Prácticas de Fisiología Humana I: Exploración Funcional de la Sangre - Prof. Aira, Apuntes de Anatomía

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PRÁCTICAS DE FISIOLOGÍA HUMANA I

Departamento de Fisiología

Facultad de Farmacia

Práctica 1: Exploración funcional de la sangre. Recuentos celulares.

Fórmula Leucocitaria

La sangre es una suspensión de células en un líquido llamado plasma que circula por el sistema vascular, formado por vasos sanguíneos de diverso calibre.

El plasma constituye aproximadamente el 55-60% del volumen total de la sangre, está formado en su mayor parte (90%) por agua, en la que se hayan disueltas diversas sustancias entre las que destacan las proteínas plasmáticas, lípidos, carbohidratos, electrolitos y derivados del catabolismo celular.

Las células sanguíneas constituyen aproximadamente el 40-45% del volumen total sanguíneo. Son de tres tipos diferentes: hematíes o eritrocitos, leucocitos y plaquetas, y todas ellas se originan en un tejido altamente especializado, localizado en la médula ósea.

Para preservar la constancia del medio interno, las células hemáticas han de mantenerse constantes. Por eso las células viejas o desgastadas son destruidas y renovadas continuamente. La cantidad de cada tipo de células sanguíneas constituye un parámetro constante para cada especie, con las variaciones normales debidas a la edad y al sexo. Este parámetro sólo se verá alterado en determinadas circunstancias ambientales o patológicas

Las pruebas de recuentos celulares tienen por objeto determinar la concentración de los distintos tipos celulares presentes en la sangre. Permiten detectar anomalías como anemias y policitemias en el caso de los glóbulos rojos, y leucopenias y leucocitosis en el de los glóbulos blancos.

Los eritrocitos o hematíes son responsables del transporte de oxígeno desde los pulmones hasta el resto de las células de nuestro cuerpo y del transporte de dióxido de carbono desde las células de órganos y tejidos hasta los pulmones. Estas células, altamente especializadas, han perdido su núcleo y poseen una proteína conjugada: la hemoglobina, formada por un pigmento (grupo hemo) combinado con una proteína (globina).

A continuación se dan algunas cifras normales de hematíes expresadas en millones/mm^3 o terahematíes (10^12 )/Litro de sangre.

Mujer............ 4,8 (4,2 - 5,4) Hombre........... 5,4 (4,6 - 6,2)

Rata............. 8,9 (7,2 - 9,6) Ratón............ 9,3 (7,7 - 12)

Los leucocitos o glóbulos blancos desempeñan una función de defensa, protegiendo al organismo contra microorganismos patógenos y toxinas. Muchas infecciones estimulan a la médula ósea a liberar a la corriente sanguínea grandes cantidades de leucocitos que normalmente están en reserva, lo que se evidencia como un aumento en el número de células blancas en la sangre periférica. También se produce un aumento en leucocitos cuando ha habido lesión de tejidos Este incremento es fácilmente detectado con un simple recuento y

a continuación se realiza el recuento de eritrocitos con el objetivo 40X. El recuento de los hematíes se lleva a cabo en 5 cuadrados grandes, concretamente los de las cuatro esquinas y uno cualquiera del centro. Se cuentan todas las células que están en el interior de cada cuadrado pequeño, y de los que tocan y/o montan los márgenes únicamente se cuentan los que tocan y/o montan los lados inferior e izquierdo.

Figura de la cuadrícula de la cámara de Thoma

d. Resultados : Teniendo en cuenta el número de hematíes contados ¿Cuántos hematíes habrá en 1 mm^3 de sangre? ¿Y en 1 litro de sangre? Recordar:

 que la cámara consta de 400 cuadrados pequeños

 que la sangre se ha diluido previamente

 y que hay que tener en cuenta el volumen de la cámara

Recuento de leucocitos

a. Dilución de la sangre 1:

El líquido de dilución que se utiliza es el líquido de Turck (ácido acético - violeta de genciana), mediante el cual se eliminan todos los elementos celulares presentes en la sangre con la excepción de los leucocitos.

b. A continuación, el procedimiento es igual al utilizado para el recuento de eritrocitos.

c. Se cuentan al microscopio con el objetivo 10X todos los leucocitos que existen en el cuadrado grande de la cámara de Thoma. De los que tocan las líneas exteriores, se cuentan los que lo hacen en la línea inferior e izquierda

d. Resultados : Teniendo en cuenta el número de leucocitos contados ¿Cuántos leucocitos habrá en 1 mm^3 de sangre? ¿Y en 1 litro de sangre?

El frotis sanguíneo, una vez seco, se somete a un proceso de fijación y posteriormente a una tinción mediante un colorante adecuado.

Los colorantes más empleados para la tinción hematológica están constituidos fundamentalmente por la mezcla de eosina (colorante ácido) y azul de metileno (colorante básico). Mediante este tipo de colorantes se pueden distinguir los siguientes aspectos morfológicos de las células:

a) Forma, dimensiones y contorno de las células sanguíneas b) Núcleo celular y restos de cromatina: color púrpura c) Granulaciones:

• Eosinófilos: color anaranjado
• Basófilos: color azul oscuro
• Neutrófilos: color violeta d) Hematíes: color rosa pálido e) Reticulocitos: color azulado

Diferenciación

A continuación se realiza la identificación de cada tipo de leucocito al microscopio con el objetivo de inmersión (x100), el cual se introduce en el interior de una gota de aceite de cedro previamente depositada sobre el portaobjetos.

Para la identificación de cada tipo de leucocito nos fijamos en:

 Tamaño de la célula  Presencia o no de granulaciones en el citoplasma  Color y tamaño de los gránulo citoplasmáticos  Forma, color y posición del núcleo

Granulocitos : Son leucocitos de 10-14 micras de diámetro. Su núcleo presenta diversas lobulaciones, por esa razón también se conocen como polimorfonucleares, y su citoplasma contiene granulación. En función del tipo de granulación se diferencian los tres subtipos de granulocitos: neutrófilos (granulación fina neutrófila), eosinófilos (granulación eosinófila: de color anaranjado-rosa oscuro) y basófilos (granulación basófila: color azul oscuro). Los precursores inmediatos de los neutrófilos se llaman neutrófilos cayados o bandas y se caracterizan por un núcleo menos segmentado.

Linfocitos : Son células cuyo tamaño varía entre 6-8 a 10-20 micras dependiendo de su estado de activación. Son los principales efectores de la respuesta inmune específica. Su núcleo es redondo y grande y su citoplasma es en general escaso, basófilo.

Monocitos : Son células de tamaño grande pero variable. Su núcleo tiene un aspecto arriñonado, y coloración azul grisácea en su citoplasma. Su función es fagocitar restos celulares y partículas, lo que los convierte en elementos clave para la respuesta inmunitaria no específica.

TIPO TAMAÑO

(μm)

CITOPLASMA

Aspecto

NÚCLEO

Aspecto

NEUTRÓFILO 9-

Granulación fina

violeta

Multilobulado

EOSÍNOFILO 10-

Granulación gruesa anaranjada

Bilobulado o en banda

BASÓFILO 8-

Granulación irregular azul oscuro

Lobulado cubierto por la granulación

LINFOCITO 6-20 Sin gránulos

Redondo, ocupa casi todo el espacio celular

MONOCITO 10-20 Sin gránulos Arriñonado