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tecticas de cultivo celular, Diapositivas de Biología Celular

esta informacion habla sobre en cultivo celular y enfermedades

Tipo: Diapositivas

2021/2022

Subido el 26/04/2022

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INTEGRANTES
UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN MARTÍN
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE ENFERMERÍA
MICROBIOL OGÍA Y P A RA CITOLOGPIA
Alejandro David Ollague Escudero
Dorkas Danny Rivas Mego
Yasser Cristina Vargas Casique
Karly Chiarel Upiachihua Pezo
Dana Sofia Mestanza Grandez
Nina Liesset Rojas Carbajal
Hans Fredy del Aguila Flores
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INTEGRANTES

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN MARTÍN

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE ENFERMERÍA

MICROBIOLOGÍA Y PARACITOLOGPIA Alejandro David Ollague Escudero Dorkas Danny Rivas Mego Yasser Cristina Vargas Casique Karly Chiarel Upiachihua Pezo Dana Sofia Mestanza Grandez Nina Liesset Rojas Carbajal Hans Fredy del Aguila Flores

TÉCNICAS DE CULTIVO

CELULARES PARA EL

AISLAMIENTO E

IDENTIFICACIÓN DE LAS

INFECCIONES VIRALES

¿Qué contienen los medios para el cultivo de células? Hasta los años ´ 70 , el cultivo de tejidos parecía resultar de la fusión entre la ciencia y la brujería. De a poco, los fluidos coagulados (como en el experimento de Harrison)fueron reemplazados por placas con medios líquidos que contenían pequeñas cantidades de una serie de moléculas necesarias para la supervivencia y multiplicación celular: sales, glucosa, aminoácidos y vitaminas; además, la mayoría de los medios incluían una mezcla poco definida de macromoléculas adicionadas bajo la forma desuero fetal bovino o equino, o extracto crudo de embriones de pollo ( 3 )

  1. Cuaderno De Por Qué E. EDICIÓN No 98 [en línea]. Com.ar. [22 de abril de 2022]. URL disponible en: https://www.porquebiotecnologia.com.ar/Cuadernos/El_Cuaderno _98.pdf

TIPOS DE CULTIVO CELULAR

Actualmente se entiende por cultivo celular al conjunto de técnicas que permiten el mantenimiento de las células 'in vitro', manteniendo al máximo sus propiedades fisiológicas, bioquímicas y genéticas. Se distinguen cuatro tipos de cultivo celular. ( 4 ) CULTIVO DE ÓRGANOS Se coloca el órgano sobre una rejilla situada en la interfase líquido- gas de un medio del que obtiene los nutrientes y al que puede liberar los desechos. Este tipo de cultivo permite mantener, al menos en parte, la arquitectura característica del tejido “in vivo”. Se conservan las interacciones histológicas y, gracias a ello, este tipo de cultivo permite mantener los tipos celulares diferenciados, por lo que representan una buena réplica del tejido de origen. Sin embargo, no crecen y no se pueden propagar. ( 4 )

  1. Gonzales J. INTRODUCCIÓN AL CULTIVO CELULAR[en línea] 2015 [22 de abril del 2022] URL disponible en: http://www.ehu.eus/biofisica/juanma/mbb/pdf/cultivo_celular.pdf

Las células se encuentran dispersas en el medio de cultivo. Su crecimiento no depende del anclaje. Este tipo de cultivo se restringe las células hematopoyéticas, células madre, líneas celulares transformadas y células tumorales.( 4 ) Las células crecen adheridas sobre un soporte sólido(plástico o vidrio). El anclaje al sustrato es un prerrequisito para la proliferación celular( 4 ) Cultivos en monocapa: Cultivos en suspensión: Existen dos tipos de cultivo celular primario

  1. Gonzales J. INTRODUCCIÓN AL CULTIVO CELULAR[en línea] 2015 [22 de abril del 2022] URL disponible en: http://www.ehu.eus/biofisica/juanma/mbb/pdf/cultivo_celular.pdf

HEMAGLUTINACIÓN E INHIBICIÓN DE LA HEMAGLUTINACIÓN

Ventajas: (4)

  • Tiene una alta sensibilidad y especificidad
  • Simple, bajo costo, rápida.
  • Elevada reproducibilidad.

