Reporte general Lípidos, Ejercicios de Enzimas y Metabolismo

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Laboratorio de Estructura de Biomoléculas y Cinética Enzimática Lípidos

INTRODUCCIÓN

Los lípidos tienden a ser hidrofóbicos, no polares y están constituidos principalmente de cadenas de carbohidratos, aunque existen ciertas variaciones que veremos más adelante. Los diferentes tipos de lípidos pueden tener estructuras distintas y, por lo tanto, diversas funciones en los organismos. Distribución en la naturaleza Se encuentra en alimentos como son la yema de huevo, leche, semillas, cacahuetes, almendras, aguacate, pescado, algas, grasa animal, entre otros. También se encuentra en las plantas como capa protectora de las hojas e impermeable ante la lluvia, así como en plantas los animales también lo tienen como protección en el pelaje o para mantener calor si están en temperaturas muy bajas. Clasificación Importancia biológica Los lípidos constituyen el material fundamental de todas las membranas celulares y subcelulares, en las que aportan la bicapa de fosfolípidos, forman la mayor reserva de energía de los organismos, las grasas funcionan como aislante térmico muy efectivo para proteger a los organismos del frío ambiental, también las grasas sirven de un amortiguador mecánico efectivo, que protege los órganos internos como el corazón y el riñón. Los lípidos funcionan como hormonas de gran relevancia para la fisiología humana, tienen una función nutricional importante y figuran en la dieta tipo

Diversos procesos de extracción pueden llevarse a cabo para el aislamiento y posterior caracterización de los lípidos. El método más utilizado para la extracción de lípidos es el método Bligh-Dyer, útil para aislar lípidos contenidos en tejidos y alimentos que presentan alto contenido de agua. Se utiliza una solución que contenga disolventes orgánicos, como cloroformo, hexano y etanol, con la cual se logra homogeneizar y formar dos fases miscibles, para realizar una extracción. A continuación se presenta una lista de disolventes orgánicos de acuerdo a su carácter polar: Disolvente Constante dieléctrica (ɛ) Hexano 1. Tetracloruro de carbono 2. Benceno 2. Tolueno 2. Eter 4. Cloroformo 4. Acetato de etilo 15. Acetona 20. Etanol 24. Metanol 32. Agua 81 Tabla 1. Disolventes ordenados de acuerdo a su constante dieléctrica. La polaridad de un disolvente está ampliamente relacionada con su valor de constante dieléctrica, la cual es una propiedad macroscópica que indica la capacidad de transmitir corriente eléctrica en un medio dado. Adicionalmente, conforme el valor de la constante dieléctrica aumenta, el disolvente se vuelve más polar, y por ende, si un disolvente tiene una constante dieléctrica baja, presentará carácter no polar. La cromatografía es otra técnica de extracción que puede ser utilizada para separar los compuestos lípidos dentro de una solución líquida, esta debe llevarse a cabo en en capa fina, ya que conocer el carácter polar de los compuestos y los disolventes es necesario para llevar a cabo una separación efectiva.

Dependiendo de qué lípidos se requieran extraer, se utilizarán diversos disolventes orgánicos para su separación. Por ejemplo, si se tiene una mezcla de lípidos que contiene fosfolípidos, esfingolípidos, ácidos grasos y esteroles esterificados, será necesario utilizar un eluyente que contenga cloroformo, metanol, ácido acético y agua en proporción 65%-25%-4%-2%, donde los fosfolípidos, esfingolípidos, ácidos grasos y esteroles esterificados se irán reteniendo en este orden mencionado. Esquema 1. Diagrama que ejemplifica el método de extracción de Bligh-Dyer. Ensayos de caracterización Al utilizar el método de extracción de cromatografía, se pueden utilizar indicadores como yodo e indicadores fluorescentes para revelar los compuestos separados, para a su vez obtener la distancia recorrida por estos y calcular los frentes de retención, que pueden ser comparados con los encontrados en bibliografía. Deben marcarse los espacios en la capa fina, ya que el revelado de los componentes lipídicos es temporal. Ensayos de cuantificación La cantidad de lípidos presentes en una muestra se pueden determinar mediante cromatografía de gases utilizando un cromatógrafo de gases, el cual arrojará la cantidad de lípidos en una muestra con precisión, pero no arrojará valores muy pequeños. También se puede utilizar el método de espectrofotometría para determinar la concentración de lípidos en un compuesto dado. Se deben preparar soluciones aforadas y colocarlas en una gradilla para obtener las bandas de longitud de onda absorbida de grupos funcionales específicos y así cuantificar los lípidos presentes.

● 2.5 cm ● 3.5 cm ● 4.3 cm ● 4.7 cm Distancia recorrida por el eluyente: 7 cm. Con estos datos calculamos el Rf de las marcas obtenidas (Rf= distancia recorrida por la muestra/distancia recorrida por el eluyente). En base a la tabla de los Rf de los lípidos neutros podemos identificar de cuál se trata. ● 2.5/7 = 0.35 Fosfolípidos ● 3.5/7 = 0.50 Glucolípidos ● 4.3/7 = 0.61 Trimiristina ● 4.7/7 = 0.67 Colesterol CONCLUSIÓN Se lograron extraer compuestos lipídicos impuros mediante métodos de centrifugación y reflujo en cerebro de pollo y nuez moscada. Con el uso de la técnica de cromatografía en capa fina, se pudieron determinar los lípidos encontrados en las soluciones preparadas. CUESTIONARIO

1. Escribe la estructura del ácido mirístico y del triglicérido trimiristina. Señala con colores las
2. subunidades que los constituyen.
3. Cita las principales propiedades físicas y químicas que deben de tenerse en cuenta en el aislamiento de un lípido. Párrafo de propiedades.
4. Ilustra con un esquema los procedimientos usados actualmente en la extracción, separación e identificación de lípidos. Párrafo de extracción y purificación.
5. Elabora una lista de disolventes orgánicos en orden de polaridad. Párrafo de extracción y purificación.
6. ¿Qué es la constante dieléctrica? Párrafo de extracción y purificación.
7. Una mezcla de lípidos que contiene fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilcolina, esfingomielina, palmitato, n-tetradecanol, triacilglicerol y colesterol se aplica a una columna de sílica gel. La columna se lava con disolventes de polaridad creciente a) ¿Que disolventes emplearías para fluir estos lípidos? b) ¿En qué orden esperas que los lípidos se vayan obteniendo en la salida de la columna? Párrafo de extracción y purificación.
8. Describe dos métodos para identificar lípidos en la cromatografía en capa fina. Párrafo Ensayos de caracterización.
9. Describe dos métodos para cuantificar lípidos. Párrafo Ensayos de cuantificación. BIBLIOGRAFÍA Lípidos. (n.d.). Retrieved from https://es.khanacademy.org/science/biology/macromolecules/lipids/a/ lipids

Propiedades generales físicas y químicas de los lípidos. Retrieved from http://energiayconsumo16in.blogspot.com/2016/03/propiedades-generales-fisicas-y.html

Lamarque, A., Maestri, D., et al. (2008) Fundamentos Teórico-Prácticos de Química Orgánica.

Argentina: Editorial Encuentro. ISBN: 978-987-1432-09-