replicación ADN. Mecanismos, Diapositivas de Biología

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• CLASE

Ciclo celular

INICIACIÓN

Origenes de replicación -secuencias de replicación autónoma SRA

• complejo de origen de replicación (COR)
• reconocimiento por parte de la primasa ( ARN

polimerasa ADN dependiente )

desenrollamiento : helicasa

topoisomerasa tipo I y tipo II

proteinas ssb o desestabilizadores de la hélice

Sintesis de primer : primasa

Elongación

Síntesis de ADN: cadena adelantada o continua

1 Primer + ADN polimerasa

cadena retrasada o discontinua

Numerosos primers + ADN polimerasa, síntesis

de fragmentos de okazaki

Resultado

• (^) https://

www.youtube.com/watch?v=uEwyWgSvLc

• (^) Muestra conteniendo el ADN de interés
• (^) Oligonucleótidos (de entre 20 y 30

nucleótidos) que actuaran como cebadores

(primers) uniéndose específicamente a la

secuencias colindantes con la secuencia

blanco

• (^) 4 desoxirribonucleótidos (dNTPs)
• (^) ADN polimerasa resistente al calor

Video de pcr

• https://youtu.be/TalHTjA5gKU

REPLICACIÓN DE ADN IN VIVO PCR

INICIACIÓN/

DESNATURALIZACIÓN

Helicasas rompen puentes de hidrógeno, p! de enganche deslizante, topoisomerasa, primasa Cambio de temperatura (aumenta) EXTENSIÓN/ HIBRIDACIÓN ADN polimerasa, ADN molde, ligasa, primers (ARN) Fragmentos de Okasaki dNTPs, Taq polimerasa, cebadores/primers (ADN), cambio de temperatura (dismunuye) NO hay fragmentos de Okasaki TERMINACIÓN Telomerasa, ADN polimerasa, segunda lectura de ADNpol Taq polimerasa, cambio de temperatura (aumenta), finaliza con la falta de componentes

• 1.4. ¿Puede haber errores de copiado durante

la PCR? Explique brevemente.

• No, ya que las polimerasas termoestables

utilizadas hoy en dia termoestables y de alta

fidelidad (con actividad “correctora”)

PCR en tiempo real, cuantitativa o q-PCR y

RT-q-PCR

• (^) La q-PCR es una variante de la PCR que amplifica y simultáneamente cuantifica de forma absoluta el producto de la amplificación de ADN
• (^) Se usan fluorocromos o sondas moleculares dependientes de la secuencia
• (^) En el caso de los fluorocromos a medida que se amplifican las moléculas de ADN aumenta el numero de moleculas de fluorocromo unidas y por ende la fluorescencia emitida, que es lo que detecta la maquina
• (^) La RT-q-PCR: es el pasaje de ARN a ADN (transcriptasa inversa) y posterior método usado en la q-PCR

• (^) 1.5. Volviendo al proceso de replicación del

ADN in vivo en eucariotas, durante el mismo

pueden ocurrir errores de copiado, ¿hay

mecanismos que pueden subsanar este

fenómeno? ¿Cuáles?

MUTACIONES

Cambios permanentes en la cadena de ADN Pueden ser beneficiosos o malignos, VARIABILIDAD Fallos en el mecanismo de reparación Pueden ser causados por factores externos Pueden causar una ganancia o pérdida de la función Cél. Germinal= ¡mutación se transmite! Cél. Somática=Sólo afecta al individuo Hay diferentes tipos de mutaciones (se ven en genética)

• (^) 1.6. La electroforesis de ácidos nucleicos es

una técnica complementaria que se utiliza

para visualizar los productos de amplificación

de una PCR. Explique los fundamentos de esta

técnica.y la información que puede obtener de

la misma.