Desventajas: (4)

  • Tratamiento para eliminar los inhibidores inespecíficos, que se encuentran normalmente - en los sueros
  • Comprobar las 4 unidades hemaglutinantes del antígeno cada vez que se efectúa la
  • prueba.
  • Experiencia del personal para leer la prueba e interpretarla.

Equipos: (4)

  • Baño de agua 37° C.
    • Baño agua 56° C.
      • Centrífuga.

CARACTERIZACIÓN ANTIGÉNICA DE

LOS VIRUS DE INFLUENZA.

  1. Gonzales J. INTRODUCCIÓN AL CULTIVO CELULAR[en línea] 2015 [22 de abril del 2022] URL disponible en: http://www.ehu.eus/biofisica/juanma/mbb/pdf/cultivo_celular.pdf

Placas de

microtitulació

n de 96

pozuelos

Micropipetas

y pipeta

multicanal y

puntas.

Tubos de

centrífugas

graduados

(50 mL y 15

mL).

Gradillas. Antisueros específicos Estuche de reactivos de la OMS Solución salina fosfatada (0,01M), pH 7, (PBS). Solución salina normal, (NaCl al 0,85 %). Agua destilada y desionizada estéril.

Materiales y Reactivos (4)

  1. Gonzales J. INTRODUCCIÓN AL CULTIVO CELULAR[en línea] 2015 [22 de abril del 2022] URL disponible en: http://www.ehu.eus/biofisica/juanma/mbb/pdf/cultivo_celular.pdf

TÉCNICAS DE CULTIVOS CELULARES PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE LAS INFECCIONES VIRALES. Los sistemas de cultivo celular son monocapas de células vivas que sostienen el crecimiento de los virus. La replicación del virus se detecta mediante el efecto citopático en la monocapa celular. ( 5 ) Para realizar una prueba viral, se utilizan diferentes tipos de muestras, incluidos sangre, orina, materia fecal (heces), tejidos de órganos, líquido cefalorraquídeo y saliva. El tipo de muestra utilizada para la prueba depende del tipo de infección que pueda estar presente. ( 5 ) 5.González J. Técnicas virológicas y virología clínica. Técnicas y Métodos de Laboratorio Clínico [linea]. 2010 [citado 23 abril 2022];501–10. disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7151762/

Detección de pruebas Las medidas de los realizados frente a los virus tienen dos aplicaciones fundamentales: la infección reciente y determinar la inmunidad. Demostrar la infección actual o reciente requiere la detección en el suero de IgM específico del virus. ( 5 ) Síndromes infecciosos víricos Una forma de abordar el diagnóstico de laboratorio de las infecciones víricas es agrupar las en síndromes clínicos específicos. Se consideran los más importantes: infecciones de las vías respiratorias, mononucleosis infecciosa, infecciones congénitas y neonatales, infecciones del sistema nervioso central, gastroenteritis víricas, hepatitis víricas e infecciones por VIH. ( 5 ) 5.González J. Técnicas virológicas y virología clínica. Técnicas y Métodos de Laboratorio Clínico [linea]. 2010 [citado 23 abril 2022];501–10. disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7151762/

