticos y linfoides. También en vasos, riñón, etc. Características tintoriales: visibles con tinciones de Ag.
o Fibras elásticas: son muy delgadas y elásticas, pueden estirarse mucho sin romperse. Características tintoriales: con H-E dan una coloración acidófila (rosa) muy brillante. Refringentes.
- CÉLULAS , que se pueden agrupar en:
2.a) CÉLULAS FIJAS: población de células estable. Son responsables de la síntesis y mantenimiento del material extracelular ( células mesenquimatosas , fibrocitos , condrocitos , osteocitos ,…), del metabolismo de la grasa ( adipocitos ).
2.b) CÉLULAS LIBRES: son una población cambiante de células que se desplazan a través de la sustancia fundamental. Entre ellas tenemos: mastocitos , macrófagos , células plasmáticas y leucocitos ( linfocitos , neutrófilos y eosinófilos ).
Práctica IV Histología (EyF I, 1º Grado Veterinaria): Tejidos conjuntivos
TIPOS DE TEJIDO CONJUNTIVO:
Los tejidos conectivos se clasifican según la proporción de células y sustancia fundamental, de manera que la denominación de las variedades refleja la organización estructural de sus componentes.
A) TEJIDOS CONJUNTIVOS EMBRIONARIOS:
A.1) TEJIDO CONJUNTIVO MESENQUIMATOSO: se considera el precursor de los diferentes tipos de células y tejidos conjuntivos adultos. Se compone de células mesenquimatosas rodeadas de abundante SFA. No hay fibras. Localización : en el embrión.
A.2) TEJIDO CONJUNTIVO MUCOSO: se trata de un tejido pobre en células (fibrocitos), con algunas fibras de SFC y rico en SFA (ácido hialurónico), la cual le da un aspecto gelatinoso. Localización : en el embrión, cordón umbilical y cresta de aves.
B) TEJIDOS CONJUNTIVOS ADULTOS:
B.1) TEJIDOS CONJUNTIVOS:
B.1.1) TEJIDO CONJUNTIVO LAXO : es la variedad de tejido conectivo más común y donde hay cierto equilibrio entre sus constituyentes. De las células predominan los fibroblastos, aunque también se pueden ver todos los otros tipos celulares. La matriz extracelular está conformada por SFC sin una orientación definida, y los espacios entre las células y las fibras están ocupados por SFA muy rica en ácido hialurónico. Localización : tejido subcutáneo, lámina propia, submucosa, estroma de órganos y serosas.
B.1.2) TEJIDO CONJUNTIVO DENSO : en este tejido hay un predominio de la SFC sobre la SFA y las células. La distribución y orientación de las fibras, especialmente de las fibras colágenas, determinan la resistencia a la tensión de este tejido. Según la orientación de los haces de fibras se distinguen dos tipos: tejido conjuntivo denso irregular y tejido conjuntivo denso regular. B.1.2.1) TEJIDO CONJUNTIVO DENSO IRREGULAR: en este tejido hay un predominio de fibras colágenas en forma de gruesos haces dispuestos al azar , dejando escasos espacios que son ocupados por fibrocitos y por SFA. Localización: dermis, cápsulas de órganos y articulaciones, periostio y pericondrio B.1.2.2) TEJIDO CONJUNTIVO DENSO REGULAR: está constituido por gruesos haces de fibras colágenas dispuestas de una forma ordenada y paralela , con gran resistencia a la tracción. Entre los haces de fibras aparecen escasos fibrocitos. Localización: tendones, ligamentos, fascias y la córnea.
B.1.3) TEJIDO CONJUNTIVO ELÁSTICO : tipo de tejido conjuntivo donde predominan las fibras elásticas sobre las colágenas siendo escasa la presencia de células (fibroblastos) y de SFA. Las fibras elásticas están paralelas entre sí y forman láminas delgadas. Localización: ligamentos de la nuca y vertebrales, y pared de algunas arterias. B.1.4) TEJIDO CONJUNTIVO RETICULAR : está formado por fibras reticulares y abundantes células reticulares, células estrelladas cuyas prolongaciones citoplasmáticas están unidas con las de las células vecinas. Las células y las fibras reticulares constituyen una red tridimensional sobre la que se asientan las células típicas del órgano
Práctica IV Histología (EyF I, 1º Grado Veterinaria): Tejidos conjuntivos
B.2.3) TEJIDO ÓSEO : el tejido óseo es un tejido de sostén caracterizado porque la matriz extracelular está calcificada, lo que le confiere una gran dureza. Las células del hueso, denominadas osteocitos, se localizan en unas lagunas (espacios) denominados lagunas óseas.
