Tinción simple Práctica 2.1, Diapositivas de Microbiología

¡Descarga Tinción simple Práctica 2.1 y más Diapositivas en PDF de Microbiología solo en Docsity!

PRACTICA No 2

TINCIÓN SIMPLE

OBJETIVOS:

Elaboración de un frotis bacteriológico

Realizar una tinción simple a partir de una muestra sarro

dental

**PREPARACIONES MICROSCÓPICAS (M. CAMPO LUMINOSO)

1. Preparaciones en fresco (ejm. Montaje húmedo)** Ventaja: Observación de procesos Biológicos Desventaja: Inadecuada observación bacteriológica 2) Preparaciones fijas (Frotis seco) Ventaja: Adecuada observación bacteriológica, identificación de estructuras Desventaja: No se observan procesos biológicos

Tinción simple

Tinción diferencial a) Preparación del frotis b) Fijación c) Tinción

b) Fijación

Finalidad:

• Adherencia de la muestra al vidrio del portaobjetos
• Conservar la estructura celular evitando alteraciones morfológicas

Metodos:

i) Calor

(muy utilizado en preparaciones bacteriológicas)

ii) Agentes químicos: Ejm metanol, formaldheido

c) Tinción

Aplicación de colorantes para teñir a los microorganismos presentes

en el frotis.

1. Sumergir el frotis en el colorante

2. Permitir que el colorante reaccione

3. Lavar con agua corriente

Tinción

Compuestos orgánicos con radicales cromóforos que se fijan a los

componentes celulares.

1)Básicos

- Exhibe carga positiva (+) - Unión a componentes cargados negativamente de la célula

(ejm. ácidos nucléicos y polisacáridos ácidos)

Ejm. Azul de metileno, cristal violeta y la safranina

2) Ácidos

Exhiben carga negativa (-)

• Unión a componentes cargados positivamente de la célula

(Ejm. Proteínas)

Ejm. Eosina, nigrosina , fucsina ácida y el rojo Congo

3) Neutros

- Presentan un equilibrio de cargas en sus radicales cromóforos

(ejm. Mezcla de colorantes básicos y ácidos)

Ejm Giemsa (Sales de amonio y eosina)

COLORANTES

a) Muestra de sarro dental.

b) Microscopio

c) aceite de inmersión.

PROCEDIMIENTO:

1. Tomar muestra.

2. Elaborar frotis (seguir indicaciones)

3. Fijar

4. Tinción simple

5. Encender microscopio

6. Colocar laminillas con las preparaciones proporcionadas y enfocar con

seco débil inicialmente, después con seco fuerte

7. Colocar una pequeña gota de aceite de inmersión y utilizar el objetivo de

100x ( objetivo adecuado para la observación morfológica de bacterias )

8. Hacer un esquema de cada una de las preparaciones que se coloquen en el

microscopio.

MATERIAL y procedimiento.

3. Resuspender y extender la muestra de sarro dental en la solución

salina. (Eliminar grumos)

El aplicador de madera debe incinerarse

antes de ser desechado.

4. Secar al medio ambiente completamente el frotis

5. Realizar la FIJACIÓN de la muestra.

• Se realizan 3 pases en la flama media del mechero -

NOTA IMPORTANTE: En el video falto el tercer

pase sobre la flama (se corta el video en el

segundo)

7. Lavado de la muestra

PRECAUCIONES

Chorro de agua suave

• Que el chorro de agua no

golpe directamente el frotis

Continuar lavando hasta que

del frotis ya no se desprenda

colorante

8. Permitir el secado completo de la laminilla

9. Observar al microscopio

• Utilizar objetivo 100X

(Para observar adecuadamente la morfología bacteriana)

Nota: para facilitar el enfoque a 100X, realizar enfoque primeramente a 10X, 40X y

finalmente 100X

OBSERVACIONES

100X con cámara externa

(teléfono celular) sin zoom

(imagen distinta a

observación real)

100X con cámara externa

(teléfono celular) con zoom

(imagen cercana a

observación real)

OBSERVACIONES

100X con cámara externa

(teléfono celular) sin zoom

(imagen distinta a

observación real)

100X con cámara externa

(teléfono celular) con zoom

(imagen cercana a

observación real)

**1. Coco aislado

2. Estreptobacilos
3. Diplobacilos? o**

Bacilo flexuoso?

4. Diplococos