Virus del herpes simple La infección neonatal por el virus del herpes simple (VHS) posee una mortalidad elevada y una morbilidad significativa. Normalmente se adquiere durante el nacimiento por un tracto genital materno realizado. La infección puede ser localizada o sistémica y las manifestaciones se presentan entre la primera y la segunda semana de vida. ( 5 ) Infecciones del sistema nervioso central Las principales infecciones del sistema nervioso central son las meningitis y las encefalitis. En las meningitis se produce la inflamación de las capas meníngeas que recuperan el cerebro, mientras que en las encefalitis el virus se replica en el parénquima cerebral. ( 5 ) 5.González J. Técnicas virológicas y virología clínica. Técnicas y Métodos de Laboratorio Clínico [linea]. 2010 [citado 23 abril 2022];501–10. disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7151762/

INMUNOFLUORESCENCIA

Se ha comprobado que la técnica de inmunofluorescencia es sensible y segura para diagnosticar virus. ( 6 ) Puede ser directa o indirecta y emplearse para detectar antígenos víricos específicos o para demostrar anticuerpos específicos de clase para virus conocidos,proporciona resultados pocas horas después de haber ingresado un paciente en el hospital. Por tanto, es actualmente una de las técnicas principales en uso para el diagnóstico rápido de muchas infecciones víricas en período agudo. ( 6 )

  1. Organizacion P, De L, Salud. ORGANIZACION MUNDIAL DE LA SALUD ÁREA de TECNOLOGÍA Y PRESTACIÓN DE SERVICIOS DE SALUD UNIDAD DE MEDICAMENTOS ESENCIALES VACUNAS Y TECNOLOGIA DE SALUD SERVICIOS DE LABORATORIO Y SANGRE [Internet]. Disponible en: https://www3.paho.org/spanish/ad/ths/ev/labs_ipk.pdf

INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA: Utilizada para la detección de antígeno, usando de suero hiperinmune no conjugado, demostrándose los sitios de reacción por medio de un segundo suero marcado para inmunoglobulina del primer suero. Es más sensible que la inmunofluorescencia directa en la detección de antígenos. ( 6 ) Obtenidos de cultivo y fijados en láminas sobre las que se realiza la reacción antígeno-anticuerpo. La formación de este complejo es evidenciada por una antiglobulina humana marcada con fluoresceína. ( 7 )

  1. Organizacion P, De L, Salud. ORGANIZACION MUNDIAL DE LA SALUD ÁREA de TECNOLOGÍA Y PRESTACIÓN DE SERVICIOS DE SALUD UNIDAD DE MEDICAMENTOS ESENCIALES VACUNAS Y TECNOLOGIA DE SALUD SERVICIOS DE LABORATORIO Y SANGRE [Internet]. Disponible en: https://www 3 .paho.org/spanish/ad/ths/ev/labs_ipk.pdf
  2. Tecnologías. Tecnologías [Internet]. INSTITUTO NACIONAL DE SALUD. 2022 [citado 22 de abril 2022 ]. Disponible en: https://web.ins.gob.pe/index.php/es/investigacion-en-salud/cartera-de- tecnologias/tecnologias#:~:text=La% 20 t%C 3 %A 9 cnica% 20 de% 20 inmunofluorescencia% 20 indirecta,antiglobulina% 20 humana% 20 mar cada% 20 con% 20 fluoresce%C 3 %ADna.

INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA:

La Metodología consta de 2 partes:

  1. Incubación 2 : la muestra de suero, es incubada junto con el sustrado antigénico, si los anticuerpos buscados están presentes en la muestra, estos se unirán al sustrato formando un complejo inmune estable antígeno-anticuerpo, el resto de los componentes de la muestra son eliminados durante una primera fase de lavados. ( 6 )
  2. Incubación 1 : El resultado de la etapa anterior, es incubado junto con el trazador fluorescente, una segunda etapa de lavado, elimina el sobrante del conjugado. El sustrato anticuerpo conjugado es finalmente leído en un microscopio de epifluorescencia. ( 6 )
  3. Biocientífica S.A. Inmunofluorescencia Indirecta (IFI). Fundamentos de la técnica. [Internet]. YouTube. 2014 [citado 22 de abril 2022]. Disponible en: https://www.youtube.com/watch?v=xqvHsIWETjs