a) ESTRUCTURA MACROSCÓPICA: existen dos variedades de tejido óseo: tejido óseo compacto , que está compuesto por una masa ósea compacta sin espacios; y el tejido óseo esponjoso , constituido por finas trabéculas que se entrecruzan, formando una red tridimensional cuyos espacios están intercomunicados y albergan la médula ósea. b) ESTRUCTURA MICROSCÓPICA: el tejido óseo, por ser un tejido conectivo se diferencia en células y una matriz extracelular: b.1) Células: o Osteoblastos: son las células que sintetizan la matriz ósea. Se disponen en la superficie de las espículas óseas, a modo de epitelio simple cúbico, con prolongaciones citoplasmáticas que se introducen en la sustancia fundamental. o Osteocitos: son células que pierden la capacidad de síntesis de matriz osteoide, quedando atrapadas en la laguna ósea. Son las células principales del hueso maduro y proceden de las anteriores. o Osteoclastos: se originan a partir de monocitos. Se localizan en la superficie de reabsorción ósea, constituyendo una monocapa. Al microscopio, aparecen como células de gran tamaño, y son multinucleadas. b.2) Matriz ósea: la matriz extracelular tiene dos componentes: orgánicos e inorgánicos. El componente orgánico está formado por colágeno y SFA. El componente inorgánico está formado por depósitos de fosfato cálcico fundamentalmente, que es lo que da dureza al hueso. Toda la matriz ósea está recorrida por un sistema de cavidades que comunican entre sí y que contienen a las células óseas y a sus prolongaciones.
b.3) Periostio y endostio: el periostio es una capa de tejido conjuntivo muy vascularizado que cubre la superficie externa del hueso, a excepción de las superficies articulares. El endostio es una fina capa conjuntiva que reviste la cavidad medular y las trabéculas del hueso esponjoso. c) FORMACIÓN DEL TEJIDO ÓSEO: Existen dos tipos de osificación: intramembranosa y condral. c.1) Osificación intramembranosa o directa: la intramembranosa tiene lugar en el proceso de formación de los huesos planos, a partir del tejido mesenquimatoso. c.2) Osificación endocondral o indirecta: es el tipo de osificación que tiene lugar fundamentalmente en los huesos largos y se caracteriza porque el tejido cartilaginoso hialino es sustituido por tejido óseo. Distinguimos dos partes:
- Osificación pericondral: transformación del pericondrio cartilaginoso en periostio óseo.
- Osificación endocondral: osificación de la zona central del cartílago. Los condrocitos se hipertrofian y aparecen en una disposición típica (“pila de monedas”), degeneran y dejan una serie de cavidades (cartílago calcificado). Estos restos de cartílago calcificado sirven como punto de apoyo a la osificación.
Práctica IV Histología (EyF I, 1º Grado Veterinaria): Tejidos conjuntivos
PREPARACIONES
Tejido conjuntivo laxo: Preparación : ESTÓMAGO Localiza el tejido conjuntivo laxo en lámina propia y submucosa. ¿Qué tipos de células aparecen? ¿Qué tipo de epitelio presenta el estómago?
Preparación : TRÁQUEA. Localiza el tejido conjuntivo laxo en lámina propia-submucosa. Identifica el epitelio de la tráquea y el tejido glandular que aparece en la lámina propia-submucosa.
Tejido conjuntivo denso irregular: Preparación : DERMIS ( labio (Tricrómico de Masson) y oreja ). ¿Cómo lo diferenciarías del TC laxo?. Recuerda el epitelio de la piel y de la mucosa oral.
Tejido conjuntivo denso regular: Preparación : TENDÓN****. ¿Cómo se denominan las células que predominan en este tejido?
Tejido conjuntivo elástico: Preparación : AORTA****. Diferencia las dos preparaciones de aorta (H-E y tinción de Gallego). ¿Qué tipo de epitelio posee la aorta? ¿Cómo se denomina ese epitelio?.
